Liên kết tinh bột synthase hoạt động thử nghiệm Kit Trace Method

Liên kết tinh bột synthase hoạt động thử nghiệm Kit Trace Method

Lưu ý: Trước khi xét nghiệm chính thức2-3Một mẫu dự đoán có sự khác biệt lớn hơn.

Mã hàng：BC3295

quy cách100T/96S

Nội dung sản phẩm:

Chiết xuất：Chất lỏng 100mL × 1 chai, 4 ℃ bảo quản;

Thuốc thử I: 30mL × 1 chai, 4 ℃ bảo quản;

Thuốc thử II: bột × 1 chai, 4 ℃ bảo quản;

Thuốc thử III: bột × 1 chai, -20 ℃ bảo quản;

Thuốc thử IV: bột × 2 chai, 4 ℃ bảo quản; Trước khi dùng thêm thuốc thử 5 ml một khi trộn đều dự phòng;

Thuốc thử V: bột × 1 chai, 4 ℃ bảo quản; Trước khi dùng thêm thuốc thử 10 ml một khi trộn đều dự phòng;

Thuốc thử VI: bột × 1 miếng, -20 ℃ bảo quản; Thêm 500μL nước hấp đôi trước khi sử dụng, hòa tan hoàn toàn dự phòng;

Thuốc thử VII: chất lỏng 250 μL × 2 chiếc, -20 ℃ bảo quản;

Thuốc thử VIII: chất lỏng 12,5 μL × 2 chiếc; Mỗi nhánh trước khi dùng thêm vào thuốc thử 4 ml đã hòa tan.

Chất lỏng phản ứngⅠPhối chế:Trước khi sử dụng, thuốc thử 14mL I được thêm vào thuốc thử II, đun nóng chậm, dần dần ấm lên để hòa tan, sau khi làm mát, nó được thêm vào hỗn hợp thuốc thử III để hòa tan. Như vậy có thể chia làm hai đợt phối chế và đo lường.

Mô tả sản phẩm:

GBSS (EC 2.4.1.21) tồn tại trong tinh bột ở trạng thái ràng buộc xúc tác cho phản ứng kéo dài của chuỗi tinh bột và chịu trách nhiệm chính trong quá trình tổng hợp amylose.

GBSS xúc tác ADPG phản ứng với mồi tinh bột (glucan), chuyển các phân tử glucose sang mồi tinh bột, đồng thời tạo ra ADP; Tiếp tục xúc tác NADP liên tục thông qua pyruvate kinase, hexokinase và 6-phosphate glucose dehydrogenase được thêm vào hệ thống phản ứng⁺Giảm xuống NADPH, trong đó lượng NADPH được tạo tỷ lệ thuận với số lượng ADP được tạo ra bởi phản ứng trước đó, hoạt động GBSS có thể được tính bằng cách xác định lượng NADPH tăng lên ở 340 nm.

Dụng cụ và đồ dùng cần tự chuẩn bị:

Máy đo quang phổ UV/Enzyme, nồi tắm nước, máy ly tâm để bàn, pipet có thể điều chỉnh, đĩa đo thạch anh dấu vết/tấm 96 lỗ (tấm UV), cối, đá và nước cất.

Quy trình thực hiện:

I. Chuẩn bị chất lỏng enzyme thô

Khoảng 0,1 g mô được thêm vào 1 mL chiết xuất và cân bằng trong bồn nước đá. 10000g ， 4 ℃ ly tâm 10 phút, bỏ đi thanh lọc, thêm 1 mL chiết xuất trong lắng đọng để trộn đều, đặt trên băng để đo.

II. Các bước xác định

1, Máy quang phổ hoặc máy đo enzyme làm nóng trước hơn 30 phút, điều chỉnh bước sóng 340nm, làm 0 nước cất.

2, Thêm các thuốc thử sau vào ống EP theo thứ tự

Ngay lập tức sau khi trộn đều, chuyển 200 μL trong đĩa so sánh thạch anh vi lượng hoặc tấm 96 lỗ, độ hấp thụ A2 sau khi độ hấp thụ ban đầu A1 và 2 phút được ghi lại ở bước sóng 340 nm, tính ΔA=A2-A1.

Chú ý:Thuốc thử thứ hai nếu có lắng đọng, trước khi thêm vào phải hòa tan hoàn toàn.

Ba,GBSSTính toán hoạt động

a.Công thức tính toán được thực hiện bằng cách sử dụng một đĩa đo màu thạch anh vi lượng như sau:

1. Tính theo nồng độ protein mẫu:

Định nghĩa đơn vị: Mỗi mg histone xúc tác sản xuất NADPH 1nmol mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1mL được định nghĩa là một đơn vị hoạt động enzyme.

Hoạt động GBSS (bảo vệ U/mg)=[ΔA ÷ (ε× d) × V đo] ÷ (Cpr × V mẫu ÷ V phản tổng × V Thượng Thanh) ÷ T=432 × A ÷ Cpr

Phương pháp này cần tự xác định nồng độ protein mẫu.

2, Tính toán theo trọng lượng tươi của mẫu

Định nghĩa đơn vị: Mỗi g mô xúc tác tạo ra 1 nmol NADPH mỗi phút trong hệ thống phản ứng 1 mL được định nghĩa là một đơn vị hoạt động enzyme.

Hoạt động GBSS (U/g trọng lượng tươi)=[ΔA ÷ (ε × d) × V đo × 10⁹]÷ (W ÷ V chiết xuất × V mẫu ÷ V phản tổng × V Thượng Thanh) ÷ T=432 × A ÷ W.

