Chuột Interleukin-1β

Chuột Interleukin-1β ELISA Kit

Giới thiệu nền：

IL-1 được chia thành IL-1a, IL-1β, gen IL-1 ở người và chuột được đặt trong nhiễm sắc thể số 2, cả hai đều chứa 7 exon. Tiền chất IL-1 (ProIL-1) là 31kDa và các phân tử IL-1 trưởng thành được hình thành bằng cách phân giải enzyme thủy phân protein. IL-1 có tính tương đồng cao hơn giữa các chi khác nhau. Ở mức độ axit amin, IL-1α và IL-1β có độ tương đồng 60% đến 70% và 75% đến 78% ở các chi khác nhau. IL-1α và IL-1β có trọng lượng phân tử khoảng 17,5 kDa với các đẳng điện lần lượt là 5 và 7 và có độ tương đồng là 28%.IL-1β, chuột trưởng thành 17kDa, có trình tự axit amin 90% giống với IL-1β ở chuột bông và chuột, và 65% -78% giống với IL-1β ở chó, ngựa, mèo, người, lợn và khỉ.

IL-1β chủ yếu được sản xuất bởi monocytes và đại thực bào trong máu, astrocytes, oligodendrocytes, adrenocorticocytes, NK, endotheliocytes, keratinocytes, megakaryocytes, tiểu cầu, neuron, bạch cầu trung tính, nguyên bào xương, prowants, tế bào tầng nuôi dưỡng, tế bào T và nguyên bào sợi cũng có thể sản xuất IL-1β. IL-1 có tác dụng điều hòa miễn dịch rộng và có tác dụng gây nhiệt và làm trung gian viêm。

Nguyên tắc phát hiện：

Solarbio (Solarbio ®)Bộ dụng cụ ELISA sử dụng công nghệ xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme dựa trên phương pháp kẹp kháng thể kép。Sẽ khángChuộtIL-1βCác gói kháng thể đơn dòng được đặt trên bảng enzyme; Thêm gradient pha loãng tiêu chuẩn và pre-pha loãng mẫu, tiêu chuẩn và mẫu tương ứngChuộtIL-1βSẽ có kháng thể với các gói trên bảng điều khiển.Đầy đủKết hợp;Sau khi rửa tấmThêm kháng biotinChuộtIL-1βKháng thểKháng thể này có liên quan đến IL-1 chuột trong các sản phẩm tiêu chuẩn và mẫu bị bắt bởi kháng thể trên tấm.βPhát sinh kết hợp đặc biệt; Sau khi rửa tấmKết hợp streptomycin được đánh dấu bởi horseradish peroxidase (HRP), biotin xảy ra với streptomycinKhông cộng hóa trị với cường độ caoKết hợp;Sau khi rửa tấmThêm chất nền kết xuất màu TMB，Nếu các mẫu trong lỗ phản ứng có nồng độ khác nhauChuộtIL-1βHRP sau đó sẽ làm cho TMB không màu thành các chất màu xanh nhạt khác nhau (có liên quan tích cực) và lỗ phản ứng sẽ chuyển sang màu vàng sau khi kết thúc dung dịch; Với λ max=450 Nm(OD = 450 nm)Xác định độ hấp thụ mẫu lỗ phản ứng tại chỗ(OD)Trong mẫu.ChuộtIL-1βNồng độ vàODTỷ lệ thuận, nó có thể được tính toán bằng cách vẽ các đường cong tiêu chuẩn và phần mềm phù hợp với bốn tham sốxuấtTrong mẫuChuộtIL-1βNồng độ.

Sơ đồ nguyên tắc:

Lưu ý:※※※

• Bộ dụng cụ nên được sử dụng trong ngày hết hạn, vui lòng không sử dụng thuốc hết hạn.
• Bộ dụng cụ nên được giữ ở mức 2-8 khi không sử dụng℃ Tủ lạnh, đã tannhưngHàng tiêu chuẩn chưa dùng hết, xin hãy vứt bỏ.
• Trước khi sử dụng KitxinPhục hồi ở nhiệt độ phòng 30 phút，Trộn đều các thành phần trong hộp vàChuẩn bịMẫu.
• Các sản phẩm và mẫu tiêu chuẩn trong thử nghiệm được khuyến nghị làm xét nghiệm lại và thứ tự bổ sung thuốc thử phải được duy trì *.
• Để tránh ô nhiễm chéo, hãy sử dụng ống nghiệm thứ cấp 1, đầu súng trong thử nghiệm，Niêm phong tấm phim（※）Và thùng nhựa sạch..
• Khối lượng nhỏ hơn của kháng thể biotin hóa cô đặc và liên kết enzyme cô đặc, trong quá trình vận chuyển một lượng nhỏ chất lỏng sẽ dính vào thành ống và chai

Bìa, trước khi sử dụng xin vui lòng xử lý ly tâm (5-10 S là ok), để chất lỏng trên tường ống tập trung ở dưới cùng của ống, khi lấy nó, xin vui lòng thổi một vài lần cẩn thận với pipet.

