Hạt chia organic (CarE）Hướng dẫn sử dụng bộ dụng cụ đo hoạt tính

Phương pháp vi lượng 100T/96S

Cần lấy trước khi xét nghiệm chính thức 2-3 Một mẫu có sự khác biệt lớn để dự đoán.Xác định ý nghĩa:

Động vật có vúCarEHạt chia organic (aliesterase), phân bố rộng rãi trong các mô và cơ quan, thuộc họ silanoic hydrolase.CarEXúc tác thủy phân nội sinh và ngoại sinh của các chất có chứa liên kết este, liên kết amide và liên kết lưu huỳnh, nhưng không xúc tác thủy phân cơ sở acetyldan và các chất tương tự của nó.CarE tham gia vào vận chuyển và chuyển hóa lipid và liên quan đến giải độc và trao đổi chất của nhiều loại thuốc, chất độc môi trường và chất gây ung thư, thuốc trừ sâu organophosphate có thể liên kết vàỨc chếCarEHoạt động.

Nguyên tắc xác định:

CarE Có thể xúc tác axit axetic-1-Naphthalene este tạo ra naphthalene este, kết xuất màu sắc giỏ rắn; ở 450 Nm Tốc độ tăng hấp thụ ánh sáng, tính toánCarE Hoạt động.

Bộ xét nghiệm hoạt tính Carboxylaterase (CarE)

Thành phần:

Thuốc thử III: Bột×2 Chi. 4℃Bảo quản, Pre-use 1 Thuốc thử 3, cộng 0,6 ml Ethanol khan hòa tan hoàn toàn; Thuốc thử IV: Bột×2Chi.-20℃Bảo quản, Pre-use 1 Chi thuốc thử bốn, thêm một ít thuốc thử hai hòa tan;

Công thức chất lỏng làm việc: Công thức trước khi sử dụng, hướng tới 1 Trong chai thuốc thử II, thêm thuốc thử III và thuốc thử IV sau khi hòa tan. 1 Chi nhánh, hòa tan hoàn toàn, lọc,4℃Bảo vệ khỏi ánh sáng, có sẵn 1 Hàng tuần.

Các thông số của sản phẩm cụ thể tùy thuộc vào các thông số nhận được hướng dẫn sử dụng sản phẩm

Tự chuẩn bị dụng cụ và vật tư:

Có thể thấy được quang phổ kế, máy ly tâm để bàn, máy di chuyển có thể điều chỉnh,1 ml Đĩa so màu thủy tinh, cối, đá và nước cất.

Chiết xuất chất lỏng enzyme thô:

Chuẩn bị mẫu vi khuẩn, tế bào

Thu thập vi khuẩn hoặc tế bào vào ống ly tâm, sau khi ly tâm được loại bỏ; Theo mỗi 200 Vi khuẩn hoặc tế bào tham gia 400 μl Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (công suất 20% siêu âm Số 3Khoảng cách 10 phútLặp lại 30 thứ cấp);12000g 4 ℃Ly tâm 30 phútLấy thanh dịch ra đợi kiểm tra.

2, tổ chức: theo chất lượng tổ chứcg): Thuốc thử một khối lượng(mL)vì 1：5~10 Hàm lượng (Đề nghị đặt hẹn 0.1g Tổ chức, tham gia 1 ml (Thuốc thử 1) Tắm nước đá đều đặn;12000g 4 ℃Ly tâm 30 phútLấy thanh dịch ra đợi kiểm tra.

3Chất lỏng: Xác định trực tiếp

Hoạt động đo lường:

1. Máy quang phổ/Máy đo Enzyme Preheat 30 phútĐiều chỉnh bước sóng đến 450 NmNước cất được điều chỉnh bằng 0.

2. Thuốc thử 2. 37℃Làm nóng trước khi tắm nước 30 phút。

3. Ống trống:Lấy đĩa đo màu thủy tinh dấu vết/96 Các bảng lỗ, lần lượt tham gia 5μl Nước cất và 200μl Thuốc thử 2, trộn đều nhanh. 450nm Kiểm trađịnh 3 phútThay đổi giá trị hấp thụ bên trong, p. 10 phútCác giá trị hút quang được ghi làA1， 第 190sCác giá trị hút quang được ghi làA2。△ATrống ống= A2-A1

4. Ống đo:Lấy đĩa đo màu thủy tinh dấu vết/96 Các bảng lỗ, lần lượt tham gia 5μl Chất lỏng và 200μl Thuốc thử 2, trộn đều nhanh. 450nm Kiểm tra

định 3 phút Thay đổi giá trị hấp thụ bên trong, p. 10 phút Các giá trị hút quang được ghi làSố A3， 第 190s Các giá trị hút quang được ghi làMẫu A4。△A Xác định ống=A4-Số A3

Lưu ý: Các ống trống chỉ cần được đo một lần.

