thụ thể interleukin 7 (hòa tan) ELISA KIT

thụ thể interleukin 7 (hòa tan) ELISA KIT

thụ thể interleukin 7 (hòa tan) ELISA KITNó là một công cụ để kiểm tra định lượng hàm lượng thụ thể interleukin 7 hòa tan trong các mẫu sinh học, được sử dụng rộng rãi trong các lĩnh vực nghiên cứu miễn dịch học.

1. Nguyên tắc phát hiệnPhương pháp Dual Antibody Sandwich ELISA Các tấm micropore trong bộ dụng cụ đã được bọc trước để chống lại các kháng thể cụ thể chống lại thụ thể interleukin 7 hòa tan. Khi mẫu được thêm vào, các thụ thể interleukin 7 hòa tan trong mẫu liên kết với các kháng thể pha rắn. Kháng thể thụ thể interleukin 7 kháng hòa tan được đánh dấu bởi enzyme sau đó được thêm vào, tạo thành phức hợp "kháng thể pha rắn-thụ thể interleukin 7 hòa tan-kháng thể enzyme" với các thụ thể đã gắn vào pha rắn. Sau một bước rửa để loại bỏ các chất không liên kết và thêm vào một dung dịch cơ chất (ví dụ: TMB), dưới tác dụng xúc tác của enzyme, chất nền trải qua phản ứng tạo màu và độ sâu của màu tỷ lệ thuận với hàm lượng thụ thể trung gian trắng hòa tan 7 trong mẫu. Nồng độ của thụ thể này trong mẫu có thể được tính toán bằng cách đo độ hấp thụ bằng máy đo enzyme ở bước sóng cụ thể (thường là 450nm) so với đường cong tiêu chuẩn.

2. Thành phần Kit

• Enzyme liên kết tấm: 96 hoặc 48 lỗ, được bao bọc trước bởi kháng thể thụ thể interleukin 7 kháng hòa tan, là chất mang của phản ứng.

• Sản phẩm tiêu chuẩn: Thường là đồ đông khô, có 2 chai. Trước khi sử dụng cần pha loãng dung dịch tiêu chuẩn để hòa tan và pha loãng thành các gradient nồng độ khác nhau, chẳng hạn như 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL, v.v., để vẽ đường cong tiêu chuẩn.

• Mẫu xi giải phóng: Được sử dụng để pha loãng các mẫu được thử nghiệm với nồng độ quá cao, đảm bảo nồng độ của chúng nằm trong phạm vi phát hiện của bộ dụng cụ.

• Kháng thể Enzyme: Đó là kháng thể thụ thể interleukin 7 kháng hòa tan được đánh dấu bằng HRP, là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng với kháng thể enzyme theo yêu cầu.

• Dung dịch pha loãng kháng thể Enzyme: Đặc biệt dùng để pha loãng kháng thể enzyme.

• Giải pháp cơ sởVí dụ, chất nền TMB có thể phản ứng với HRP trong kháng thể nhãn enzyme để tạo ra sự thay đổi màu sắc.

• Chất tẩy rửa: Nói chung là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng theo tỷ lệ với nước cất hoặc nước khử ion, được sử dụng để rửa các tấm liên kết enzyme, loại bỏ các chất không liên kết và giảm nhiễu nền.

• Chấm dứt chất lỏng: Hầu hết các dung dịch axit mạnh (như axit sulfuric), được sử dụng để chấm dứt phản ứng tạo màu của chất nền, làm cho chất lỏng phản ứng ổn định màu sắc và dễ đọc.

• Niêm phong tấm phim: Được sử dụng để che phủ các tấm liên kết enzyme trong quá trình làm ấm và ngăn ngừa sự bay hơi của chất lỏng và ô nhiễm bên ngoài.

• Hướng dẫn sử dụng: Chi tiết cách sử dụng bộ dụng cụ, cân nhắc, chỉ số hiệu suất, v.v.

3. Yêu cầu mẫu

• Huyết thanhSau khi thu thập máu, để ở nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 4 ℃ qua đêm, 1000 × g ly tâm trong 20 phút, lấy sạch dự phòng. Lấy máu nên sử dụng thiết bị dùng một lần không có nhiệt nguyên, không có nội độc tố.

• Huyết tương: Có sẵn các chất chống đông máu như EDTA, heparin. Trong vòng 30 phút sau khi thu thập mẫu, 1000 × g ly tâm ở 2-8 ℃ trong 15 phút, lấy sạch.

• nuôi cấy tế bào sạch: Nuôi cấy tế bào sạch 1000 x g ly tâm trong 20 phút, sau khi loại bỏ mảnh vỡ tế bào và tạp chất thì lấy sạch.

