- Thông tin E-mail
- Điện thoại
-
Địa chỉ
Quận Haidian, Bắc Kinh
Danh mục sản phẩm
Bắc Kinh Nobolade Công nghệ Công ty TNHH
T-Carrier Colony PCR Bộ dụng cụ nhận dạng T4 Nguyên tắc Carrier
Có thể đàm phánCập nhật vào05/06
- Mô hình
- Thiên nhiên của nhà sản xuất
- Nhà sản xuất
- Danh mục sản phẩm
- Nơi xuất xứ
Tổng quan
Xác định PCR thuộc địa là cách nhanh nhất để xác định xem có bản sao dương tính (bao gồm cả đoạn chèn) sau khi kết nối nhân bản T-vector hay không. Tuy nhiên, các bộ dụng cụ nhận dạng PCR thuộc địa có thể được nhìn thấy trên thị trường đều sử dụng các mồi mang T đặc biệt như T3, T7 hoặc SP6, chỉ có thể được sử dụng để xác định một số bản sao dương tính của kết nối mang T cụ thể. $r$n Universal T Carrier Colony PCR Nhận dạng Kit T4 Nguyên tắc Carrier
Chi tiết sản phẩm
NameT-Carrier Colony PCR Bộ dụng cụ nhận dạng T4 Nguyên tắc Carrier
Bộ dụng cụ nhận dạng PCR T Carrier Colony phổ quát
Số thư mục:42015
Bộ thành phần, lưu trữ, ổn định:
Thành phần |
80 lần - 100 lần (V015-100) |
400 lần - 500 lần (V015-500) |
2 × Taq PCR MasterMix |
1 ml |
5 ml |
Đầu phổ quát F |
50ml |
250ml |
Đầu phổ biến R |
50ml |
250ml |
ddH2O |
1 ml |
5 ml |
Bảo quản: -20 ℃ Bảo quản.
Các thông số của sản phẩm cụ thể tùy thuộc vào các thông số nhận được hướng dẫn sử dụng sản phẩm
Giới thiệu sản phẩm:
Xác định PCR thuộc địa là cách nhanh nhất để xác định xem có bản sao dương tính (bao gồm cả đoạn chèn) sau khi kết nối nhân bản T-vector hay không. Tuy nhiên, các bộ dụng cụ nhận dạng PCR thuộc địa có thể được nhìn thấy trên thị trường đều sử dụng các mồi mang T đặc biệt như T3, T7 hoặc SP6, chỉ có thể được sử dụng để xác định một số bản sao dương tính của kết nối mang T cụ thể. Nếu sử dụng các phương tiện truyền tải T khác nhau, cần phải mua nhiều bộ dụng cụ giám định cùng một lúc, làm tăng đáng kể chi phí sử dụng. Công ty chúng tôi sử dụng bộ dụng cụ nhận dạng PCR thuộc địa T-Carrier phổ biến được phát triển bởi Universal T-Carrier Primer, chỉ cần mua một bộ dụng cụ, nó có thể được sử dụng để nhận dạng tất cả các bản sao dương tính kết nối T-Carrier phổ biến trên thị trường (bao gồm pGEM, pUC, pBluescript series). Ngoài ra, bộ dụng cụ nhận dạng PCR thuộc địa sử dụng T3, T7 hoặc SP6 làm mồi có khoảng cách rất ngắn đến vị trí chèn, vì vậy khi xác định chèn khoảng 100bp hoặc các mảnh nhỏ hơn, dải dimer của bản sao âm tính và dải khuếch đại nhân bản dương tính có kích thước gần nhau, không thể phân biệt được. Thường coi dải dẫn vật nhị tụ là dải khuếch đại dương tính, tạo thành dương tính giả. Ngược lại, tạo thành âm tính giả. Bộ dụng cụ này có khoảng cách ít nhất 150 bp trở lên khi các mảnh không được chèn, cộng với chiều dài của các mảnh được chèn, có thể phân biệt rõ ràng liệu dải được khuếch đại bởi các mảnh được chèn hay dải được khuếch đại bởi các chất làm mờ chì. Tránh dương tính giả hoặc âm tính giả, nâng cao độ chính xác rất nhiều.Công ty chúng tôi đã phát triển một ống xách tay PCR MasterMix Premix hệ thống, không cần bạn phải thêm các thành phần khác nhau, trực tiếp thêm vào cần sàng lọc các thuộc địa đơn lẻ, sau khoảng 1 giờ phản ứng PCR và kiểm tra điện di có thể nhận được kết quả của việc xác định các thuộc địa tái tổ chức.