CarE Công thức tính toán hoạt tính:

a.Công thức tính toán được thực hiện bằng cách sử dụng một đĩa đo màu thạch anh vi lượng như sau:

1Trong tổ chứcCarE Hoạt động

（1）Tính theo nồng độ protein

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: MỗiMg Protein mô trong 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa bởi 1 Một đơn vị enzyme sống.

CarE Enzyme sống(U / mg) Prot)= (△A Xác định ống-△A Trống ống)×V Chống Tổng÷ (Cpr × V) Mẫu÷T

=13.67×(△A Xác định ống-△A Trống ống÷Cpr

（2）Tính theo trọng lượng tươi mẫu

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: Mỗig Tổ chức in 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa bởi 1 Một đơn vị enzyme sống.

CarE Enzyme sống(U / g) Trọng lượng tươi)= (△A Xác định ống-△A Trống ống)×V Chống Tổng×（V Mẫu tổng÷V Mẫu）÷W÷T

=13.67×(△A Xác định ống-△A Trống ống÷W 2trong vi khuẩn hoặc tế bào.CarEHoạt động

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: Mỗi 1 10.000 vi khuẩn hoặc tế bào 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa của oneCarE Sống

Đơn vị tình dục.

CarE Enzyme sống(U/10⁴ tế bào)= (△A Xác định ống-△A Trống ống) ×V Chống Tổng×（V Mẫu tổng÷V Mẫu (÷Hệ Trung cấp (10⁴ tế bào / ml）

÷T = 13,67×(△A Xác định ống-△A Trống ống)÷Hệ Trung cấp (10⁴ tế bào / ml） 3Trong chất lỏng.CarEHoạt động

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: mỗi ml mẫu trong 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa bởi 1 Một đơn vị enzyme sống.

CarE Enzyme sống(U / ml) )= (△A Xác định ống-△A Trống ống)×V Chống Tổng÷V Mẫu÷T

=13.67×(△A Xác định ống-△A Trống ống)

V Anti-Total: Tổng thể tích của hệ thống phản ứng,205μl = 2,05 × 10^-4L；V Mẫu tổng: tổng thể tích dịch thượng thanh,1 ml；V Mẫu: Thêm thể tích chất lỏng(mL)，

0.005 ml；Cpr: nồng độ protein,Mg / ml；Wchất lượng (g）；Tthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (phút），3 phút。

b.Sử dụng 96 Công thức tính toán để xác định tấm lỗ như sau

1Trong tổ chứcCarE Hoạt động

（3）Tính theo nồng độ protein

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: MỗiMg Protein mô trong 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa bởi 1 Một đơn vị enzyme sống.

CarE Enzyme sống(U / mg) Prot)= (△A Xác định ống-△A Trống ống)×V Chống Tổng÷ (Cpr × V) Mẫu÷T

=13.67×(△A Xác định ống-△A Trống ống÷Cpr

（4）Tính theo trọng lượng tươi mẫu

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: Mỗig Tổ chức in 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa bởi 1 Một đơn vị enzyme sống.

CarE Enzyme sống(U / g) Trọng lượng tươi)= (△A Xác định ống-△A Trống ống) ×V Chống Tổng×（V Mẫu tổng÷V Mẫu）÷W÷T

=13.67×(△A Xác định ống-△A Trống ống÷W 2trong vi khuẩn hoặc tế bào.CarEHoạt động

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: Mỗi 1 10.000 vi khuẩn hoặc tế bào 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa của oneCarE Sống

Đơn vị tình dục.

CarE Enzyme sống(U/10⁴ tế bào)= (△A Xác định ống-△A Trống ống)×V Chống Tổng×（V Mẫu tổng÷V Mẫu (÷Hệ Trung cấp (10⁴ tế bào / ml）

÷T = 13,67×(△A Xác định ống-△A Trống ống)÷Hệ Trung cấp (10⁴ tế bào / ml）

3. Trong chất lỏngCarE Hoạt động

CarE Định nghĩa đơn vị hoạt động: mỗi ml mẫu trong 37℃Tăng giá trị hấp thụ xúc tác mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 Định nghĩa bởi 1 Một đơn vị enzyme sống.

CarE Enzyme sống(U / ml) )= (△A Xác định ống-△A Trống ống)×V Chống Tổng÷V Mẫu÷T

=13.67×(△A Xác định ống-△A Trống ống)

V Anti-Total: Tổng thể tích của hệ thống phản ứng,205μl = 2,05 × 10^-4L；V Mẫu tổng: tổng thể tích dịch thượng thanh,1 ml；V Mẫu: Thêm thể tích chất lỏng(mL)，

0.005 ml；Cpr: nồng độ protein,Mg / ml；Wchất lượng (g）；Tthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (phút），3 phút。

Bộ xét nghiệm hoạt tính Carboxylaterase (CarE)