• Mô san lấp mặt bằng: Rửa sạch mô bằng PBS làm lạnh trước, loại bỏ máu còn lại, nhấn 1: 9 (w/v) sau khi cắt mô để thêm PBS, nghiền kỹ trên băng. Sau 5 - 10 phút ly tâm 5000 x g, lấy sạch để phát hiện.

• Nếu xét nghiệm ngắn hạn sau khi thu thập mẫu, nó có thể được bảo quản ở 4 ℃; Nếu bảo quản trong thời gian dài, cần lưu trữ đông lạnh -20 ℃ hoặc -80 ℃, và tránh đông lạnh nhiều lần, các mẫu tan máu thường không thích hợp để phát hiện.

4. Quy trình hoạt động

• Chuẩn bị: Lấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh, cân bằng đến nhiệt độ phòng (khoảng 30 phút). Pha loãng dung dịch giặt cô đặc.

• Thêm mẫu: Đặt các lỗ trống, các lỗ tiêu chuẩn và các lỗ mẫu. Lỗ trống thêm mẫu xi giải phóng, lỗ tiêu chuẩn thêm nồng độ khác nhau của sản phẩm tiêu chuẩn, lỗ mẫu thêm mẫu được xử lý tốt, mỗi lỗ thêm mẫu thường là 100 μL, nhẹ nhàng trộn đều, 37 ℃ ấm lên trong 90 phút.

• Rửa: Bỏ chất lỏng bên trong lỗ, đổ đầy các lỗ bằng chất tẩy rửa, ngâm 1 - 2 phút rồi quăng khô, rửa lại 5 lần, đảm bảo rửa sạch chất chưa kết hợp.

• Kháng thể với enzyme: Mỗi lỗ cho thêm 100 ml dung dịch kháng thể được pha loãng tốt, 37 độ C ôn dục 60 phút.

• Rửa lại: Cùng với các bước giặt trên.

• Kết xuất màuMỗi lỗ thêm dung dịch cơ bản 90 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ tránh ánh sáng hiển thị màu 15-30 phút (theo tình hình hiển thị màu thực tế).

• Chấm dứt phản ứng: Mỗi lỗ được thêm vào 50 μL terminator, khi màu sắc của dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu vàng.

• Đọc: Độ hấp thụ (giá trị OD) của mỗi lỗ được đo bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450nm trong vòng 15 phút sau khi chấm dứt dịch.

• Kết quả tính toán: Lấy nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD làm tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Theo giá trị OD của mẫu để tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn, nếu mẫu được pha loãng, cần nhân với bội số pha loãng tương ứng để có được nồng độ thực tế.

5. Chỉ số hiệu suất

• Phạm vi phát hiệnThường là 31,2-2000 pg/mL và các khoảng khác nhau, có thể đáp ứng nhu cầu phát hiện hàm lượng thụ thể trung gian trắng hòa tan 7 trong nhiều mẫu.

• Độ nhạyCó thể thấp tới 15,6 pg/mL hoặc thậm chí thấp hơn, cho phép phát hiện dấu vết của thụ thể này trong mẫu.

• Đặc trưngNó rất đặc hiệu đối với thụ thể leukin 7 hòa tan và không có phản ứng chéo đáng kể với các chất như thụ thể cytokine khác.

• Độ lặp lại: Hệ số biến đổi trong tấm thường nhỏ hơn 10%, hệ số biến đổi giữa các tấm nhỏ hơn 15%, đảm bảo tính ổn định và độ tin cậy của kết quả kiểm tra.

6. Lưu ý

• Nghiêm ngặt làm theo hướng dẫn sử dụng, các loại thuốc thử khác nhau không thể trộn lẫn.

• Sử dụng đầu hút một lần trong quá trình hoạt động để tránh ô nhiễm chéo và thêm mẫu phải chính xác.

• Giặt đầy đủ là chìa khóa để đảm bảo kết quả chính xác, giặt không có đáy dễ dẫn đến dương tính giả.

• Dung dịch chất nền nhạy cảm với ánh sáng, cần bảo quản và sử dụng tránh ánh sáng, phản ứng kết màu phải tiến hành trong điều kiện tránh ánh sáng.

• Chấm dứt có tính ăn mòn, chú ý bảo vệ khi vận hành, tránh tiếp xúc với da và mắt.

• Đề nghị các sản phẩm tiêu chuẩn và mẫu đều làm kiểm tra hồi lộ để nâng cao tính chính xác của kết quả. Bộ dụng cụ này chỉ được sử dụng trong nghiên cứu khoa học và không được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng.