Chuột Interleukin-1aELISA Kit

Chuột Interleukin-1aELISA Kit

Giới thiệu nền:

IL-1 có hai dạng phân tử khác nhau, IL-1α, bao gồm 159 axit amin;; Một loại khác, được gọi là IL-1β, chứa 153 axit amin; Cả hai được mã hóa riêng biệt bởi các gen khác nhau. Gen IL-1 ở người và chuột nằm trong nhiễm sắc thể 2, cả hai đều chứa 7 exon. Tiền chất IL-1 (ProIL-1) là 31kDa và các phân tử IL-1 trưởng thành được hình thành bằng cách phân giải enzyme thủy phân protein. IL-1 có tính tương đồng cao hơn giữa các chi khác nhau. Ở mức độ axit amin, IL-1α và IL-1β có độ tương đồng 60% đến 70% và 75% đến 78% ở các chi khác nhau. Nhưng IL-1α và IL-1β chỉ có 25% tương đồng trong cùng một chi. IL-1α và IL-1β có trọng lượng phân tử khoảng 17,5kDa, các đẳng điện 5 và 7, tương ứng, và độ tương đồng 28%, IL-1α và IL-1β kết hợp với cùng một ái lực.Bề mặt tế bàoThụ thể, phát huy tác dụng sinh học tương tự.

Nguyên tắc phát hiện：

Solarbio (Solarbio ®)Bộ dụng cụ ELISA sử dụng công nghệ xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme dựa trên phương pháp kẹp kháng thể kép. Gói kháng thể đơn dòng IL-1a chống chuột được đặt trên bảng enzyme; Thêm các mẫu tiêu chuẩn pha loãng gradient và các mẫu pha loãng trước, IL-1a của chuột trong các mẫu tiêu chuẩn và mẫu được liên kết đầy đủ với các kháng thể trên tấm enzyme; Sau khi rửa tấm, kháng thể IL-1a của chuột kháng biotin hóa được thêm vào, liên kết cụ thể với IL-1a của chuột trong các sản phẩm tiêu chuẩn và mẫu bị bắt bởi kháng thể trên tấm; Streptomycin được đánh dấu bằng peroxidase cải ngựa (HRP) được thêm vào sau khi rửa tấm, liên kết không cộng hóa trị cường độ cao xảy ra giữa biotin và streptomycin; Sau khi rửa tấm thêm chất nền kết xuất màu TMB, nếu mẫu trong lỗ phản ứng có nồng độ khác nhau của IL-1a chuột, HRP sẽ làm cho TMB không màu trở thành chất màu xanh nhạt khác nhau (có liên quan tích cực), sau khi thêm chất kết thúc lỗ phản ứng sẽ chuyển sang màu vàng; Với λ max=450 Độ hấp thụ mẫu lỗ phản ứng (OD) được xác định ở nm (OD=450 nm), nồng độ IL-1a của chuột trong mẫu tỷ lệ thuận với OD, và nồng độ IL-1a của chuột trong mẫu có thể được tính bằng cách vẽ đường cong tiêu chuẩn và phần mềm phù hợp với bốn tham số.

Sơ đồ nguyên tắc:

Lưu ý:※※※

• Bộ dụng cụ nên được sử dụng trong ngày hết hạn, vui lòng không sử dụng thuốc hết hạn.
• Bộ dụng cụ nên được giữ trong tủ lạnh 2-8 ℃ khi không sử dụng, các sản phẩm tiêu chuẩn đã được tái hòa tan nhưng không sử dụng hết, hãy loại bỏ chúng.
• Vui lòng khôi phục nhiệt độ phòng trước khi sử dụng bộ dụng cụ 30 min， Hơn nữa trộn đều các thành phần và mẫu đã chuẩn bị trong hộp thuốc thử.
• Các sản phẩm và mẫu tiêu chuẩn trong thử nghiệm được khuyến nghị làm xét nghiệm lại và thứ tự bổ sung thuốc thử phải được duy trì *.
• 1- Tên đề tài: Giải pháp nâng cao hiệu quả đầu tư phát triển kết cấu hạ tầng thương mại (※) Và thùng nhựa sạch. .
• Khối lượng nhỏ hơn của kháng thể biotin hóa cô đặc và liên kết enzyme cô đặc, trong quá trình vận chuyển một lượng nhỏ chất lỏng sẽ dính vào thành ống và chai

Bìa, trước khi sử dụng xin vui lòng xử lý ly tâm (5-10 S là ok), để chất lỏng trên tường ống tập trung ở dưới cùng của ống, khi lấy nó, xin vui lòng thổi một vài lần cẩn thận với pipet.

• Ngoài việc chất tẩy rửa tập trung và chất chấm dứt trong bộ thuốc thử có thể được sử dụng phổ biến, vui lòng không sử dụng các chất thử có trong bộ thuốc thử có nguồn gốc khác.

Thuốc thay thế một thành phần riêng lẻ trong bộ thuốc thử này.

• Để đảm bảo kết quả chính xác, mỗi lần phát hiện đều cần làm đường cong tiêu chuẩn.

Mẹo an toàn:Chấm dứt trong bộ dụng cụ là dung dịch axit, người vận hành vui lòng mang găng tay và chú ý bảo vệ khi sử dụng; Trong quá trình hoạt động cũng phải tránh tiếp xúc với da và mắt của tác nhân, nếu vô tình tiếp xúc, hãy rửa bằng nhiều nước sạch; Khi kiểm tra mẫu máu và các mẫu dịch cơ thể khác, vui lòng thực hiện theo các quy định về quản lý an toàn phòng thí nghiệm sinh học quốc gia.

Thành phần bộ dụng cụ và lưu trữ：

Thiết bị thí nghiệm tự chuẩn bị (không cung cấp, có thể mua hộ)

• Máy đo Enzyme (bước sóng chính 450nm, bước sóng tham chiếu 630nm)
• Pipette chính xác cao và đầu hút dùng một lần: 0,5-10,2-20,20-200,200-1000 μl
• Máy giặt tấm hoặc chai
• 37℃Hộp ấp trứng
• Hơi nước đôi, nước khử ion, xi lanh đo lường, vv
• Ống polypropylene để pha loãng

Thu thập và lưu trữ mẫu:

• Thanh lọc tế bào:

Môi trường tế bào được loại bỏ khỏi ống ly tâm vô trùng, 1000 × g ly tâm trong 10 phút ở 4 ℃, sau đó bằng nhau được đặt trong ống EP nhỏ và được bảo quản ở -20 ℃ (phát hiện trong vòng 24 giờ có thể được đưa vào lưu trữ 2-8 ℃), tránh đóng băng lặp đi lặp lại.

• Mẫu huyết thanh:

Sau khi đông máu tự nhiên trong 20 phút ở nhiệt độ phòng, 1000 × g ly tâm trong 10 phút ở điều kiện 4 ℃, sau đó lắp đặt lượng bằng nhau trong ống EP nhỏ và bảo quản ở -20 ℃ (phát hiện trong vòng 24 giờ có thể được đưa vào lưu trữ 2-8 ℃), nếu có kết tủa trong quá trình bảo quản, xin vui lòng ly tâm một lần nữa, tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại.

• Mẫu huyết tương:

Toàn bộ máu được thu thập vào các ống có chứa thuốc chống đông máu, EDTA được chọn theo yêu cầu thực tế của mẫu vật, natri citrate hoặc heparin làm thuốc chống đông máu, trộn trong 20 phút, 1000 × g ly tâm trong 10 phút ở 4 ℃, sau đó chia đều thành các ống EP nhỏ và bảo quản ở -20 ℃ (kiểm tra trong vòng 24 giờ có thể được đưa vào lưu trữ 2-8 ℃), tránh đông lạnh lặp đi lặp lại.

※Chú ý:Các mẫu huyết thanh tránh sử dụng các mẫu tan máu, lipid cao để không ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm; Nếu nồng độ phát hiện mục tiêu trong mẫu cao hơn giá trị cao của sản phẩm tiêu chuẩn, hãy thử nghiệm mẫu sau khi pha loãng bội số thích hợp, đề nghị thử nghiệm trước khi thử nghiệm chính thức để xác định bội số pha loãng.

Chuẩn bị thuốc thử：

• Nhiệt độ trở lại của thuốc thử: đầu tiên 30 phút trước khi thử nghiệm bộ dụng cụ, mẫu được thử nghiệm được đặt ở nhiệt độ phòng, nếu chất tẩy rửa cô đặc xuất hiện kết tinh, vui lòng đặt trong bồn tắm ấm 37 ℃ cho đến khi kết tinh được hòa tan hoàn toàn.
• Xây dựng dung dịch giặt: trước khi tính toán khối lượng sử dụng dung dịch giặt sau khi pha loãng, sau đó pha loãng dung dịch giặt tập trung 20 lần thành dung dịch ứng dụng 1 lần với hơi nước đôi hoặc nước khử ion, dung dịch giặt tập trung chưa sử dụng được đặt trong tủ lạnh 4 ℃ để bảo quản.

3. Pha loãng gradient tiêu chuẩn: Thêm dung dịch pha loãng tiêu chuẩn/mẫu (SR1) 1ml dung dịch tiêu chuẩn đông khô, để trong 15 phút * Hòa tan nhẹ nhàng trộn đều (nồng độ 2000pg/ml), sau đó pha loãng theo nồng độ sau: 2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 pg/ml. Dung dịch nguyên chất tiêu chuẩn tái hòa tan (2000pg/ml) chưa sử dụng nên được loại bỏ hoặc theo yêu cầu theo liều lượng một lần và lưu trữ trong tủ lạnh -20~80 ℃, cụ thể như hình dưới đây.

4. Chất lỏng làm việc kháng thể biotin hóa: trước khi tính toán liều lượng cần thiết cho thử nghiệm, pha loãng 100 lần chất lỏng làm việc kháng thể thành 1 lần chất lỏng làm việc ứng dụng với chất lỏng pha loãng phát hiện (SR2) (pha trộn đầy đủ trước khi pha loãng), vui lòng thêm vào lỗ phản ứng trong vòng 30 phút.

Chất lỏng làm việc kháng thể biotin hóa cụ thểPhương pháp pha loãngNhư sau:

5. Chất lỏng làm việc liên kết enzyme: được xây dựng theo liều lượng cần thiết cho mỗi thử nghiệm, pha loãng 100 lần liên kết enzyme cô đặc thành 1 lần chất lỏng làm việc ứng dụng (ly tâm trước khi pha loãng) với chất lỏng pha loãng liên kết enzyme (SR3), vui lòng sử dụng trong vòng 30 phút.

Chất lỏng làm việc liên kết enzyme cụ thểPhương pháp pha loãngNhư sau:

6. Phương pháp giặt:

• Tự động rửa tấm: vứt bỏ chất lỏng trong lỗ tấm enzyme, vỗ khô trên giấy thấm dày, tiêm chất lỏng rửa là 300ul/lỗ, khoảng cách giữa tiêm và hút là 30 giây, rửa tấm 5 lần.
• Rửa thủ công: Vứt hết chất lỏng trong lỗ của tấm tiêu chuẩn, đập khô trên giấy thấm dày, dùng bình rửa thêm dung dịch rửa 300ul/lỗ, sau 30 giây nghỉ ngơi vứt sạch chất lỏng trong lỗ của tấm tiêu chuẩn, đập khô trên giấy hấp thụ dày, rửa 5 lần.

Bước phát hiện:

Kết quả đánh giá：

1. Xác định giá trị ODD với bước sóng 450 nm của máy đo enzyme. Chọn phát hiện bước sóng kép, bước sóng tham chiếu là 630 nm. Nếu không thể phát hiện bước sóng kép, hãy trừ giá trị đo OD 630 nm bằng giá trị đo OD 450 nm.

2. Tính toán giá trị ODD trung bình của các mặt hàng tiêu chuẩn, mẫu: giá trị ODD của mỗi mặt hàng tiêu chuẩn và mẫu vật nên trừ đi giá trị ODD của lỗ 0

3. Với nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn là tọa độ ngang và giá trị ODD hấp thụ là tọa độ dọc, đường cong tiêu chuẩn được vẽ bằng phần mềm. Hàm lượng IL-1a trong mẫu có thể được chuyển đổi từ đường cong tiêu chuẩn bằng giá trị ODD tương ứng.

4. Nếu giá trị OD của mẫu vật cao hơn giới hạn trên của đường cong tiêu chuẩn, nên làm pha loãng thích hợp sau khi kiểm tra lại, tính toán nồng độ rồi nhân với bội số pha loãng.

Mô tả tham số：

1. Dữ liệu và đường cong tiêu chuẩn

Biểu đồ này chỉ nhằm mục đích tham khảo và hàm lượng mẫu IL-1A ở chuột nên được tính toán theo đường cong tiêu chuẩn được vẽ bởi sản phẩm tiêu chuẩn của thử nghiệm hiện tại.

2. Độ nhạy:

Nồng độ IL-1a ở chuột có thể phát hiện thấp lên đến 15pg/ml,

Giá trị trung bình của nồng độ OD của 20 sản phẩm tiêu chuẩn bằng không cộng với hai độ lệch chuẩn để tính toán nồng độ có thể phát hiện tương ứng.