• Ngoại trừ chất tẩy rửa cô đặc trong bộ dụng cụvàChất kết thúc có thể được sử dụng phổ biến bên ngoài, xin vui lòng không sử dụng bộ dụng cụ nguồn khácThuốc thử bao gồmThay thế một thành phần riêng lẻ trong bộ dụng cụ này.
• Để đảm bảo kết quả chính xác, mỗi lần kiểm tracầnLàm đường cong chuẩn.

Mẹo an toàn:Chấm dứt trong bộ là dung dịch axit,Nhân viên điều hành ởkhi sử dụngxinĐeo găng tay và chú ý bảo vệ;Trong quá trình vận hành cũng phảiTránh tác nhân tiếp xúc với da và mắt, nếu không cẩn thận, hãy rửa bằng nhiều nước sạch; Khi kiểm tra mẫu máu và các mẫu dịch cơ thể khác, vui lòng thực hiện theo các quy định về quản lý an toàn phòng thí nghiệm sinh học quốc gia.

Thành phần bộ dụng cụ và lưu trữ：

Thiết bị thí nghiệm tự chuẩn bị (không cung cấp, có thể mua hộ)

• Máy đo Enzyme (bước sóng chính 450nm, bước sóng tham chiếu 630nm)
• Pipette chính xác cao và đầu hút dùng một lần: 0,5-10,2-20,20-200,200-1000 μl
• Máy giặt tấm hoặc chai
• 37℃ấpViệthộp
• Hơi nước đôi, nước khử ion, xi lanh đo lường, vv
• Ống polypropylene để pha loãng

Thu thập và lưu trữ mẫu:

• Thanh lọc tế bào:

Di chuyển môi trường tế bào vô trùng ống ly tâm 1000 ở 4 ℃×g ly tâm 10 phút, sau đó phân phối lượng tịnh tương đương vào ống EP nhỏ và vào -2Bảo quản ở 0 ℃(Phát hiện trong vòng 24 giờ có thể được đưa vào lưu trữ 2-8 ℃)Tránh bị đông lạnh nhiều lần.

• Mẫu huyết thanh:

Sau 20 phút đông máu tự nhiên ở nhiệt độ phòng, 1000 ở 4 ℃×g ly tâm 10 phút, sau đó phân phối lượng tịnh tương đương vào ống EP nhỏ và vào -2Bảo quản ở 0 ℃ (kiểm tra trong vòng 24 giờ có thể được đưa vào lưu trữ 2-8 ℃), nếu có kết tủa trong quá trình bảo quản, xin vui lòng ly tâm một lần nữa để tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại.

• Mẫu huyết tương:

Thu thập toàn bộ máu vào ống có chứa thuốc chống đông máu, chọn EDTA, natri citrate hoặc heparin làm thuốc chống đông máu theo yêu cầu thực tế của mẫu vật, trộn 20 phút, 1000 ở 4 ℃×g ly tâm 10 phút, sau đó phân phối lượng tịnh tương đương vào ống EP nhỏ và vào -2Bảo quản ở 0 ℃ (phát hiện trong vòng 24 giờ có thể được đưa vào lưu trữ 2-8 ℃), tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại。

※Chú ý:Các mẫu huyết thanh tránh sử dụng các mẫu máu tan, lipid cao để không ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm；Nếu trong mẫuMục tiêuNồng độ phát hiện cao hơn giá trị cao của sản phẩm tiêu chuẩn, xin vui lòng làm mẫu sau khi pha loãng thích hợp, đề nghị làm thí nghiệm trước khi thử nghiệm chính thức để xác định bội pha loãng.

Chuẩn bị thuốc thử：

• Nhiệt độ thuốc thử: 30 phút trước khi thử nghiệmbộ dụng cụ,Đang được kiểm traMẫuĐặt trongNhiệt độ phòngxuống,Chất tẩy rửa cô đặc Nếu tinh thể xuất hiện, xin vui lòng đặt 37 ℃ tắm ấm cho đến khi tinh thể hòa tan hoàn toàn。
• Công thứcChất tẩy rửa:Tính toán trước dung dịch rửa sau khi pha loãng, sau đóVới hơi nước đôi hoặc nước khử ion sẽ20 lầnChất tẩy rửa cô đặc pha loãng thành1 lầnChất lỏng ứng dụng, chất lỏng rửa cô đặc chưa sử dụng được đưa vào4℃Tủ lạnh được bảo quản.