Phân đoạn khuếch đại dự kiến:
Name |
Nguồn Carrier |
Khi một mảnh không được chèn Khoảng cách giữa các mồi mang T chung |
Chiều dài phân đoạn được khuếch đại dự kiến (Ví dụ, chèn đoạn 300bp) |
pGEM-T Dễ dàng |
pGEM |
281bp |
581bp |
pGEMX-T Dễ dàng |
pGEM |
289bp |
589bp |
PMD18-T |
cpUC18 |
158bp |
458bp |
PMD19-T |
PUC19 |
158bp |
458bp |
Sản phẩm: pSURE-T |
PUC19 |
239bp |
539bp |
PUCm-T |
PUC19 |
239bp |
539bp |
Sản phẩm: pBLUE-T |
PBluescript |
300 bp |
600bp |
Chú ý:
1. Khi giám định lại các thuộc địa, trước khi chọn ra các thuộc địa đơn lẻ, nên đánh dấu trước, thuận tiện cho việc giám định và sử dụng sau đó.
2. Khi chọn các thuộc địa, bạn nên chọn các thuộc địa đơn lẻ và không chọn quá nhiều để tránh ảnh hưởng đến kết quả PCR.
3. Khi thiết lập chương trình PCR, hãy quyết định thời gian kéo dài theo kích thước mảnh chèn, nếu kích thước mảnh chèn dưới 1 kb, thời gian kéo dài là 30-45 giây, nếu mảnh dài hơn, bạn có thể tăng thời gian kéo dài theo tỷ lệ này.
Các bước thực hiện (25)mlVí dụ về hệ thống, khách hàng cũng có thể áp dụng 20.mlHệ thống):
1. Kết hợp 1 x Taq MasterMix dung dịch phản ứng với mồi theo hệ thống sau.
2 × Taq PCR MasterMix |
12.5ml |
Thủ tướng phổ quát(10)mM) |
0.5ml |
Thủ tướng phổ quát R(10)mM) |
0.5ml |
ddH2O |
11.5ml |
2.Sau khi đánh số khuẩn lạc trên tấm nuôi qua đêm, sử dụng đầu súng khử trùng để chọn một phần khuẩn lạc đơn lẻ cho vào dịch phản ứng nói trên, thổi và trộn đều để khuẩn lạc phân tán đầy đủ vào dịch phản ứng.
Có thể thiết lập thêm một ống đối chiếu âm tính không thêm khuẩn lạc để dễ dàng phân tích kết quả thí nghiệm.
3.Đặt ống PCR trên máy tuần hoàn nhiệt để bắt đầu phản ứng theo các điều kiện sau, các điều kiện được khuyến nghị như sau:
94 ℃ 10 phút
94 ℃ 30 giây
55 ℃ 30 giây 30-33 chu kỳ
72 ℃ 0,5-1 phút
72 ℃ 5 phút
Lưu ý: Thời gian mở rộng Vui lòng điều chỉnh theo kích thước đoạn chèn. Thời gian tiền thoái hóa kéo dài đến 10 phút, chủ yếu để phá vỡ các thuộc địa, giải phóng các mẫu DNA.
Sau khi phản ứng kết thúc, lấy 5-10ml Kiểm tra điện di mẫu trực tiếp.
Lưu ý: Nếu vi khuẩn khó phân hủy hoặc tạp chất đa âm tính giả, hãy thử phương pháp dưới đây để giải phóng DNA.
1. Chọn thuộc địa cho 50.mD. Nước (hoặc 10)mD. trong nước).
2. 99 độ, 10 phút bất hoạt enzyme trong dịch vi khuẩn và giải phóng DNA.
3. 12000rpm ly tâm 1 phút để loại bỏ các mảnh tế bào.
4. Lấy PCR, 25mHệ thống PCR 5mBắt đầu (50)mnước) hoặc 1.mThanh toán (bắt đầu từ 10)md) Làm khuôn mẫu.
T-Carrier Colony PCR Bộ dụng cụ nhận dạng T4 Nguyên tắc Carrier
Sản phẩm tương tự Khuyến nghị