V đo: khối lượng đo, 0,26m L; Mẫu V: Thêm thể tích mẫu, 0,1m L; V Phản tổng: Thể tích phản ứng, 0,31mL; V Thượng Thanh: Thêm thể tích thượng thanh, 0,15mL; V Chiết xuất: Thêm thể tích chiết xuất, 1 × 10^-3L; ε: Hệ số tuyệt chủng phân tử NADPH, 6,22 × 10^-3mL/nmoL/cm； d: so sánh đường kính ánh sáng đĩa, 1cm; T: thời gian phản ứng, 2 phút; Cpr: nồng độ protein mẫu, mg/mL； W: chất lượng mẫu, g。

b.Sử dụng96Công thức tính toán để xác định tấm lỗ như sau:

1. Tính theo nồng độ protein mẫu:

Định nghĩa đơn vị: Mỗi mg histone xúc tác sản xuất 1 nmol NADPH mỗi phút trong hệ thống phản ứng được định nghĩa là một đơn vị hoạt động enzyme.

Hoạt động GBSS (bảo vệ U/mg)=[ΔA ÷ (ε× d) × V đo lường] ÷ (Cpr × V mẫu ÷ V phản tổng × V Thượng Thanh) ÷ T=720 × A ÷ Cpr.

Phương pháp này cần tự xác định nồng độ protein mẫu.

2, Tính toán theo trọng lượng tươi của mẫu

Định nghĩa đơn vị: Mỗi g mô xúc tác tạo ra 1 nmol NADPH mỗi phút trong hệ thống phản ứng được định nghĩa là một đơn vị hoạt động enzyme.

Hoạt động GBSS (U/g trọng lượng tươi)=[ΔA ÷ (ε× d) × V đo lường] ÷ (W ÷ V chiết xuất × V mẫu ÷ V phản tổng × V Thượng Thanh) ÷ T=720 × A ÷ W.

V đo: khối lượng đo, 0,26m L; Mẫu V: Thêm thể tích mẫu, 0,1m L; V Phản tổng: Thể tích phản ứng, 0,31mL; V Thượng Thanh: Thêm thể tích thượng thanh, 0,15mL; V Chiết xuất: Thêm thể tích chiết xuất, 1 × 10^-3L; ε: Hệ số tuyệt chủng phân tử NADPH, 6,22 × 10^-3mL/nmoL/cm； d: so sánh đường kính ánh sáng đĩa, 1cm; T: thời gian phản ứng, 2 phút; Cpr: nồng độ protein mẫu, mg/mL； W: chất lượng mẫu, g。

Liên kết tinh bột synthase hoạt động thử nghiệm Kit Trace MethodHướng dẫn đặt hàng:

1. Tuyệt đại bộ phận sản phẩm chuẩn bị sẵn hàng hiện có, trong tình huống bình thường đều có thể đặt hàng cùng ngày giao hàng.
Một số sản phẩm rất được sử dụng, cần đặt trước 1-2 ngày, hàng hóa tương lai ở nước ngoài cần đặt trước 3-6 tuần.
3. Giá một số sản phẩm sẽ thay đổi do các yếu tố như thời hạn hàng hóa, lô hàng, nếu có thay đổi thì giá mới trong ngày đặt hàng là chuẩn.
4. Thời hạn hết hạn đặt hàng hàng ngày là 16 giờ đúng, một số thành phố có thể đến 17 giờ đúng, do vượt quá thời hạn hết hạn khiến cho ngày hôm đó không thể giao hàng sẽ sắp xếp giao hàng vào ngày hôm sau.
5. Sau khi làm xong tiền hàng, xin thông báo cho chúng tôi biết bằng fax, tin nhắn, v. v. cùng với địa chỉ, họ tên của người nhận hàng.

Mô tả vận chuyển:

Sản phẩm nhiệt độ cực thấp: Vận chuyển bằng đá khô trong quá trình vận chuyển các sản phẩm nhiệt độ cực thấp. Đóng gói sản phẩm bằng đá khô, sau đó niêm phong hộp bọt, băng dính lớp hộp bọt, đặt vào hộp Solebao, sau đó giao cho chuyển phát nhanh hợp tác, giao hàng an toàn và nhanh chóng và hiệu quả cao trong tay khách hàng, đảm bảo tính chất của sản phẩm ổn định như một, hộ tống thí nghiệm của bạn.
Sản phẩm nhiệt độ thấp: Sản phẩm nhiệt độ thấp được vận chuyển với túi đá Solebao trong quá trình vận chuyển. Trước đó sử dụng túi chườm đá để bọc sản phẩm, sau đó sử dụng hộp bọt để niêm phong, băng keo kín để niêm phong hộp bọt, sau đó đặt vào hộp Solebao (hiệu quả giữ nhiệt ít hơn có thể kéo dài một tuần), sau đó giao cho chuyển phát nhanh hợp tác, giao hàng an toàn và nhanh chóng và hiệu quả cao trong tay khách hàng, đảm bảo tính chất của sản phẩm ổn định như một, hộ tống thí nghiệm của bạn.
Sản phẩm nhiệt độ bình thường: Không cần thêm đá hoặc đóng gói đặc biệt trong quá trình vận chuyển sản phẩm nhiệt độ bình thường. Sản phẩm do nhân viên nhà kho của công ty phân phối nhanh chóng, chuyển phát nhanh chính xác và hiệu quả đảm bảo sản phẩm nhanh chóng đến tay bạn.