Tiêu chuẩn phân phối dịch vụ kiểm tra tùy chỉnh cho chip RNA vòng

Dịch vụ kiểm tra tùy chỉnh chip RNA vòng

Giới thiệu công nghệ thí nghiệm: RNA vòng(ircRNA) là một loại RNA mới được phân biệt với RNA tuyến tính truyền thống, có cấu trúc vòng kín và được tìm thấy với số lượng lớn trong nhóm phiên mã nhân chuẩn. Hầu hết các RNA vòng được tạo thành từ các trình tự exon, được bảo tồn ở các loài khác nhau, đồng thời có tính biểu hiện đặc trưng của các mô và các giai đoạn phát triển khác nhau. DoRNA vòngKhông nhạy cảm với nuclease, vì vậy nó ổn định hơn RNA tuyến tính, mang lại cho RNA vòng một lợi thế rõ ràng trong việc phát triển các ứng dụng như các dấu hiệu chẩn đoán mới. Các nghiên cứu gần đây cho thấy RNA vòng đóng vai trò như bọt biển miRNA ở các loài khác nhau, được gọi là RNA nội sinh cạnh tranh (ceRNA), có thể liên kết cạnh tranh với miRNA. Và sự tương tác với miRNA liên quan đến bệnh cho thấy RNA vòng đóng một vai trò rất quan trọng trong việc điều tiết bệnh.

Quy trình vận hành thử nghiệm:

1, Rút mẫu RNA

2, Kiểm tra chất lượng RNA

① Xác định giá trị hấp thụ RNA trong máy quang phổ 260nm, 280nm và 230nm bằng Nanodrop để tính nồng độ và đánh giá độ tinh khiết.

b) Dùng thuốc thử điện di formaldehyde để tiến hành điện di gel agarose biến tính, kiểm tra độ tinh khiết và tính hoàn chỉnh của RNA.

③ Cung cấp báo cáo RNA QC.

Xử lý RNase R

4, tổng hợp và đánh dấu mẫu cDNA/aRNA

5, Kiểm tra chất lượng hiệu quả đánh dấu sử dụng Nanodrop để phát hiện hiệu quả đánh dấu huỳnh quang, hiệu quả đánh dấu đủ điều kiện để đảm bảo độ tin cậy của kết quả thí nghiệm chip tiếp theo.

6, Chip lai

Các đầu dò được đánh dấu và chip gen mật độ cao được lai tạo trong điều kiện tiêu chuẩn.

7, Thu thập hình ảnh và phân tích dữ liệu

Sử dụng máy quét mặt trăng lõi GenePix 4000B để quét cường độ huỳnh quang của chip và chuyển đổi kết quả thí nghiệm sang lưu trữ dữ liệu kỹ thuật số, sử dụng phần mềm đồng hành để phân tích dữ liệu thô.

8, Cung cấp báo cáo thử nghiệm

Scanning Image: Hình ảnh quét huỳnh quang Cy3

② Scatter Plot: Biểu đồ phân tán, trục X là giá trị tín hiệu Control, trục Y là giá trị tín hiệu Experiment, đại diện cho xu hướng phân phối dữ liệu tín hiệu tổng thể;

③ Raw Data: dữ liệu thô về cường độ tín hiệu huỳnh quang quét của đầu dò;

Normalized Data: Các giá trị sau khi được chuẩn hóa theo phương pháp thống kê;

P-value: T-test phân tích thống kê các gen biểu hiện sự khác biệt đáng kể, p-value càng nhỏ, circRNA biểu hiện sự khác biệt đáng kể giữa các mẫu.

⑥ Significant Up&Down Regulated CircRNA List: Danh sách các circRNA thể hiện sự khác biệt đáng kể chứa các chú thích chi tiết về Fold Change, p-valuel và circRNA (các vị trí liên kết mRNA và miRNA tuyến tính tương ứng).

Khách hàng cung cấp:

Đối tượng thử nghiệm là mẫu mô, lấy một lượng vừa phải (50-100mg) mẫu mô tươi hoặc mẫu mô được bảo quản đúng cách, sử dụng

BioPulverizer TM đóng băng các mô, cộng với thuốc thử chiết xuất RNA TRIzol (Invitrogen) 1m, sau khi chiết xuất RNA bằng cách sử dụng Mini-Bead-Beater-16 homogen.

Đối tượng thí nghiệm là mẫu tế bào, mỗi mẫu lấy tế bào 1x106~1x107, cộng thêm thuốc thử rút RNA TRIzol 1m (mẫu là tế bào dán tường, mỗi đĩa petri 10cm2 TRIzo1 sử dụng 1ml), sau khi phân giải rút RNA.

Tiêu chuẩn giao hàng:

1, Chip phát hiện dữ liệu

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

Dịch vụ thay thế thí nghiệm: