Bộ dụng cụ chuẩn bị tế bào cảm thụ hiệu quả cao

Bộ dụng cụ chuẩn bị tế bào cảm thụ hiệu quả cao

Số thư mục:30018

Bộ thành phần, lưu trữ, ổn định:

Sử dụng ngắn hạn 4 ℃, tránh ô nhiễm. Bảo quản lâu dài -20 ℃ có hiệu lực một năm.

Các thông số của sản phẩm cụ thể tùy thuộc vào các thông số nhận được hướng dẫn sử dụng sản phẩm

Giới thiệu sản phẩm:

1. Bộ dụng cụ chuẩn bị tế bào cảm thụ hiệu quả caoLà tiến hành cải tiến thích hợp trên cơ sở phương pháp chuẩn bị tế bào trạng thái cảm thụ hiệu quả cao truyền thống, thao tác tiện lợi, hiệu suất chuyển hóa cao.

2. Sử dụng bộ dụng cụ này có thể làm cho hiệu quả cảm nhận đạt 10⁸Cfu/μg plasmid. Hiệu suất cao hơn một chút đối với các hạt nhỏ, trong khi hiệu suất thấp hơn một chút đối với các hạt lớn. Các tế bào trạng thái thụ cảm hiệu quả cao được chuẩn bị với bộ dụng cụ này không chỉ có thể chuyển đổi plasmid mà còn rất phù hợp để chuyển đổi các sản phẩm kết nối thông thường, đặc biệt trong các tình huống đòi hỏi hiệu quả chuyển đổi cao như chuyển đổi kết nối đầu phẳng.

3. Sử dụng bộ thuốc thử này thao tác đơn giản, sau khi nuôi cấy tốt vi khuẩn chỉ cần khoảng 60 phút là có thể hoàn thành việc chuẩn bị tế bào cảm thụ hiệu quả cao.

4. Bộ dụng cụ này phù hợp với hầu hết các loại E. coli phổ biến, bao gồm Top 10, DH5α, BL21 (DE3), JM109, TG1, HB101 và XL-1. Nhưng các loại nấm khác nhau, hiệu suất chuyển hóa có thể có sự khác biệt rất lớn.

5. Bộ dụng cụ này có thể được sử dụng nhiều lần và tổng cộng 100 tế bào trạng thái cảm nhận 100 μl có thể được chuẩn bị.

v Chú ý:

1. Tất cả thuốc thử, vật tư tiêu hao, dụng cụ, thiết bị phải được khử trùng.

2. LB không có kháng sinh được sử dụng trong quá trình chuẩn bị tế bào thụ thể. LB không có kháng sinh phải được sử dụng trong quá trình nuôi cấy 37 ℃ sau sốc nhiệt trong quá trình sử dụng vi khuẩn thụ thể, ngay cả khi plasmid chuyển vào kháng.

3. Sau khi chuẩn bị xong tế bào cảm thụ, hãy nhanh chóng chuyển sang -70 độ C.

Các bước thực hiện:(Xin vui lòng đọc những lưu ý trước khi thử nghiệm)

1. Lớp phủ phẳng:

Để đạt được hiệu quả cảm thụ tốt nhất, trước hết phải bôi nấm cam dầu hoặc các hình thức bảo quản khác lên máy tính bảng LB và bồi dưỡng qua đêm.

2. Tiêm chủng:

Lấy một máy tính bảng LB có giống nấm mới bồi dưỡng, các thao tác tiếp theo đều được tiến hành trong đài siêu sạch. Nhúng đầu nhíp trong rượu 70% và hơi đốt nó trên đèn rượu, để lại đầu nhíp vô trùng. Dùng nhíp kẹp lấy một đầu súng nhựa vô trùng hoặc tăm, lấy một bản sao từ trên máy tính bảng, sau đó đặt đầu súng nhựa hoặc tăm có nấm nhúng vào trong ống nghiệm nuôi cấy vi khuẩn có chứa 3 ml SOB hoặc LB (khách hàng nên lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp theo từng loại nấm). Các hoạt động trên cũng có thể được thực hiện bằng cách sử dụng vòng tiêm chủng, v.v.

3. Văn hóa:

Nuôi cấy qua đêm ở 37 độ C khoảng 250 vòng/phút, thông thường thời gian nuôi cấy khống chế khoảng 16 giờ là thích hợp. Tuyệt đối không nên vượt quá 18 giờ.

4. Bồi dưỡng lại chủng ngừa:

Căn cứ vào lượng tế bào trạng thái cảm thụ hiệu quả cao cần chuẩn bị, tiêm chủng nuôi cấy với vi khuẩn qua đêm mới nuôi cấy theo tỷ lệ 1:500. Ví dụ, lấy 100 microlitre của vi khuẩn qua đêm tươi vào 50 ml SOB hoặc LB ở 37 ° C khoảng 250 vòng/phút.

5. Chuẩn bị tế bào trạng thái cảm nhận:

ð Lưu ý: Tốc độ quay của máy ly tâm và thời gian ly tâm rất quan trọng đối với việc sản xuất tế bào trạng thái cảm nhận, tốc độ quay và thời gian ly tâm tốt nhất cho các loại vi khuẩn khác nhau là khác nhau, nên được tối ưu hóa theo tình huống cụ thể. Tình trạng tốt nhất là tốc độ quay thích hợp và thời gian ly tâm để cho vi khuẩn vừa vặn lắng đọng ly tâm xuống, nhưng không thể quá chặt chẽ, nếu không treo nặng khó khăn, chỉ có thể thổi mạnh để treo lại, sẽ gây thiệt hại cho tế bào, ảnh hưởng đến hiệu quả chuyển đổi.

1) Khi vi khuẩn nuôi cấy OD600 đạt khoảng 0,5, dịch vi khuẩn nuôi cấy được đặt trong bồn nước đá và để nguội trong 15 phút. LƯU Ý: Tất cả các thao tác tiếp theo phải được thực hiện ở 4 độ hoặc tắm nước đá.

2) 4 ℃ (máy ly tâm phải được làm mát trước) 3000-3500g ly tâm 5 phút để thu thập vi khuẩn, loại bỏ (cố gắng loại bỏ sạch sẽ, dư lượng càng ít càng tốt).

3) Nếu khối lượng vi khuẩn trước khi ly tâm lắng đọng là 50 ml, tiến hành theo thao tác tiếp theo, nếu là khối lượng khác thì tiến hành theo tỷ lệ.

4) Chuẩn bị dung dịch A nhẹ nhàng treo lại vi khuẩn kết tủa (để thuận tiện cho việc treo lại, bạn có thể thêm một lượng nhỏ dung dịch A, treo lại sau đó thêm dung dịch A còn lại), khi thổi treo nặng nhất định phải nhẹ nhàng, nếu không sẽ ảnh hưởng đến hiệu quả.

5) Tắm nước đá 15 phút

6) 4 ℃ (máy ly tâm phải được làm mát trước) 3000-3500g ly tâm 5-7 phút để thu thập vi khuẩn và loại bỏ.

7) Chuẩn bị dung dịch B nhẹ nhàng treo lại lượng mưa vi khuẩn với 2 ml cảm thụ hiệu quả cao trước khi làm lạnh. Thổi lúc nào cũng phải nhẹ nhàng, nếu không sẽ ảnh hưởng đến hiệu quả.

8) Tắm nước đá 15 phút

9) Bồn tắm đá được lắp ráp, có thể lắp ráp thích hợp thành 50 - 200 lít/ống theo yêu cầu.

10) Sử dụng ngay lập tức hoặc bảo quản ở -70 ℃ sau khi đông lạnh nhanh bằng bồn tắm đá khô nitơ lỏng hoặc ethanol.