Pyruvate dehydrogenase (PDH) Bộ xét nghiệm hoạt động Phương pháp dấu vết

Hạt chia organic (PDH) Hướng dẫn sử dụng bộ thử nghiệm hoạt tính Phương pháp vi lượng

Lưu ý: thuốc thử của sản phẩm này có sự thay đổi, xin vui lòng chú ý và làm theo hướng dẫn này một cách nghiêm ngặt.

Số hàng:Bc0385

quy cách100T/96S

Thành phần sản phẩm: Vui lòng kiểm tra cẩn thận khối lượng thuốc thử và khối lượng trong chai trước khi sử dụng, nếu có thắc mắc, vui lòng liên hệ với nhân viên Solebao kịp thời.

Pyruvate dehydrogenase (PDH) Bộ xét nghiệm hoạt động Phương pháp dấu vết

Pyruvate dehydrogenase (PDH) Bộ xét nghiệm hoạt động Phương pháp dấu vết

Công thức của giải pháp:

1. Thuốc thử II：Là thuốc thử dễ bay hơi, sau khi dùng xong nhanh chóng niêm phong,-20℃Để dành.

2. Công thức chất lỏng làm việc: Đặt trước khi sử dụng5,75mlThuốc thử bốn, một thuốc thử năm,0,45 mlThuốc thử 6.1,75mlThuốc thử Seven Chuyển đến một lọ Thuốc thử Three-Three Mix Hòa tan để sử dụng(Tổng cộng15.45mLGiới thiệu85T）Thuốc thử bất tận-20℃Tiết kiệm phụ kiện, có thể tiết kiệm4Hàng tuần.Tránh đông lạnh nhiều lần.

Mô tả sản phẩm:

PDH（EC 4.1.1.1Được tìm thấy rộng rãi trong động vật, thực vật, vi sinh vật và tế bào nuôi cấy, nó là phức hợp pyruvate dehydrogenase(PDHC)Enzyme giới hạn tốc độ xúc tác quá trình oxy hóa khử cacboxyl pyruvate,Xúc tác quá trình khử trùng pyruvateKết nối men đường với chu kỳ axit tricarboxylic.

PDHxúc tác khử hydro pyruvate, đồng thời giảm2,6-thuốc nhét hậu môn suppositoires (2,6-DCPIP) Do đó dẫn đến605nmGiảm sự hấp thụ ánh sáng.

Axit Pyruvic + Thiamine Pyrophosphate Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate

Dichlorophenolindophenol (605nm) + Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate Giảm Dichlorophenolindophenol

Lưu ý: Lựa chọn được đề xuất trước khi thử nghiệm2-3Một mẫu dự kiến có sự khác biệt lớn để làm thí nghiệm trước. Nếu giá trị hấp thụ ánh sáng của mẫu không nằm trong phạm vi đo lường thì nên pha loãng hoặc tăng kích thước mẫu để kiểm tra.

Dụng cụ và đồ dùng cần tự chuẩn bị:

Máy quang phổ có thể nhìn thấy/Máy đo tiêu chuẩn Enzyme, Nồi nước, Máy ly tâm để bàn, Pipette có thể điều chỉnh, Đĩa đo màu thủy tinh/96Tấm lỗ, cối/Máy san lấp mặt bằng, nước đá và nước cất.

Quy trình thực hiện:

Một,Xử lý mẫu(Có thể điều chỉnh kích thước mẫu cần kiểm tra thích hợp, tỷ lệ cụ thể có thể tham khảo tài liệu)

1. Lời bài hát: Appointment0.1gTổ chức, tham gia1 mLThuốc thử I và10μLThuốc thử thứ hai, nghiền kỹ bằng máy cân bằng bồn tắm đá hoặc máy nghiền bát,4 ℃ 11000gLy tâm10 phútLấy sạch.Giữ băng chờKiểm tra.

2. Mẫu tế bào hoặc vi khuẩn: Thu thập trước500Vạn tế bào hoặc vi khuẩn vào trong ống ly tâm, sau khi ly tâm vứt bỏ; Tham gia sau1mLThuốc thử I và10μLThuốc thử II,Băng tắm siêu âm nghiền vi khuẩn (điện)200 W, siêu âm3 giâyKhoảng cách7 giâyTổng thời gian5 phút）； sau đó11000g，4℃, ly tâm10 phút，

Lấy sạch đặt trên băng chờ kiểm tra.

3. Huyết thanh (Plasma)và các mẫu chất lỏng khác: Kiểm tra trực tiếp.Nếu dung dịch đục ngầu thì ly tâm rồi đi Thượng Thanh tiến hành đo lường.

II. Các bước xác định

1、Hiển thịMáy quang phổ hoặc máy đo Enzyme Preheat30 phútTrên đây, điều chỉnh bước sóng tới605nmMáy quang phổ kế chưng cất nước điều chỉnh 0.

2、Mỗi mẫu cần180μLchất lỏng làm việc,Theo yêu cầu của thí nghiệmLấy ra một lượng chất lỏng làm việc nhất định.37℃(động vật có vú) hoặc25℃(Các loài khác)Trong nồi nướcNước tắm10 phút。

3、Ống trống: trong đĩa nhỏ hoặc96Thêm vào bảng lỗ180μLChất lỏng làm việc và10μLNước, trộn đều, ghi lại ngay.605nmchỗ10schỗGiá trị hấp thụA1và1phút10sGiá trị hấp thụ sauA2Tính toánΔAKhoảng trắng= A1-A2。Ống trắng chỉ cần đo1-2lần。

4、Ống đo lường: trong đĩa nhỏ hoặc96Thêm vào bảng lỗ180μLChất lỏng làm việc và10μLMẫu, trộn đều, ghi lại ngay.605nmchỗ10schỗGiá trị hấp thụSố A3và1phút10sGiá trị hấp thụ sauMẫu A4Tính toánΔAXác định= A3-A4。

Ba,PDHTính toán hoạt động

a.Công thức tính toán được xác định bằng đĩa đo màu vi lượng như sau:

1. Tính theo nồng độ protein mẫu

Định nghĩa của unit: eachMgHistoprotein được tiêu thụ mỗi phút trong hệ thống phản ứng1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHKích hoạt (U / mg phù hợp）=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng)÷（ε × d）×VChống Tổng×10⁹] ÷ (Cpr × V)Mẫu÷T

= 904.762× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷Cpr

2. Tính theo chất lượng mẫu

Định nghĩa của unit: eachgTổ chức tiêu thụ mỗi phút trong hệ thống phản ứng1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHKích hoạt (U / gChất lượng)=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng)÷（ε × d）×VChống Tổng×10⁹] ÷ (V)Mẫu÷VMẫu tổng× W) ÷T

= 913,81× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷W

3. Theo số lượng vi khuẩn hoặc tế bào

Định nghĩa của unit: each110.000 vi khuẩn hoặc tế bào được tiêu thụ mỗi phút trong hệ thống phản ứng1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHKích hoạt (U/10⁴tế bào）=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng×VChống Tổng÷（ε × d）×10⁹] ÷ (V)Mẫu÷VMẫu tổng× 500) ÷ T

= 1.828× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng)

4. Theo khối lượng mẫu

Định nghĩa của unit: eachmLChất lỏngTrong hệ thống phản ứngTiêu thụ mỗi phút1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHHoạt động（U / mL）=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng×VChống Tổng÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ VMẫu÷T

= 904.762× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng)

VAnti-Total: Tổng thể tích của hệ thống phản ứng,1.9×10^-4L；ε：2,6-hệ số chết mol dichloroindolol,2.1×10⁴L / mol / cm；d: So sánh đường kính ánh sáng,1 cm；VMẫu: Thêm khối lượng mẫu,0,01 mL；VMẫu tổng: Thêm thuốc thử một và thuốc thử hai thể tích,1,01 ml；T: Thời gian phản ứng,1 phút；Cpr: nồng độ protein mẫu,Mg / mL；W: Chất lượng mẫu,g；500: tổng số vi khuẩn hoặc tế bào,500Wan.

b.dùng96Công thức tính toán để xác định tấm lỗ như sau

1．Tính theo nồng độ protein mẫu

Định nghĩa của unit: eachMgHistoprotein được tiêu thụ mỗi phút trong hệ thống phản ứng1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHKích hoạt (U / mg phù hợp）=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng×VChống Tổng÷（ε × d）×10⁹] ÷ (Cpr × V)Mẫu÷T

= 1809.524× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷Cpr

2．Tính theo chất lượng mẫu

Định nghĩa của unit: eachgTổ chức tiêu thụ mỗi phút trong hệ thống phản ứng1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHKích hoạt (U / gChất lượng)=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng×VChống Tổng÷（ε × d）×10⁹] ÷ (V)Mẫu÷VMẫu tổng× W) ÷T

= 1827,62× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷W

3．Theo số lượng vi khuẩn hoặc tế bào

Định nghĩa của unit: each110.000 vi khuẩn hoặc tế bào được tiêu thụ mỗi phút trong hệ thống phản ứng1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHKích hoạt (U/10⁴tế bào）=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng×VChống Tổng÷（ε × d）×10⁹] ÷ (V)Mẫu÷VMẫu tổng× 500) ÷T

= 3,655× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng)

4．Theo khối lượng mẫu

Định nghĩa của unit: eachmLChất lỏngTrong hệ thống phản ứngTiêu thụ mỗi phút1 nmol 2,6-Indigosol dichlorophenol được định nghĩa là một đơn vị hoạt động của enzyme.

PDHHoạt động（U / mL）=[(ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng×VChống Tổng÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ VMẫu÷T

= 1809.524× (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng)

VAnti-Total: Tổng thể tích của hệ thống phản ứng,1.9×10^-4L；ε：2,6-hệ số chết mol dichloroindolol,2.1×10⁴L / mol / cm；d：96đường kính ánh sáng tấm lỗ,0,5 cm；VMẫu: Thêm khối lượng mẫu,0,01 mL；VMẫu tổng: Thêm thuốc thử một và thuốc thử hai thể tích,1,01 ml；T: Thời gian phản ứng,1 phút；Cpr: nồng độ protein mẫu,Mg / mL；W: Chất lượng mẫu,g；500: tổng số vi khuẩn hoặc tế bào,500Wan.

Lưu ý:

1、Trong quá trình xác định, tất cả các mẫu được đặt trên băng và2Kiểm tra trong vòng một giờ để tránh biến tính và mất hoạt động.

2、Xác định ốngΔAGiá trị trong0.01-0.25Trong khi đó, nếu xác định được ốngΔAGiá trị lớn hơn0.25Cần pha loãng mẫu.Tính toán bội số pha loãng trong công thức.Nếu xác định ốngΔAgiá trịnhỏvào0.01Cần phải xác định lại sau khi tăng lượng mẫu, chú ý sửa đổi đồng bộ công thức tính toán.

3、Do hàm lượng protein nhất định trong thuốc thử I (khoảng1 mg / mlVì vậy, khi xác định nồng độ protein mẫu cần phải trừ đi.Thuốc thử mộtHàm lượng protein.

Ví dụ thực nghiệm:

1、取0.1gGan chuộttham gia1 mLThuốc thử I và10μLThuốc thử thứ hai, nghiền kỹ bằng máy cân bằng bồn tắm đá hoặc máy nghiền bát,4℃、11000gLy tâm10 phútLấy băng ra. Làm theo các bước.Dấu vết thạch anh so sánh đĩaĐo lườngtính toánΔAXác định=A3-A4=1.3106-1.1183=0.1923，ΔAKhoảng trắng=A1-A2 =1.3325-1.3314=0.0011Tính theo chất lượng mẫu, enzyme sống:

PDHHoạt động(U / g)chất lượng) = 913,81 × (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷W = 1747 U / gChất lượng.

Các tài liệu liên quan:

[1]Peng S, Wang Y, Zhou Y, et al. Ginsenosides hiếm cải thiện kháng insulin cơ tim do quá tải lipid gây ra thông qua điều chỉnh tính linh hoạt trao đổi chất [J]. Phytomedicine, 2019, 58: 152745.

Tài liệu tham khảo:

[1]Guitart M, Andreu A L, García-Arumi E, et al. FATP1 địa phương hóa đến tinh thể và tăng cường hoạt động pyruvate dehydrogenase trong các ống cơ xương [J]. Mitochondrion, 2009, 9(4): 266-272.

Dòng sản phẩm liên quan:

BC0710/BC0715 α-Hạt chia organic (α-KGDH) Bộ kiểm tra hoạt động

BC2150/BC2155Hạt chia organic (CA) Bộ kiểm tra nội dung

BC0950/BC0955Hạt chia organic (SDH) Bộ kiểm tra hoạt động