Bộ Cloning Lightning đơn giản TOPO-TA / Blunt

NameBộ Cloning Lightning đơn giản TOPO-TA / Blunt

Bộ Cloning Lightning đơn giản TOPO-TA Blunt

Số danh mục：42212

Nội dung sản phẩm:

Điều kiện bảo quản:

-20℃, lưu trữ12 Một tháng, không ảnh hưởng đến hiệu quả sử dụng.

Giới thiệu sản phẩm:

Nhân bản TA hoặc nhân bản Blunt có thể được hoàn thành trong 20 phút ở nhiệt độ phòng, với tỷ lệ dương tính gần 100%, tắm nước đá miễn phí, nhiệt miễn phí, sàng lọc đốm trắng xanh miễn phí và cũng có thể kết nối các đoạn DNA lên đến 10kb.

Bước nhân bản(≤3kb mảnh)：

Đơn giản hóa các bước(≤10kb) Phân đoạn） Phục hồi miễn phí, chất lỏng miễn phí LB

1, Kết nối: 5 phút ở nhiệt độ phòng；

1. Kết nối: 37 ℃ Kết nối 5 phút。

2, Chuyển đổi: PhòngViệt 5 chuông；

2, Chuyển đổi: Tắm nước đá 5 min， 42 ℃ Kích thích nhiệt 1 min， Băng 2 phút。

3, Phục hồi: 180rpm, 37℃ Văn hóa dao động10 phút; Tấm phủ.

3. Lấy toàn bộ tấm sơn dịch nấm, bồi dưỡng đảo ngược 37 độ C.

Các bước hoạt động:

1. PCRChuẩn bị sản phẩm:

a. Yêu cầu mồi: mồi không thể phosphoryl hóa.

b. Lựa chọn enzyme: Chọn theo nhu cầuDNA polymerase, chất mang tương thíchPCR Sản phẩmA Kết thúc và kết thúc hòa bình.

c. Phát hiện điện diSố lượng và chất lượng sản phẩm PCR:

a) Chỉ có dải mục đích, có thể trực tiếp tiến hành phản ứng kết nối, không cần tinh khiết;

② Nếu có nhiều hơn một dải, gel được khuyến khích để phục hồi các mảnh DNA (DC011-100);

③ Nếu plasmid được sử dụng như một sự khuếch đại của khuôn mẫu, việc thu hồi gel phải được thực hiện vì plasmid khuôn mẫu cũng phát triển các thuộc địa không xác định.

2. Phản ứng kết nối:

1） Nhiệt độ phòng (20 ℃ -37 ℃) Thiết lập hệ thống kết nối (10ul) Hệ thống）：

Số lượng khuyến nghị cho các đoạn chèn kích thước khác nhau:

Sau khi thêm thuốc thử, đáy ống đạn trộn đều (hoặc thổi nhẹ trộn đều)）Nhấn và lắc ly tâm để thu thập tất cả các chất lỏng ở đáy ống ly tâm.

2) Nhiệt độ phòng (20 ℃ -37 ℃)Kết nối5 phút. Các sản phẩm kết nối có thể trực tiếp chuyển đổi các tế bào cảm nhận hoặc đặt trên băng dự phòng.

3. Chuyển đổi, phục hồi, tấm phủ:

1）100ul mạc đường ruột muqueuses digestives (Giới thiệu1 (Khoảng một phút), phủi nhẹ vài lần để treo các tế bào đều.

2） Tham giaChất lỏng kết nối 10ul, trộn đều nhẹ nhàng, nhiệt độ phòng (20 ℃ -37 ℃)Đặt5 phút.

3） Tham giaSố lượng 500ulCân bằng đến nhiệt độ phòngLBHoặcSOC Môi trường (không có kháng sinh), 37℃180 rpmVăn hóa dao động10 phút。

（Lưu ý: Lớn hơnSố lượng 3kb Các đoạn clip, thời gian đào tạo chấn động kéo dài đến 30 - 60 Phút, có thể tăng chuyển hóa tử. Hoặc đơn giản hóa các bước）

4） 取200l mạc đường ruột muqueuses digestives (với ampicin qing mycin50-100ug/ml）， Nuôi dưỡng qua đêm. Để có nhiều bản sao hơn, 4000. rpm Ly tâm1 min， Hút sạch một phần, giữ lại.100-150ul， mạc đường ruột muqueuses digestives (

Lưu ý: Nếu sử dụng5UL Hệ thống, các thành phần giảm một nửa theo tỷ lệ, số lần sử dụng có thể tăng gấp đôi.

4. Giám định sàng lọc chuyển hóa tử:

Tỷ lệ dương tính của sản phẩm này khá cao, nói chung, có thể đạt được những gì bạn nhìn thấy, miễn là các thuộc địa phát triển bình thường (không bị ô nhiễm)Vi khuẩn, số lượng chất chuyển hóa cũng không quá ít.）Cơ bản là bao gồm chèn vào. Vì vậy, chèn các mảnh không vượt quá2-3kb Trong trường hợp không cần giám địnhChọn trực tiếp1 - 2 vi khuẩn để giải trình tự.

1） Thuộc địaPCR Phát hiện: Chọn thuộc địa ở 10ul Nước vô trùng, trộn đều, lấy 1ulĐặt25uL PCR Hệ thống,VớiDẫn PCR hoặc dẫn M13 để xác định nhân bản dương tính.

2）Giải trình tự mồi M13F (-20)/M13R (-26) chung được sử dụng để xác định xem nó có chứa bản sao mục đích hay không.

pTOPO TA/BluntBản đồ tàu sân bay:

pTOPO TA/Blunt Chuỗi tàu sân bay:

Bộ Cloning Lightning đơn giản TOPO-TA / Blunt