SILAC Metabolism Marker Dịch vụ thử nghiệm định lượng

SILAC Metabolism Marker Dịch vụ thử nghiệm định lượng

Giới thiệu công nghệ thực nghiệm: Nguyên tắc cơ bản của SIL AC là thay thế các axit amin tương ứng trong môi trường tế bào bằng các axit amin thiết yếu được đánh dấu bằng đồng vị tự nhiên (nhẹ) hoặc đồng vị ổn định (nặng), tương ứng. Sau khi tế bào trải qua 5-6 chu kỳ nhân, các axit amin được đánh dấu bằng đồng vị ổn định * được kết hợp vào protein tổng hợp mới của tế bào để thay thế các axit amin ban đầu. Các protein lysis của các tế bào được đánh dấu khác nhau được trộn lẫn theo tỷ lệ như số lượng tế bào hoặc lượng protein, được xác định bằng phổ khối sau khi tách, tinh chế và được định lượng tương đối theo so sánh diện tích của hai phân đoạn peptide loại đồng vị trong sơ đồ khối phổ cấp một. Thuộc về phương pháp đánh dấu trao đổi chất trong cơ thể.

Quy trình vận hành thử nghiệm:

1, chiết xuất protein và chuẩn bị mẫu

2, Kiểm tra hiệu quả đánh dấu

3, bảng trộn mẫu

4, Xếp hạng SDS-PAGE

5, Phân giải enzyme

6. Xác định khối phổ

7, Phân tích phần mềm

8, Kết quả định lượng protein

9, Khai thác dữ liệu tin sinh học và phân tích thống kê

Lưu ý thí nghiệm:

Khách hàng cung cấp:

1. Chiết xuất protein: Nồng độ>1 μg/ul và tổng lượng protein>300 μg.

Tế bào: Lấy không ít hơn 2x106 tế bào trong ống EP thông qua số lượng tế bào, thêm 0,5ml nước muối sinh lý hoặc chất bảo vệ protein, sau khi trộn đều bảo quản trong tủ lạnh (-80 ° C, tránh đông lạnh nhiều lần).

Tiêu chuẩn giao hàng:

1. Xác định protein và kết quả phân tích định lượng SIL AC;

Khách hàng có nghĩa là dingBiểu đồ đỉnh khối phổ tương ứng với protein;

3, SIL AC thử nghiệm đầy đủ các bước thử nghiệm, sử dụng dụng cụ, phần mềm truy xuất các thông số, vv

Khác:

SILAC là công nghệ đánh dấu trong cơ thể, tính chất hóa học của axit amin được đánh dấu đồng vị ổn định và axit amin tự nhiên về cơ bản giống nhau, các tế bào được đánh dấu và các tế bào không được đánh dấu hầu như không có sự khác biệt trong hành vi sinh học, hiệu quả đánh dấu có thể lên tới 100%.

2. Áp dụng định lượng phổ khối, kết quả định lượng chính xác và biến dị hàng loạt nhỏ, tính lặp lại tốt.

3, dấu hiệu trao đổi chất trong cơ thể kết hợp với SDS-PAGE hoặc công nghệ tách sắc ký, tương thích với protein kỵ nước và protein thiên kiềm, không bị giới hạn bởi tính chất protein.

4, Tách, cắt enzyme và xác định đồng thời sau khi trộn nhiều mẫu. Tác động của các thí nghiệm tiếp theo đối với mẫu là nhất quán, làm giảm tác động của hoạt động thí nghiệm và thiết bị đo đạc.

5, vì công nghệ này thuộc về đánh dấu cơ thể, hiệu quả đánh dấu ổn định, hiệu quả đánh dấu của nó không bị ảnh hưởng bởi chất lỏng lysis, không chỉ thích hợp để tiến hành phân tích protein toàn bộ tế bào, mà còn để xác định và định lượng protein màng.

So với đánh dấu hóa học, nhu cầu protein phương pháp SIL AC giảm đáng kể, thường chỉ cần vài chục microgram protein cho mỗi mẫu.

7, đánh dấu cơ thể sống, gần hơn với tình trạng thực tế của mẫu.

8, chỉ áp dụng cho các tế bào nuôi cấy sống, cho các mẫu mô thường được sử dụng trong nghiên cứu y sinh, các mẫu chất lỏng cơ thể và như vậy không thể được phân tích, chi phí đánh dấu cho các mô hình động vật là quá lớn để đạt được. So với công nghệ đánh dấu in vitro, SIL AC thuộc về đánh dấu in vivo và có những ưu điểm kỹ thuật sau:

Thông lượng cao, có thể xác định và định lượng hàng trăm đến hàng ngàn protein cùng một lúc;

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)Giảm sự khác biệt trong thí nghiệm do chuẩn bị mẫu khác nhau;

3. Phạm vi định lượng tuyến tính rộng;

4, độ nhạy cao hơn, nhu cầu protein giảm rõ rệt;

5. Đánh dấu áp dụng công nghệ đánh dấu trong cơ thể, gần với tình trạng thực tế của mẫu hơn.

Nội dung dịch vụ kỹ thuật SILAC

1, đánh dấu đồng vị tế bào;

Tách SDS-PAGE;

4, tách pha lỏng và phân tích phổ khối sau khi cắt enzyme tụy;

5- Truy xuất cơ sở dữ liệu và phân tích định lượng protein;

Phân tích tin sinh học của protein khác biệt;

7. Trình báo cáo thí nghiệm.

Nội dung báo cáo dịch vụ thử nghiệm

1. Xác định protein và kết quả phân tích định lượng SIL AC;

2.Khách hàng nói DingBiểu đồ đỉnh khối phổ tương ứng với protein;

3, SIL AC thử nghiệm đầy đủ các bước thử nghiệm, sử dụng dụng cụ, phần mềm truy xuất các thông số, vv

Lợi thế dịch vụ kỹ thuật

1, độ nhạy cao, giới hạn phát hiện thấp, có thể phát hiện protein phong phú thấp;

2, khả năng phân lập mạnh mẽ, phạm vi phân tích rộng, iTRAQ có thể xác định bất kỳ loại protein nào, bao gồm protein trọng lượng phân tử cao, protein axit và protein kiềm, protein màng và protein không hòa tan;

Thông lượng cao: 8 mẫu được phân tích cùng một lúc, cải thiện thông lượng thí nghiệm, có thể phân tích nhiều điểm thời gian hoặc các protein được xử lý khác nhau cùng một lúc;

4. Kết quả đáng tin cậy: Kết quả phân tích định tính và định lượng đáng tin cậy hơn;

5, mức độ tự động hóa cao: pha lỏng và phổ khối được sử dụng, hoạt động tự động, tốc độ phân tích nhanh và hiệu quả tách tốt.

Dịch vụ thay thế thí nghiệm: