Hạt chia organic (Chết）Hướng dẫn sử dụng bộ dụng cụ đo hoạt tính

Phương pháp vi lượng 100T/96S

Cần lấy trước khi xét nghiệm chính thức 2-3 Một mẫu có sự khác biệt lớn để dự đoán.Xác định ý nghĩa:

Chết Nó thuộc về các enzyme thủy phân axit silic và được tìm thấy rộng rãi trong các mô và huyết thanh động vật khác nhau.Chết Hạt chia organic (Ach）Thủy phân, trongĐiều hòa dẫn truyền thần kinh đóng vai trò quan trọng.

Nguyên tắc xác định:

ChếtXúc tácAchThủy phân tạo ra cơ sở dan, cơ sở dan với axit disulfide-p-nitrobenzoic（DTNB）Tạo hành động 5-Name-Name（TNB）； TNBở 412nmỞ đó có đỉnh hấp thụ, bằng cách xác định. 412 nmTỷ lệ tăng độ hấp thụ, tính toán ChếtHoạt động.

Bộ dụng cụ xác định hoạt tính Acetyldan Alkaloesterase Dòng P450

Thành phần:

Thuốc thử III: Bột×1 Chi.4℃Để dành. Tham gia trước khi sử dụng 1.3 ml Thuốc thử thứ hai, hòa tan chấn động đầy đủ.Thuốc thử IV: Bột×1 Chi.4℃Để dành. Tham gia trước khi sử dụng 1.3 ml Thuốc thử thứ hai, hòa tan chấn động đầy đủ.

Các thông số của sản phẩm cụ thể tùy thuộc vào các thông số nhận được hướng dẫn sử dụng sản phẩm

Tự chuẩn bị dụng cụ và vật tư:

Máy quang phổ có thể nhìn thấy/Máy đo Enzyme, đĩa đo màu thạch anh dấu vết/96 Tấm lỗ, máy ly tâm nhiệt độ thấp, nồi tắm nước, súng pipet có thể điều chỉnh và nước cất.

Enzyme thôKhai thác chất lỏng：

1. Chất lượng tổ chức (g): Thuốc thử một khối lượng(mL)vì 1：5~10Hàm lượng (Đề nghị đặt hẹn 0.1gTổ chức, tham gia 1 mlThuốc thử(1) Tắm nước đá đều đặn,8000g 4 ℃Ly tâm 10 phútLấy thanh dịch ra đợi kiểm tra.

2. B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)10⁴ Disable (adj): khuyết tật (ml）vì 500~1000：1 Hàm lượng (đề nghị 500 Vạn Tế Bào PlusNhập 1 ml Thuốc thử một），Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (công suất 300w, siêu âm 3 giây, khoảng cách 7 giây, tổng thời gian 3 phút）; và sau đó 8000g， 4℃Ly tâm. 10 phútLấy thanh đặt trên băng đợi kiểm tra.

3. Chất lỏng như huyết thanh: xác định trực tiếp.

Hoạt động đo lường:

1. Máy quang phổ/Máy đo Enzyme Preheat 30 phútĐiều chỉnh bước sóng đến 412 NmNước cất được điều chỉnh bằng 0.

2. Thuốc thử 2. 37℃Làm nóng trước khi tắm nước 30 phút。

3. Lấy dấu vết thạch anh so sánh đĩa/96 Các bảng lỗ, lần lượt tham gia 20 μlThượng thanh dịch,160 μlThuốc thử 2,10μl Thuốc thử III và 10μlThuốc thử 4, trộn nhanh.Quân, Vu412nm Xác định.3 phút Thay đổi giá trị hấp thụ bên trong, p.10 phút Các giá trị hút quang được ghi làA1， 第190s Các giá trị hút quang được ghi làA2。△A Xác định ống= A2-A1。 ChếtTính toán hoạt động:

a.Công thức tính toán được thực hiện bằng cách sử dụng một đĩa đo màu thạch anh vi lượng như sau:

1. tổ chứcChết Hoạt động

（1）Tính theo nồng độ protein

Định nghĩa đơn vị hoạt động: sản xuất xúc tác trên mỗi miligam protein mỗi phút 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút / mg) Prot)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹)÷（Cpr ×V Mẫu）÷T

= 245×△A ÷ Cpr

（2）Tính theo chất lượng mẫu

Định nghĩa đơn vị hoạt động: sản xuất xúc tác mỗi phút trên mỗi gram mô 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút / g) Trọng lượng tươi)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹)÷（W ×V Mẫu÷V Mẫu tổng）÷T

=245×△A ÷ W

2. Vi khuẩn, tế bàoChết Hoạt động

Định nghĩa đơn vị hoạt động: Mỗi 10⁴ Một tế bào được tạo ra mỗi phút. 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút / 10)⁴ tế bào)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹)÷(Số lượng tế bào×V Mẫu÷V Mẫu tổng）÷T

=245×△A ÷Số lượng tế bào

3. Huyết thanhChết Hoạt động

Định nghĩa đơn vị hoạt động: Sản xuất xúc tác mỗi phút trên mỗi ml huyết thanh 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút) /ml)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹÷V Mẫu÷T

=245×△A

ε：TNBHệ số tiêu diệt mol,13.6×10³ L / mol / cm；d: So sánh đường kính ánh sáng,1 cm；VHệ Trung cấp (L）， 200 μl = 2 × 10^-4L；V Mẫu tổng: thể tích chiết xuất,1 ml；10⁶：1 mol = 1 × 10⁶mô mol；CprHàm lượng protein (Mg / ml）；V Nguyên văn: Não tử khuyết căn cân (ml），0.02 ml；W : Chất lượng mẫu;Tthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (phút），3 phút。

b.Sử dụng 96 Công thức tính toán để xác định tấm lỗ như sau

1. tổ chứcChết Hoạt động

（1）Tính theo nồng độ protein

Định nghĩa đơn vị hoạt động: sản xuất xúc tác trên mỗi miligam protein mỗi phút 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút / mg) Prot)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹)÷（Cpr ×V Mẫu）÷T

= 490×△A ÷ Cpr

（2）Tính theo chất lượng mẫu

Định nghĩa đơn vị hoạt động: sản xuất xúc tác mỗi phút trên mỗi gram mô 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút / g) Trọng lượng tươi)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹)÷（W ×V Mẫu÷V Mẫu tổng）÷T

= 490×△A ÷ W

2. Vi khuẩn, tế bàoChết Hoạt động

Định nghĩa đơn vị hoạt động: Mỗi 10⁴ Một tế bào được tạo ra mỗi phút. 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút / 10)⁴ tế bào)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹)÷(Số lượng tế bào×V Mẫu÷V Mẫu tổng）÷T

=490×△A ÷Số lượng tế bào

3. Huyết thanhChết Hoạt động

Định nghĩa đơn vị hoạt động: Sản xuất xúc tác mỗi phút trên mỗi ml huyết thanh 1 Nmol TNB lượng enzyme là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Chết Enzyme sống(nmol / phút) /ml)= (△A ÷ e ÷ d × V Chống Tổng×10⁹÷V Mẫu÷T

=490×△A

ε：TNB Hệ số tiêu diệt mol,13.6×10³ L / mol / cm；d：96 đường kính ánh sáng tấm lỗ,0.5 Cm；V Hệ Trung cấp (L）， 200 μl = 2 × 10^-4L；VMẫu tổng: thể tích chiết xuất,1 mL；10⁶：1 mol = 1 × 10⁶mô mol；CprHàm lượng protein (Mg / ml）；VNguyên văn: Não tử khuyết căn cân (ml），0.02 ml；W : Chất lượng mẫu;Tthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (phút），3 phút。

Bộ dụng cụ xác định hoạt tính Acetyldan Alkaloesterase Dòng P450