TRzol (thuốc thử chiết xuất RNA tổng số) (đỏ)

Sản phẩm của công ty chỉ dành cho nghiên cứu khoa học, không được dùng để chẩn đoán lâm sàng!

Giơi thiệu sản phẩm: Thuốc thử TRzol là thuốc thử chiết xuất RNA tổng số trực tiếp từ tế bào hoặc mô. Nó duy trì tính toàn vẹn của RNA khi nó phá vỡ và hòa tan các tế bào. Ly tâm sau khi thêm chloroform, mẫu được chia thành lớp mẫu nước và lớp hữu cơ. RNA được tìm thấy trong các lớp mẫu nước. Sau khi thu thập các lớp mẫu nước ở trên, RNA có thể được phục hồi bằng cách kết tủa isopropanol.

Cho dù đó là mô người, động vật, thực vật hay vi khuẩn, phương pháp này có tác dụng phân tách tốt hơn đối với một số lượng nhỏ và lớn các mô và tế bào. Sự đơn giản trong hoạt động của thuốc thử TRzol cho phép xử lý đồng thời nhiều mẫu. Tất cả các hoạt động có thể được thực hiện trong vòng một giờ. Tổng RNA được rút ra bởi TRzol có thể tránh ô nhiễm DNA và protein. Do đó, có thể thực hiện phân tích dấu vết RNA, lai tạo tại chỗ, lựa chọn poly(A)+, phiên mã in vitro, phân tích bảo vệ enzyme RNA và nhân bản phân tử.

Thuốc thử TRzol có thể thúc đẩy sự kết tủa của nhiều RNA có kích thước phân tử khác nhau trong các chi khác nhau. Ví dụ, RNA lấy từ gan chuột được điện di qua gel agarose và nhuộm với các thỏi ethyl bromide, có thể thấy nhiều dải trọng lượng phân tử cao không liên tục (các thành phần mRNA và hnRNA) giữa 7 và 15 kb, hai ribosome ưu thế~5 kb (28S) và~2 kb (18S) và RNA trọng lượng phân tử thấp giữa 0,1 và 0,3 kb (tRNA, 5S). Khi RNA rút được pha loãng với TE, tỷ lệ A 260/A 280 của nó là ≥ 1,8.

Lưu trữ sản phẩm: TRzol có thể được bảo quản ổn định trong 12 tháng ở nhiệt độ phòng. Tuy nhiên, để đạt được kết quả tốt nhất, chúng tôi khuyên bạn nên bảo quản trong môi trường 2-8 ℃.

Những tác nhân và thiết bị nào cần được sử dụng cho phản ứng PCR?

Thuốc thử:
DNA mẫu: Phản ứng PCR đòi hỏi DNA mẫu, chẳng hạn như chiết xuất DNA từ tế bào, mô, máu, v.v. Dẫn: Hai mồi của phản ứng PCR, một khu vực cụ thể cần thiết để khuếch đại tương ứng với cả hai đầu của DNA mẫu, cũng có thể được tổng hợp thành mồi được sử dụng trong các quá trình như nhân bản TA; dNTP: Bốn dNTP là cần thiết trong phản ứng PCR, bao gồm deoxyadenosine (dATP), deoxythymidine (dCTP), deoxyguanosine (dGTP), deoxycytosine (dTTP), được sử dụng trong các quá trình sinh học như phân chia tế bào, tổng hợp DNA, v.v., để mở rộng và mở rộng các chuỗi DNA mẫu để khuếch đại PCR; Taq DNA polymerase: phản ứng PCR đòi hỏi polymerase, thường sử dụng Taq polymerase, có một số loại polymerase khác như PFU, Phusion và như vậy, được sử dụng để khuếch đại chuỗi DNA; Giải pháp buffer PCR: phản ứng PCR có tác dụng đệm, điều chỉnh pH phản ứng, hydrogen thiosulfate SDS, các hợp chất hữu cơ phân tử nhỏ như formaldehyde, có thể tăng cường tính đặc hiệu của phản ứng PCR, do đó cải thiện hiệu quả phản ứng; Hệ thống cắt enzyme: khuếch đại PCR thường liên quan đến các bước thử nghiệm như tái tổ hợp, xây dựng và giải trình tự, thường đòi hỏi hoạt động cắt enzyme. MARK: Một tiêu chuẩn trọng lượng phân tử được sử dụng để xác định kích thước của các mảnh DNA. Bộ dụng cụ làm sạch DNA: để làm sạch các sản phẩm phản ứng PCR;
Thiết bị:
Máy đo PCR: được sử dụng để kiểm soát nhiệt độ phản ứng và đảm bảo kiểm soát chặt chẽ các liên kết nhiệt độ khác nhau trong phản ứng PCR; Bể điện di: được sử dụng để tách các sản phẩm khuếch đại PCR; Máy chiết xuất axit nucleic: chiết xuất axit nucleic hoàn toàn tự động từ các mẫu mô. Các tác nhân và thiết bị này được sử dụng trong công nghệ sinh học phân tử PCR và phản ứng PCR chỉ có thể được thực hiện trên cơ sở có trật tự và có kết quả chính xác.

Các thí nghiệm cơ bản liên quan đến PCR:

Các bước cơ bản của phản ứng PCR Phản ứng chuỗi polymerase nói chung bao gồm 20 đến 35 chu kỳ, mỗi chu kỳ bao gồm 3 bước sau:

Một,Biến tính:

Sử dụng nhiệt độ cao (93-98 ° C) để tách DNA sợi đôi. Nhiệt độ cao làm gián đoạn liên kết hydro kết nối hai chuỗi DNA. Trước chu kỳ đầu tiên, nó thường được làm nóng trong một thời gian dài để đảm bảo rằng mẫu và mồi được tách ra và chỉ tồn tại ở dạng chuỗi đơn. Bước này mất 1-2 phút, sau đó máy PCR sẽ kiểm soát nhiệt độ vào giai đoạn tuần hoàn.

Hai, ủ hoặc nối, tính phức tạp:

Sau khi tách hai sợi DNA, nhiệt độ giảm xuống cho phép mồi gắn vào DNA sợi đơn. Nhiệt độ ở giai đoạn này thường thấp hơn 5 ° C so với điểm nóng chảy của mồi. Nhiệt độ ủ sai có thể dẫn đến mồi không kết hợp với khuôn mẫu hoặc kết hợp sai. Thời gian của bước này là 1 - 2 phút.

Ba, kéo dài:

DNA polymerase bắt đầu tổng hợp các chuỗi bổ sung dọc theo chuỗi DNA từ các mồi gắn vào khi làm mát. Nhiệt độ trong giai đoạn này phụ thuộc vào DNA polymerase. Thời gian của bước này phụ thuộc vào polymerase cũng như chiều dài của các đoạn DNA cần được tổng hợp. Các Taq truyền thống ước tính rằng sẽ mất khoảng 40 giây để tổng hợp 1000bp/phút, Tbr mới hơn (từ Thermus brockianus) và 10-15 giây để sản xuất polymerase tổng hợp bởi các công ty thương mại.

Tối ưu hóa điều kiện phản ứng PCR:

1. Nhiệt độ và thời gian biến tính:

Đảm bảo sự phân tách DNA mẫu là chìa khóa để đảm bảo sự thành công của toàn bộ quá trình khuếch đại PCR. Nhiệt độ 90~95 ° C, 30~60 giây, các phân tử DNA phức tạp cũng có thể biến đổi thành sợi đơn. Nhiệt độ quá cao hoặc nhiệt độ cao kéo dài quá lâu có thể gây thiệt hại cho hoạt động của enzyme Taq và các phân tử dNTP.

2, nhiệt độ phức tạp và thời gian:

Tính đặc hiệu khuếch đại PCR phụ thuộc vào sự kết hợp của mồi với mẫu trong quá trình phức tạp. Nhiệt độ phức tạp càng cao, tính đặc hiệu của sản phẩm càng cao. Nhiệt độ phức tạp càng thấp, tính đặc hiệu của sản phẩm càng thấp. Cần thiết lập cụ thể theo giá trị TM của dẫn vật.

3, Nhiệt độ và thời gian mở rộng:

Nói chung, nó nằm trong khoảng 70~75 ° C nhiệt độ hoạt động tối ưu của enzyme Taq. Khi mồi nhỏ hơn 16 nucleotide, nhiệt độ mở rộng quá cao không có lợi cho sự kết hợp của mồi và khuôn mẫu, có thể từ từ nóng lên đến 70~75 ° C. Thời gian phản ứng mở rộng, có thể theo chiều dài của mảnh được khuếch đại, dưới 1kb, 1 phút là đủ; Lớn hơn 1kb cần kéo dài thời gian. Các enzyme Taq có thể tăng thời gian dựa trên 1kb/phút. Ở đây cần chú ý, kéo dài thời gian quá dài có thể xuất hiện khuếch đại không đặc biệt. Vì vậy cần thiết lập thời gian kéo dài vừa phải.

4. Số tuần hoàn:

Sau khi các thông số khác được chọn, số lượng chu kỳ PCR chủ yếu phụ thuộc vào nồng độ DNA mẫu. Về mặt lý thuyết, sau 20~25 chu kỳ, sự tích lũy sản phẩm PCR có thể đạt được giá trị tối đa, hoạt động thực tế vì năng suất của phản ứng mỗi bước không thể đạt 100%, do đó, bất kể nồng độ khuôn là bao nhiêu, 20~30 lần là số chu kỳ hợp lý hơn. Số lần tuần hoàn càng nhiều, khuếch đại không đặc hiệu tăng lên.

Sản phẩm công ty đang bán:

TRzol(Tổng Sản phẩm RNA thuốc nhét hậu môn suppositoires (( đỏ )	Bộ xét nghiệm axit nucleic gen Pandemic2009H1N1 cho virus cúm HA	Bộ kiểm tra nội dung Coenzyme Ⅰ NAD (H) (đo màu)
TRzol(Tổng Sản phẩm RNA thuốc nhét hậu môn suppositoires (( Không màu )	Bộ xét nghiệm axit nucleic gen HA phân nhóm H3N2 cho virus cúm theo mùa	NADHạt chia organic (NADK) Hộp kiểm tra (so màu)
TRzol LS(Mẫu chất lỏng Sản phẩm RNA thuốc nhét hậu môn suppositoires (	Bộ xét nghiệm axit nucleic gen H7N9 phân virus HA	Bộ thử nghiệm Lactate Dehydrogenase (LDH) (đo màu)
RNAtinh khiết Tổng số siêu tinh khiết Sản phẩm RNA Bộ chiết xuất nhanh (DNase I)	Bộ xét nghiệm axit nucleic gen cho phân virus H7N9 NA	NAD malate dehydrogenase (NADMDH) thử nghiệm hộp (đo màu)
EASYspin Toàn bộ máu Sản phẩm RNA Bộ chiết xuất nhanh (DNase I)	Bộ xét nghiệm axit nucleic virus cúm B	NADP malate dehydrogenase (NADPMDH) thử nghiệm hộp (đo màu)
EASYspin tổ chức / tế bào Sản phẩm RNA Bộ chiết xuất nhanh (DNase I)	Bộ xét nghiệm axit nucleic dòng Yamagata cho virus cúm B	Tổ hợp chuỗi hô hấp ty thể I/NADH Coenzyme Q Reductase Test Kit (đo màu)
EASYspin thực vật Sản phẩm RNA Bộ chiết xuất nhanh (DNase I)	Bộ xét nghiệm axit nucleic dòng Victoria cho virus cúm B	NADH Oxase (NOX) Test Kit (đo màu)
PLANTaid thực vật Sản phẩm RNA Hỗ trợ nâng	Chủng virus H7N9 đột biến (HPAI-H7) Bộ xét nghiệm axit nucleic	Citrate synthase (CS) Test Box (đo màu)
Bộ gen virus DNA / RNA Bộ chiết xuất nhanh	Bộ xét nghiệm axit nucleic gen HA phân nhóm H1N1 cho virus cúm theo mùa	Hộp kiểm tra hàm lượng ethanol (đo màu)
RNA sạch RNA Bộ dụng cụ làm sạch tinh khiết	Bộ xét nghiệm axit nucleic virus cúm C	Hạt chia organic (ADH) Hộp kiểm tra (so màu)
Chất cố định RNA Nitơ lỏng miễn phí Sản phẩm RNA Chất lỏng lưu trữ mẫu	Bộ xét nghiệm axit nucleic cho virus cúm gia cầm Eurasia (EA-H1N1)	Hộp kiểm tra Formaldehyde Dehydrase (FDH) (đo màu)
An toàn rồi. hiệu quả RNase Bất hoạt	Bộ xét nghiệm axit nucleic cho virus cúm A/B	Bộ thử nghiệm Acetaldehyde dehydrogenase (ALDH) (đo màu)
RNA dài RNA Giải pháp bảo quản dài hạn	Bộ xét nghiệm axit nucleic virus phân nhóm H7N9/chứa nhãn bên trong	NameNADP (H)Hộp kiểm tra nội dung (phương pháp so màu)
RNase đi Loại sẵn sàng để sử dụng mạnh mẽ RNase Bất hoạt	Bộ xét nghiệm axit nucleic phân nhóm H3N2 cho virus cúm theo mùa	NADP Phosphatase (NADPase) thử nghiệm hộp (đo màu)