3. Đặc trưng:

Không phản ứng với chuột IL-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 12, 13, chuột IL-1βPhản ứng đẳng cấp

4. Độ lặp lại:

Bên trong tấm, hệ số biến thiên giữa các tấm<10%

5. Tỷ lệ phục hồi:

3 nồng độ IL-1a khác nhau được thêm vào thanh lọc tế bào và huyết tương của những con chuột khỏe mạnh được chọn để tính tỷ lệ thu hồi.

6. Pha loãng tuyến tính：

Nồng độ IL-1a ở chuột cao được thêm vào 4 phần nuôi cấy tế bào và huyết tương của chuột khỏe mạnh, được pha loãng trong phạm vi động lực học đường cong tiêu chuẩn để đánh giá tuyến tính.

Tài liệu tham khảo：

1. Greenfeder, SA et al. (1995) J. Biol. Hóa học.270:13575.

2. Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Hóa học.272:7727.

3. Sims, JE et al. (1994) Clin. Miễn dịch. Bệnh nhân miễn dịch.72:9.

4. Sims, J.E. và cộng sự (1993) Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ90:6155.

5. Colotta, F. và A. Mantovani (1994) Xu hướng Pharmacol. Khoa học.14:138.

6. Svenson, M. et al. (1993) Cytokine5:427.

7. Giri, JG và cộng sự (1994) J. Immunol.153:5802.

Các vấn đề thường gặp và giải pháp：

Chuột Interleukin-1aELISA KitHướng dẫn đặt hàng:

1. Tuyệt đại bộ phận sản phẩm chuẩn bị sẵn hàng hiện có, trong tình huống bình thường đều có thể đặt hàng cùng ngày giao hàng.
Một số sản phẩm rất được sử dụng, cần đặt trước 1-2 ngày, hàng hóa tương lai ở nước ngoài cần đặt trước 3-6 tuần.
3. Giá một số sản phẩm sẽ thay đổi do các yếu tố như thời hạn hàng hóa, lô hàng, nếu có thay đổi thì giá mới trong ngày đặt hàng là chuẩn.
4. Thời hạn hết hạn đặt hàng hàng ngày là 16 giờ đúng, một số thành phố có thể đến 17 giờ đúng, do vượt quá thời hạn hết hạn khiến cho ngày hôm đó không thể giao hàng sẽ sắp xếp giao hàng vào ngày hôm sau.
5. Sau khi làm xong tiền hàng, xin thông báo cho chúng tôi biết bằng fax, tin nhắn, v. v. cùng với địa chỉ, họ tên của người nhận hàng.

Mô tả vận chuyển:

Sản phẩm nhiệt độ cực thấp: Vận chuyển bằng đá khô trong quá trình vận chuyển các sản phẩm nhiệt độ cực thấp. Đóng gói sản phẩm bằng đá khô, sau đó niêm phong hộp bọt, băng dính lớp hộp bọt, đặt vào hộp Solebao, sau đó giao cho chuyển phát nhanh hợp tác, giao hàng an toàn và nhanh chóng và hiệu quả cao trong tay khách hàng, đảm bảo tính chất của sản phẩm ổn định như một, hộ tống thí nghiệm của bạn.
Sản phẩm nhiệt độ thấp: Sản phẩm nhiệt độ thấp được vận chuyển với túi đá Solebao trong quá trình vận chuyển. Trước đó sử dụng túi chườm đá để bọc sản phẩm, sau đó sử dụng hộp bọt để niêm phong, băng keo kín để niêm phong hộp bọt, sau đó đặt vào hộp Solebao (hiệu quả giữ nhiệt ít hơn có thể kéo dài một tuần), sau đó giao cho chuyển phát nhanh hợp tác, giao hàng an toàn và nhanh chóng và hiệu quả cao trong tay khách hàng, đảm bảo tính chất của sản phẩm ổn định như một, hộ tống thí nghiệm của bạn.
Sản phẩm nhiệt độ bình thường: Không cần thêm đá hoặc đóng gói đặc biệt trong quá trình vận chuyển sản phẩm nhiệt độ bình thường. Sản phẩm do nhân viên nhà kho của công ty phân phối nhanh chóng, chuyển phát nhanh chính xác và hiệu quả đảm bảo sản phẩm nhanh chóng đến tay bạn.