RNAclean RNA sạch Kit

PCRNhững tác nhân và thiết bị nào cần được sử dụng cho phản ứng?

Thuốc thử:
MẫuDNA：PCRPhản ứng cần templateDNAnhư chiết xuất từ tế bào, mô, máuDNAĐợi đã. Dẫn:PCRHai mồi của phản ứng, tương ứng với khuôn mẫuDNAHai đầu ghép đôi mở rộng khu vực cụ thể cần thiết, mồi cũng có thể tổng hợp thànhTADẫn vật được sử dụng trong quá trình nhân bản;dNTP：PCR4 Phản ứng cần thiếtdNTPHạt chia organic (dATP), khử oxy hoá.dCTP), khử oxy hoá.dGTP), axit khử oxy.dTTP) Dùng để phân chia tế bào,DNACác quá trình sinh học như tổng hợp, được sử dụng đểPCRMở rộng mẫuDNAMở rộng và mở rộng chuỗi;DNA của TaqChất polymerase:PCRPolymerase cần thiết cho phản ứng, thường được sử dụngTaqpolymerase và một số loại polymerase khác nhưPFU、PhusionĐợi đã, dùng để khuếch đại.DNAXích;Bộ đệm PCRGiải pháp: ĐúngPCRPhản ứng có tác dụng đệm, điều chỉnh phản ứngpH,Hydrogen thiosulfate muốiSDS, các hợp chất hữu cơ phân tử nhỏ như formaldehyde, có thể tăng cườngPCRphản ứng cụ thể, do đó cải thiện hiệu quả của phản ứng; Hệ thống cắt enzyme:PCRSự khuếch đại thường liên quan đến các bước thử nghiệm như tái tổ hợp, xây dựng và giải trình tự, và thường đòi hỏi các hoạt động cắt enzyme.Nhãn hiệu:Một tiêu chuẩn trọng lượng phân tử để phân biệtDNACông cụ Fragment SizeDNABộ dụng cụ tinh khiết: để tinh khiếtPCRSản phẩm phản ứng;
Thiết bị:
PCRDụng cụ: để kiểm soát nhiệt độ phản ứng, đảm bảoPCRKiểm soát chặt chẽ các liên kết nhiệt độ khác nhau khi phản ứng; Bể điện di: để táchPCRSản phẩm mở rộng; Máy chiết xuất axit nucleic: chiết xuất axit nucleic hoàn toàn tự động từ các mẫu mô. Các chất và thiết bị này đượcPCRCác kỹ thuật sinh học phân tử đều có, chỉ có thể được thực hiện trên cơ sở có trật tự và đầy đủ.PCRphản ứng và có kết quả chính xác.

Sản phẩm của công ty chỉ dành cho nghiên cứu khoa học, không được dùng để chẩn đoán lâm sàng!

PCRCác thí nghiệm cơ bản liên quan:

PCRPhản ứng Các bước cơ bản Phản ứng chuỗi polymerase tổng hợp20Đến35Mỗi vòng lặp bao gồm:3Một bước:

Một, biến tính:

Nhiệt độ cao (93-98℃) Làm cho chuỗi đôiDNATách ra. Nhiệt độ cao sẽ kết nối haiDNALiên kết hydro của chuỗi bị gián đoạn. Trước chu kỳ đầu tiên, nó thường được làm nóng trong một thời gian dài để đảm bảo rằng mẫu và mồi được tách ra và chỉ tồn tại ở dạng chuỗi đơn. Thời gian của bước này1-2phút, tiếp theoPCRMáy điều khiển nhiệt độ đi vào giai đoạn tuần hoàn.

II. Ủ hoặc tham gia,Độ phức tạp:

ởDNASau khi tách chuỗi đôi, nhiệt độ giảm sao cho mồi có thể được kết hợp với chuỗi đơnDNALên đi. Nhiệt độ ở giai đoạn này thường thấp hơn điểm nóng chảy của mồi.5℃. Nhiệt độ ủ sai có thể dẫn đến việc mồi không kết hợp với mẫu hoặc kết hợp sai. Thời gian của bước này1-2phút.

Ba, kéo dài:

DNAPolymerase bắt đầu dọc theo các mồi liên kết với nhau khi làm mátDNAChuỗi tổng hợp các chuỗi bổ sung. Nhiệt độ trong giai đoạn này phụ thuộc vàoDNAPolymerase. Thời gian của bước này phụ thuộc vào polymerase và những gì cần tổng hợp.DNAĐộ dài của Fragment Truyền thốngTaqTổng hợp ước tính1000bp / phútMới hơn.Tbr(Ảnh: Thermophiles)Vi khuẩn gây sốt Brinella) Khoảng40Các loại polymerase tổng hợp do các công ty thương mại sản xuất chỉ cần khoảng10-15Giây.

Sản phẩm công ty đang bán:Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò phổ quát cho virus viêm gan vịtVirus viêm gan vịt (DHV)

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò virus sốt vịtVirus dịch bệnh vịt (DPV)

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang theo phương pháp thăm dò phổ quát E. coli (bao gồm cả gây bệnh và không gây bệnh)E. coli

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Fine Grain Echinococcus ProbeEchinococcus hạt

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò phổ quát EchinococcusEchinococcus spp.

鮰 Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò Fahrenheit EddardEdwardsiella ictaluri

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Edwardian Universal ProbeEdwardsiella spp.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò Edwardian chậm chạpLời bài hát: Edwardsiella tarda

RT-1976 (RT-76) Hội chứng giảm trứng gà Virus RT-1976 Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dòVirus hội chứng rơi trứng-1976 (EDSV-76) -1976

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò chó ErichChủ đề: Ehrlichia canis

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò Chaffee Erich Body (Chaffee Erich Body)Chủng tộc Ehrlichia chaffeensis

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Ferguson-ErichChủng tộc Ehrlichia fergusonii

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò RicheticChủng tộc Ehrlichia risticii

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò Erich thú nhai lạiChủng tộc Ehrlichia ruminantium

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò phổ quát Erich Genus (Erich Genus)Vi khuẩn Ngải.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Aikenella gặm nhấmEikenella ăn mòn

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò phổ quát Aimerium SphereEimeria spp.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò tuyến trùng mỡ SchössNhà sản xuất Elaeophora schneideri

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò vi khuẩn Imon MicrobacteriaBệnh tật Emmonsia parva

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Universal · Phương pháp thăm dòEncephalitozoon spp.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò Entameba mô hòa tanEntamoeba histolytica

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Entameba Universal ProbeEntamoeba spp.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Adenovirus Type 41 ProbeAdenovirus ruột41

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò E. coli xâm lấn ruộtE.coli xâm nhập (EIEC)

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò E. coli dính ruộtE.Coli dính vào ruột (EAEC)

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterobacterium GasogenesisEnterobacter aerogenes

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterobacterium GutterCuộc sống của Enterobacter cloacae

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterobacterium HansakiEnterobacter sakazaki

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò phổ quát EnterobacteriumEnterobacter spp.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterococcus chìCuộc sống của Enterococcus casseliflavus

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterococcus bền bỉCuộc sống của Enterococcus durans

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterococcus phânCuộc sống của Enterococcus faecalis

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò Enterococcus ShitCuộc sống của Enterococcus faecium

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò phổ quát EnterococcusNhóm Enterococcus spp.

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò Microsporidium BicensusEnterocytozoon bieneusi

Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò vi bào ruột gan tômEnterocytozoon hepatopeneei (EHP)

E. coli xuất huyết ruột O104 H4 Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò loại huyết thanhE. coli xuất huyết ruột (EHEC)

PCRTối ưu hóa điều kiện phản ứng:

1Nhiệt độ và thời gian biến tính:

Mẫu bảo hànhDNAChuỗi cung ứng đảm bảo toàn bộPCRChìa khóa để mở rộng thành công. đun nóng90~95°C, 30~60sphức tạp hơn nữa.DNACác phân tử cũng có thể biến đổi thành chuỗi đơn. Nhiệt độ quá cao hoặc nhiệt độ cao kéo dài quá lâu, có thểTaqHoạt động của enzyme vàdNTPPhân tử gây thiệt hại.

2, nhiệt độ phức tạp và thời gian:

PCRĐộ đặc hiệu khuếch đại phụ thuộc vào sự kết hợp của mồi với mẫu trong quá trình phức tạp. Nhiệt độ phức tạp càng cao, tính đặc hiệu của sản phẩm càng cao. Nhiệt độ phức tạp càng thấp, tính đặc hiệu của sản phẩm càng thấp. Cần dựa vào mồiTmCác giá trị đặt cụ thể.

3, kéo dài nhiệt độ và thời gian:

thường nằmTaqNhiệt độ hoạt động tối ưu của enzyme70~75°CGiữa. mồi nhỏ hơn16Khi một nucleotide, nhiệt độ kéo dài quá cao không có lợi cho sự kết hợp của mồi và khuôn mẫu, có thể từ từ nóng lên đến70~75°C. kéo dài thời gian phản ứng, có thể tùy thuộc vào độ dài của mảnh được khuếch đại, nhỏ hơn1 kb, 1 phútđủ; Lớn hơnSố lượng 1kbCần kéo dài thời gian.TaqEnzyme có thể1 kb / phútTăng thời gian. Ở đây cần chú ý, kéo dài thời gian quá dài có thể xuất hiện khuếch đại không đặc biệt. Vì vậy cần thiết lập thời gian kéo dài vừa phải.

4Số vòng lặp:

Sau khi các thông số khác được chọn,PCRSố vòng lặp phụ thuộc chủ yếu vào mẫuDNANồng độ. Theo lý thuyết thì20〜25Sau lần tuần hoàn,PCRSự tích lũy của sản phẩm có thể đạt được giá trị tối đa, hoạt động thực tế không thể đạt được do năng suất của từng bước phản ứng100%Cho dù nồng độ khuôn mẫu là bao nhiêu,20~30Thứ hai là số lần tuần hoàn tương đối hợp lý. Số lần tuần hoàn càng nhiều, khuếch đại không đặc hiệu tăng lên.