Bộ xét nghiệm hoạt động Alpha Ketoglutarate Dehydrogenase Phương pháp vi lượng

α-Hạt chia organic (α-KGDH) Hướng dẫn sử dụng bộ thử nghiệm hoạt tính
Phương pháp vi lượng
Lưu ý: thuốc thử của sản phẩm này có sự thay đổi, xin vui lòng chú ý và làm theo hướng dẫn này một cách nghiêm ngặt.
Mã hàng：Bc0715
quy cách：100T/96S
Thành phần sản phẩm: Vui lòng kiểm tra cẩn thận khối lượng thuốc thử và khối lượng trong chai trước khi sử dụng, nếu có thắc mắc, vui lòng liên hệ với nhân viên Solebao kịp thời.

Công thức của giải pháp:

1. Thuốc thử II: là thuốc thử dễ bay hơi, niêm phong càng sớm càng tốt sau khi sử dụng, -20 ℃ bảo quản;

2. B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)1mL thuốc thử 3, đầy đủ hòa tan, dùng không hết thuốc thử2-8℃lưu4tuần;

3. B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)1.5mL thuốc thử 3, đầy đủ hòa tan, dùng không hết thuốc thử-20oC đóng gói bảo quản4Chu, tránh đông lạnh nhiều lần;

4. B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)1mL thuốc thử 3, đầy đủ hòa tan, dùng không hết thuốc thử-20oC đóng gói bảo quản4Tránh đông lạnh nhiều lần (1 viên bột hòa tan có thể làm)100TĐể kéo dài thời gian sử dụng, sản phẩm này cung cấp nhiều hơn.1thuốc trừ sâu);

5. B5-08=giá trị thông số Kd, (cài 2)0,4 mLNước cất, hòa tan hoàn toàn, không sử dụng hết thuốc thử-20℃Bảo quản phụ kiện4Chu, tránh đông lạnh nhiều lần;

6. Chế biến chất lỏng làm việc: lấy 8,05 trước khi sử dụngThuốc thử ml 3,0.2 mLThuốc thử IV, 1mLThuốc thử 5,1,25mLThuốc thử VI, 0,5mLThuốc thử 7(Tổng cộng11mLGiới thiệu55T）Hỗn hợp đầy đủ chờ dùng, hiện dùng hiện phối.

Mô tả sản phẩm:
α-KGDH（EC 1.2.4.2Được tìm thấy rộng rãi trong ty thể của động vật, vi sinh vật thực vật và tế bào nuôi cấy, nó là một trong những enzyme quan trọng để điều chỉnh chu trình axit tricarboxylic, xúc tácα-Quá trình oxy hóa khử carboxyl của axit ketoglutaric tạo ra succinylsupex *A。
α-KGDHXúc tácα-Keto - glutamic acid.NAD⁺ Động tác Balanced force technique (ACO2 vàNADH，NADHở340nmCó đỉnh hấp thụ đặc trưng, đểNADHBiểu diễn tốc độ thế hệα-KGDHHoạt động.

Lưu ý: Trước khi thí nghiệm đề nghị chọn 2 - 3 mẫu có sự khác biệt lớn để làm tiền thí nghiệm. Nếu giá trị hấp thụ ánh sáng của mẫu không nằm trong phạm vi đo lường thì nên pha loãng hoặc tăng kích thước mẫu để kiểm tra.
Dụng cụ và đồ dùng cần tự chuẩn bị:
Máy quang phổ UV/Máy đo Enzyme, Nồi tắm nước/Tủ nuôi cấy nhiệt độ không đổi, Máy ly tâm để bàn, Bộ điều chỉnh Pipet, Đĩa đo màu thạch anh vi lượng/96LỗUVTấm, cối/Máy san lấp mặt bằng, nước đá và nước cất.
Quy trình thực hiện:Xem chi tiết các bước thao tác cụ thể "Thông tin sản phẩm

1. Tất cả các tác nhân và mẫu được đặt trên băng trong quá trình xác định để không bị biến tính và bất hoạt.

2. Nhiệt độ của chất lỏng phản ứng trong đĩa phải được duy trì ở 37 ° C hoặc25℃Lấy một cái cốc nhỏ đựng vào một lượng nhất định.37℃hoặc25℃Nước cất, đặt cốc này vào37℃hoặc25℃Trong nồi nước. Trong quá trình phản ứng, hãy đặt đĩa so màu và chất lỏng phản ứng vào cốc.

3. Tốt nhất là hai người đồng thời làm thí nghiệm này, một người so màu, một người tính giờ, để đảm bảo kết quả thí nghiệm chính xác.

4. Xác định ốngΔAGiá trị trong0.01-0.25Trong khi đó, nếu xác định được ốngΔAGiá trị lớn hơn0.25Cần pha loãng mẫu.

5. Vì chất chiết xuất chứa một nồng độ protein nhất định (khoảng 1 mg/mL), hàm lượng protein của chính chất chiết xuất cần được trừ đi khi xác định nồng độ protein mẫu.

Ví dụ thực nghiệm:

1. Lấy 0,1g cỏ dại để xử lý mẫuSau khi pha loãng 2 lầnThực hiện theo các bước xác định, đo bằng đĩa đo màu thạch anh vi lượngtính toánΔAXác định=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128，ΔAKhoảng trắng=A2-A1=0，Tính theo khối lượng mẫu enzyme sống:

α-KGDHHoạt động(khối lượng U/g)= 1488,5 × (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷W × 2(Số lần pha loãng)=381.056 U/gChất lượng.

1. 0,1g gan chuột được lấy để xử lý mẫu,4 ℃ 11000g ly tâm10 phútSau khi lấy sạch.Thực hiện theo các bước xác định, đo bằng đĩa đo màu thạch anh vi lượngtính toánΔAXác định=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500，ΔAKhoảng trắng=A2-A1=0，Tính theo khối lượng mẫu enzyme sống:

α-KGDHHoạt động(khối lượng U/g)= 1488,5 × (ΔA)Xác định- ΔAKhoảng trắng÷W = 3721,25 U / gChất lượng.
Các tài liệu liên quan:

1. Jianyun Yue, Changjian Du, Jing Ji, et al. Chức chế của Hoạt động α-ketoglutarate dehydrogenase ảnh hưởng đến sự phát triển rễ bất ngờ trong Poplar qua thay đổi trong GABA shunt. Planta. Tháng 7 năm 2018; (IF3.06)

2. Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, et al. lncRNA Ftx thúc đẩy glycolysis aerobic và tiến triển khối u thông qua con đường PPARγ trong ung thư tế bào gan. Tạp chí International Journal of Oncology. Tháng 5 năm 2018; (IF3.571)

Tài liệu tham khảo:
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Nhiệt màu hoạt động α-ketoglutarate dehydrogenase định lượng trong các phần não và trong các tế bào được nuôi trồng [J]. Sinh hóa phân tích, 2000, 277(1): 86-93.
Dòng sản phẩm liên quan:
BC2150 / BC2155 Bộ kiểm tra hàm lượng axit citric (CA)
BC0950 / BC0955 Bộ xét nghiệm hoạt tính Succinate Dehydrogenase (SDH)
BK0380 / BK0385 Bộ xét nghiệm hoạt tính pyruvate dehydrogenase (PDH)
BC2160 / BC2165 Mitochondria Isocitrate Dehydrogenase (ICDHm) Thuốc thử hoạt động

Bộ xét nghiệm hoạt động Alpha Ketoglutarate Dehydrogenase Phương pháp vi lượng Bộ xét nghiệm hoạt động Alpha Ketoglutarate Dehydrogenase Phương pháp vi lượng