3. Sản phẩm tiêu chuẩnPha loãng gradient：Thêm sản phẩm tiêu chuẩn/Mẫuthuốc nhét hậu môn suppositoires (Scủa R1)1 mlTrong các sản phẩm tiêu chuẩn đông khô, để yên trong 15 phút * sau khi hòa tan nhẹ nhàng trộn đều (nồng độ là2000pg/ml)， sau đótheoNồng độ sau:2000、1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 pg/ml để pha loãng. mạc đường ruột muqueuses digestives (2000pg / ml)Không sử dụng nên được loại bỏ hoặc theo yêu cầu theo liều lượng một lần và lưu trữ trong tủ lạnh -20~80 ℃,Cụ thể như sauSơ đồ。

4. Chất lỏng làm việc kháng thể biotin hóa:Tính toán trướcKiểm tra nồng độ cholestérol cao antihypercholestérolémique (Scủa R2)100 lần tập trung kháng thểPha loãng1- Tên đề tài: Giải pháp nâng cao hiệu quả đầu tư phát triển kết cấu hạ tầng thương mại (Trộn đều trước khi pha loãng），xinTrong vòng 30 phútCho vào lỗ phản ứng.

Chất lỏng làm việc kháng thể biotin hóa cụ thểPhương pháp pha loãngNhư sau:

5. Kích thước: Freesize (SR3) Pha loãng liên kết enzyme cô đặc 100 lần thànhỨng dụng 1xChất lỏng làm việc（Trước khi pha loãngLy tâm (Vui lòng sử dụng trong vòng 30 phút.。

Chất lỏng làm việc liên kết enzyme cụ thểPhương pháp pha loãngNhư sau:

6. Phương pháp giặt:

• Tấm rửa tự động: chất lỏng trong lỗ của tấm tiêu chuẩn enzyme, vỗ khô trên giấy thấm dày, tiêm chất lỏng rửa là 300ul/lỗ, khoảng cách giữa tiêm và hút là 30 giây, rửa tấm 5 lần.
• Tấm rửa bằng tay: Vứt bỏ chất lỏng trong lỗ của tấm tiêu chuẩn enzyme, vỗ khô trên giấy thấm dày, dùng bình rửa thêm dung dịch rửa 300ul/lỗ, sau khi nghỉ ngơi 30 giây vứt sạch chất lỏng trong lỗ của tấm tiêu chuẩn enzyme, vỗ khô trên giấy thấm dày, rửa 5 lần.

Bước phát hiện:

Kết quả đánh giá：

1. Xác định giá trị ODD với bước sóng 450 nm của máy đo enzyme. Chọn phát hiện bước sóng kép, bước sóng tham chiếu là 630 nm. Nếu bạn không thể phát hiện bước sóng kép, hãy sử dụng bước sóng 450 nmODGiá trị xác địnhtrừ đicủa 630 nmODXác định giá trị.

2. Tính toán giá trị ODD trung bình của các mặt hàng tiêu chuẩn, mẫu: giá trị ODD của mỗi mặt hàng tiêu chuẩn và mẫu vật nên trừ đi giá trị ODD của lỗ 0

3. Lấy nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị ODD hấp thụ làm tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn bằng phần mềm, mẫutrungIL-1βNội dung có thể vượt quaTương ứngGiá trị OD được chuyển đổi thành nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn.

4. Nếu giá trị ODD của mẫu vật cao hơn giới hạn trên của đường cong tiêu chuẩn, nênlàmSau khi pha loãng thích hợpPhát hiện lạiKhi tính nồng độ, nhân với bội số pha loãng.。

Mô tả tham số：

1. Dữ liệu và đường cong tiêu chuẩn

Biểu đồ này chỉ nhằm mục đích tham khảo và phải được tính bằng đường cong tiêu chuẩn được vẽ bởi các sản phẩm tiêu chuẩn của thử nghiệm hiện tạiChuộtIL-1βHàm lượng mẫu

2. Độ nhạy:

Phát hiện thấpChuộtIL-1βNồng độ đạt15ph/ml,

Giá trị trung bình của nồng độ OD của 20 sản phẩm tiêu chuẩn bằng không cộng với hai độ lệch chuẩn để tính toán nồng độ có thể phát hiện tương ứng.

3. Đặc trưng:

Không vớiChuộtIL-2、3、4、6、7、10IL-1a và IL-1RaPhản ứng đẳng cấp

4. Độ lặp lại:

Bên trong tấm, hệ số biến thiên giữa các tấm<10%

5. Tỷ lệ phục hồi:

Trong lựa chọnsức khỏeChuộtHuyết tươngNuôi dưỡng tế bào.Thêm vào 3 mức độ tập trung khác nhauChuộtIL-1βTính toán tỷ lệ thu hồi.

6. Pha loãng tuyến tính：

Lần lượt được chọn4 Sức khỏeXét nghiệm huyết tương và nuôi cấy tế bào ở chuộtThêm nồng độ caoChuộtIL-1βPha loãng trong phạm vi động lực học đường cong tiêu chuẩn, đánh giá tuyến tính.

Tài liệu tham khảo：

1Dinarello, CA (1994) Eur. Mạng Cytokine.5:517.

2Tháng 3, CJ et al. (1985) Thiên nhiên315:641.

3Sims, J.E. và cộng sự (1989) Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ86:8946.

4Sims, JE et al. (1988) Khoa học241:585.

5Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ94:12829.

6Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Hóa học.272:7727.

7Sims, J.E. và cộng sự (1993) Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ90:6155.

8Giri, JG et al. (1994) J. Miễn dịch.153:5802.

9Symons, JA và cộng sự (1995) Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ92:1714.

10Wewers, MD và cộng sự (1997) J. Immunol.159:5964.

11Gonzales-Hernandez, JA và cộng sự (1995) Clin. Exp. Miễn dịch.99:137.

Các vấn đề thường gặp và giải pháp：

Chuột Interleukin-1β ELISA KitHướng dẫn đặt hàng:

1. Tuyệt đại bộ phận sản phẩm chuẩn bị sẵn hàng hiện có, trong tình huống bình thường đều có thể đặt hàng cùng ngày giao hàng.
Một số sản phẩm rất được sử dụng, cần đặt trước 1-2 ngày, hàng hóa tương lai ở nước ngoài cần đặt trước 3-6 tuần.
3. Giá một số sản phẩm sẽ thay đổi do các yếu tố như thời hạn hàng hóa, lô hàng, nếu có thay đổi thì giá mới trong ngày đặt hàng là chuẩn.
4. Thời hạn hết hạn đặt hàng hàng ngày là 16 giờ đúng, một số thành phố có thể đến 17 giờ đúng, do vượt quá thời hạn hết hạn khiến cho ngày hôm đó không thể giao hàng sẽ sắp xếp giao hàng vào ngày hôm sau.
5. Sau khi làm xong tiền hàng, xin thông báo cho chúng tôi biết bằng fax, tin nhắn, v. v. cùng với địa chỉ, họ tên của người nhận hàng.

Mô tả vận chuyển:

Sản phẩm nhiệt độ cực thấp: Vận chuyển bằng đá khô trong quá trình vận chuyển các sản phẩm nhiệt độ cực thấp. Đóng gói sản phẩm bằng đá khô, sau đó niêm phong hộp bọt, băng dính lớp hộp bọt, đặt vào hộp Solebao, sau đó giao cho chuyển phát nhanh hợp tác, giao hàng an toàn và nhanh chóng và hiệu quả cao trong tay khách hàng, đảm bảo tính chất của sản phẩm ổn định như một, hộ tống thí nghiệm của bạn.
Sản phẩm nhiệt độ thấp: Sản phẩm nhiệt độ thấp được vận chuyển với túi đá Solebao trong quá trình vận chuyển. Trước đó sử dụng túi chườm đá để bọc sản phẩm, sau đó sử dụng hộp bọt để niêm phong, băng keo kín để niêm phong hộp bọt, sau đó đặt vào hộp Solebao (hiệu quả giữ nhiệt ít hơn có thể kéo dài một tuần), sau đó giao cho chuyển phát nhanh hợp tác, giao hàng an toàn và nhanh chóng và hiệu quả cao trong tay khách hàng, đảm bảo tính chất của sản phẩm ổn định như một, hộ tống thí nghiệm của bạn.
Sản phẩm nhiệt độ bình thường: Không cần thêm đá hoặc đóng gói đặc biệt trong quá trình vận chuyển sản phẩm nhiệt độ bình thường. Sản phẩm do nhân viên nhà kho của công ty phân phối nhanh chóng, chuyển phát nhanh chính xác và hiệu quả đảm bảo sản phẩm nhanh chóng đến tay bạn.