Xét nghiệm phổ gelatinase MMP (2/9)

Xét nghiệm phổ gelatinase MMP (2/9)

Phổ enzyme (Zymography) phát hiện hoạt động MMP-2, MMP-9 dựa trên các phương pháp thử protease của SDS-PAGE điện di và nhuộm gel phản pha, với độ nhạy lên đến 10pg, cao hơn phương pháp ELISA.

Các nguyên tắc và thủ tục cơ bản là: để tách các mẫu chứa protease bằng gel SDS-PAGE với chất nền collagen, lấy gel ra sau khi điện di kết thúc để phản ứng với enzyme Buffer ủ, nhuộm gel và khử màu. Gel được nhuộm sâu do protein cơ chất, hình thành nền tối, nhưng ở vị trí có dải protease, protease sẽ làm suy giảm protein cơ chất trong gel, do đó không bị nhuộm và hình thành một khu vực sáng, có thể đồng thời chỉ ra vị trí MMP-2, MMP-9 (phổ enzyme), có thể phát hiện mẫu máu, dịch tiết ra, chiết xuất tế bào, v.v.

Chu kỳ dịch vụ: 10 ngày làm việc

Cung cấp kết quả: Báo cáo kết quả, hình ảnh đại diện, quy trình vận hành và thông tin về thiết bị thuốc thử liên quan.

Xét nghiệm phổ gelatinase MMP (2/9)Cung cấp mẫu cần biết:

1) Khách hàng thông báo cho nhóm thử nghiệm, số lượng và thông tin thiết kế nền, yêu cầu cụ thể xin vui lòng giải thích trước;

2) Thu thập, bảo quản và vận chuyển mẫu vật:

① Mẫu mô: mô tươi được đưa vào nitơ lỏng hoặc -70 độ để bảo quản, mô không ít hơn 100mg;

② Nuôi cấy tế bào: lấy không ít hơn 2x106 tế bào vào ống EP thông qua số lượng tế bào, thêm 0,5ml nước muối sinh lý, trộn đều rồi bảo quản trong tủ lạnh (-70 ° C, tránh đông lạnh nhiều lần);

③ Mẫu tế bào máu: Bảo quản mẫu máu bằng ống chống đông hoặc tách tế bào bằng dịch bạch huyết sau khi thêm 0,5ml nước muối sinh lý, bảo quản (-70 ° C có thể bảo quản lâu dài, tránh đông lạnh lặp đi lặp lại)

④ Huyết thanh hoặc tế bào nuôi cấy mẫu vật: Ly tâm loại bỏ tạp chất sau đó lấy làm sạch vào ống EP, bảo quản (49C có thể bảo quản 15-20 ngày, -70 ° C có thể bảo quản lâu dài, tránh đông lạnh lặp đi lặp lại)

4) Vận chuyển mẫu:

① Mẫu mô, mẫu tế bào được vận chuyển bằng đá khô;

b) Mẫu tế bào cũng có thể gửi trực tiếp bình nuôi cấy (niêm phong đảm bảo không ô nhiễm, dịch nuôi cấy không rò rỉ);

Huyết thanh hoặc dịch thượng thanh trực tiếp thêm túi chườm đá (lộ trình đưa tiễn cách đây gần 2 - 3 ngày là đến nơi).

Thông báo khách hàng:

Hệ thống xét nghiệm có tham chiếu dương tính hoặc nhân sâm nội bộ, trích dẫn chiết xuất protein

Lưu ý thí nghiệm:

1. Cần chú ý để loại bỏ bong bóng khi chuẩn bị polyacrylamide.

2. Hoạt động của phổ gelatinase bị ảnh hưởng bởi các ion canxi, ion kẽm, và các yếu tố như giá trị PH, do đó, việc xây dựng bộ đệm nên nghiêm ngặt và chính xác, cố gắng sử dụng nước siêu tinh khiết, nhiệt độ ủ cũng tốt.

3. Với lược lớn

Độ pH của chất lỏng ủ là 7,5-7,6, Triton phức tạp trong một thời gian dài sẽ có floc, vì vậy hãy cố gắng sử dụng cấu hình tươi khi thử nghiệm.

Không nên ủ 37 độ trong môi trường CO2, vì nó sẽ thay đổi giá trị PH của dịch ấp, trong một hộp ấp thông thường là được.

Gelatin phải được bảo quản 4 độ và sử dụng trong vòng 1 tuần sau khi kết hợp

Dịch vụ thay thế thí nghiệm: