NameN-N-Hạt chia organic (Và）Hướng dẫn sử dụng bộ dụng cụ đo hoạt tính

Phương pháp vi lượng 100 quản/48 Mẫu

Cần lấy trước khi xét nghiệm chính thức 2-3 Một mẫu có sự khác biệt lớn để dự đoán.Xác định ý nghĩa:

Tế bào sắc tốP450 Enzyme là một nhóm các dòng enzyme có vai trò quan trọng trong quá trình chuyển hóa các chất ngoại sinh, đặc biệt là thuốc và chất độc.Và nhưP450Một thành viên quan trọng của hệ enzyme, tương đương với......Sản phẩm CYP3A4 Phân nhóm, liên quan chặt chẽ đến phản ứng khử methyl hóa của thuốc.

Nguyên tắc xác định:

Và xúc tác giải phóng formaldehyde aminobi-lin, thông qua Nash Xác định hàm lượng formaldehyde bằng phép đo màu, có thể tínhra Và Hoạt động.

Bộ xét nghiệm hoạt tính aminobilin-N-demethylase P450

Thành phần:

Thuốc thử 1: Bột×1 chai,4℃Để dành. Trước khi sử dụng 100ml Nước cất được hòa tan hoàn toàn.

Thuốc thử III: Bột×1 ống,4℃Bảo vệ khỏi ánh sáng. Tham gia trước khi sử dụng 1 ml Ethanol khan, hòa tan hoàn toàn. Thuốc thử IV: Bột×1ống,4℃Để dành. Tham gia trước khi sử dụng 0,5 mlNước cất, hòa tan hoàn toàn.

Thuốc thử 5: Bột×1 Chai, bảo quản ở nhiệt độ phòng. Nước cất trước khi sử dụng 4 ml Hòa tan hoàn toàn.

Chất lỏng tiêu chuẩn: Chất lỏng×1 chai,-20℃Để dành. Trước khi sử dụng 1,5 ml EP ống, tham gia 10μl Chất lỏng tiêu chuẩn, cộng 100μl Nước cất, trộn đều là0.05 mmol / L giải pháp jia aldehyde tiêu chuẩn,4℃Để dành.

Các thông số của sản phẩm cụ thể tùy thuộc vào các thông số nhận được hướng dẫn sử dụng sản phẩm

Tự chuẩn bị dụng cụ và vật tư:

Máy ly tâm thông thường, máy ly tâm quá tốc độ, nồi nước, súng pipet có thể điều chỉnh, máy quang phổ UV/Máy đo Enzyme, đĩa đo màu thạch anh dấu vết/96 Lỗtấm, nước cất, ethanol khan và đá.

Chiết xuất chất lỏng Enzyme thô：

1、Loại bỏ nhân, các chất đại phân tử như ty thể:Cân khoảng 0.5g Tổ chức, tham gia 1 ml Thuốc thử một, nghiền kỹ trên băng,10 000g 4℃lyTrái tim 30 phútLấy thanh dịch chuyển vào ống ly tâm siêu tốc.

2、Vi thể thô:4℃，100 000gLy tâm. 60 phútVứt bỏ thanh dịch.

3Các tạp chất như huyết hồng protein: hướng 2 Sự lắng đọng. 1 ml Thuốc thử một, sau khi đậy chặt thì tan hết chấn động,100 000g Ly tâm 30 phútBỏ đi.Dịch thượng thanh.

4、Micro cuối cùng:Bước tới 3 Thêm thuốc thử vào lượng mưa. 0.5 mlSau khi đậy chặt, chấn động hòa tan hoàn toàn, tức là dịch enzym thô, đợi đo. Cần xét nghiệm chất lỏng

sử dụng trong ngày.

Và Hoạt động xác định hoạt động:

1. Máy quang phổ/Máy đo Enzyme Preheat 30 phútĐiều chỉnh bước sóng đến 412 NmNước cất được điều chỉnh bằng 0.

2. Thuốc thử 2. 37℃Làm nóng trước khi tắm nước 30 phút。

3. Chăm sóc:取 1 chiEP ống, tham gia 10μl chất lỏng enzyme thô,170μl Thuốc thử 2,10μl Thuốc thử 3.10μl Nước cất, trộn đều rồi đặt 37℃

Bồn tắm cách nhiệt 30 phútTham gia ngay 35μl Thuốc thử 5, trộn đều rồi cho vào bồn tắm đá. 5 phút；取raĐăng nhập 35μl Thuốc thử 6, sau khi trộn đều nhiệt độ phòngĐặt 5 phút; Nhiệt độ phòng 8000rpm Ly tâm 5 phút; lấy cái mớiEP ống, tham gia 100μl Thượng thanh dịch,100μl Thuốc thử 7, sau khi trộn đều. 60℃Nước tắm 10 phútSau đó lấyra,Làm mát bằng nước lạnh 5 phútVới 412nmXác định sự hấp thụ ánh sáng, ghi nhớAChăm sóc.

4. Ống đo:取 1 chiEP ống, tham gia 10μl chất lỏng enzyme thô,170μl Thuốc thử 2,10μl Thuốc thử 3.10μl Thuốc thử 4, trộn đều rồi đặt vào. 37℃

Bồn tắm cách nhiệt 30 phútTham gia ngay 35μl Thuốc thử 5, trộn đều rồi cho vào bồn tắm đá. 5 phút；取raĐăng nhập 35μl Thuốc thử 6, sau khi trộn đều nhiệt độ phòngĐặt 5 phút; Nhiệt độ phòng 8000rpm Ly tâm 5 phút；取 1 Chi nhánh mớiEP ống, tham gia 100μl Thượng thanh dịch,100μl Thuốc thử 7, sau khi trộn đều. 60℃nướcPhòng tắm 10 phútSau đó lấyra,Làm mát bằng nước lạnh 5 phútVới 412nmXác định sự hấp thụ ánh sáng, ghi nhớAỐng đo.

5. Ống tiêu chuẩn:取 1 chiEP ống, tham gia 100μl Sản phẩm tiêu chuẩn,100μl Thuốc thử 7, sau khi trộn đều. 60℃Nước tắm 10 phútSau đó lấyraDùng lạnh.Nước làm mát5 phútVới412nm Xác định sự hấp thụ ánh sáng, ghi nhớA Ống tiêu chuẩn.

Lưu ý: Mỗi mẫu cần được chăm sóc đúng cách.

Và Tính toán hoạt động:

a.Công thức tính toán được thực hiện bằng cách sử dụng một đĩa đo màu thạch anh vi lượng như sau:

（1）Tính theo nồng độ protein

Định nghĩa đơn vị hoạt động:37℃Sản xuất xúc tác protein mỗi miligam mỗi phút 1 Nmol Formaldehyde là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Và Hoạt động(nmol / phút / mg) Prot) =C Sản phẩm tiêu chuẩn×V Sản phẩm tiêu chuẩn×（A Ống đo -A Chăm sóc）÷A Tiêu chuẩn ống×Pha loãng Multiple÷（Cpr×VMẫu (÷T

=45×（A Ống đo -A Chăm sóc (÷A Tiêu chuẩn ống÷Cpr。

（2）Tính theo chất lượng mẫu

Định nghĩa đơn vị hoạt động:37℃Trong mỗi phút, mỗi gram mô được tạo ra. 1 Nmol Formaldehyde là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Và Hoạt động(nmol / phút / g) Trọng lượng tươi ) =C Sản phẩm tiêu chuẩn×V Sản phẩm tiêu chuẩn×（A Ống đo -A Chăm sóc (÷A Tiêu chuẩn ống×Pha loãng Multiple÷(V) Mẫu

÷V Mẫu tổng× W) ÷ T

=45×（A Ống đo -A Chăm sóc (÷A Tiêu chuẩn ống÷W。

C Sản phẩm tiêu chuẩn:0.05 mmol / L = 50 μmol / L；V Sản phẩm tiêu chuẩn:500μl = 0,0005 L; Pha loãng bội số:V Chống Tổng÷V Chất lỏng làm sạch=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cprmạc đường ruột muqueuses digestives (Mg / ml）Cần xác định thêm, đề nghị sử dụng công ty này. BCABộ dụng cụ đo hàm lượng protein;VMẫu: Thêm thể tích dịch enzyme thô,50μl = 0,05ml；VMẫu tổng: thể tích chiết xuất,0,5 ml；Tthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (phút），30 phút。

b.Sử dụng 96 Công thức tính toán để xác định tấm lỗ như sau

（1）Tính theo nồng độ protein

Định nghĩa đơn vị hoạt động:37℃Sản xuất xúc tác protein mỗi miligam mỗi phút 1 Nmol Formaldehyde là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Và Hoạt động(nmol / phút / mg) Prot) =C Sản phẩm tiêu chuẩn×V Sản phẩm tiêu chuẩn×（A Ống đo -A Chăm sóc）÷A Tiêu chuẩn ống×Pha loãng Multiple÷（Cpr×VMẫu (÷T

=45×（A Ống đo -A Chăm sóc (÷A Tiêu chuẩn ống÷Cpr。

（2）Tính theo chất lượng mẫu

Định nghĩa đơn vị hoạt động:37℃Trong mỗi phút, mỗi gram mô được tạo ra. 1 Nmol Formaldehyde là 1 Một đơn vị enzyme sống.

Và Hoạt động(nmol / phút / g) Trọng lượng tươi) =C Sản phẩm tiêu chuẩn×V Sản phẩm tiêu chuẩn×（A Ống đo -A Chăm sóc (÷A Tiêu chuẩn ống×Pha loãng Multiple÷(V) Mẫu÷VMẫu tổng× W) ÷ T

=45×（A Ống đo -A Chăm sóc (÷A Tiêu chuẩn ống÷W。

C Sản phẩm tiêu chuẩn:0.05 mmol / L = 50 μmol / L；V Sản phẩm tiêu chuẩn:500μl = 0,0005 L; Pha loãng bội số:V Chống Tổng÷V Chất lỏng làm sạch=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cprmạc đường ruột muqueuses digestives (Mg / ml）Cần xác định thêm, đề nghị sử dụng công ty này. BCABộ dụng cụ đo hàm lượng protein;V Mẫu: Thêm thể tích dịch enzyme thô,50μl = 0,05ml；V Mẫu tổng: thể tích chiết xuất,0.5 ml；Tthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (phút），30 phút。

Chú ý:

1Phải hoàn thành xác định dịch enzym thô trong cùng ngày, nếu cần bảo tồn, thì trích xuất dịch enzym thô 3 Sự lắng đọng. 0,5 ml 20%Cam dầu, sau khi phân phối,

-80℃Bảo quản;

2Thuốc thử ba và thuốc thử bốn cần phối chế trước khi dùng, nếu cùng ngày không dùng hết,4℃Bảo vệ khỏi ánh sáng, có sẵn 1 tuần;

3Chất lỏng enzyme thô có thể được sử dụng trực tiếp để xác định nồng độ protein. BCA Hàm lượng protein đo được.

Bộ xét nghiệm hoạt tính aminobilin-N-demethylase P450