Interleukin-7 ELISA KIT sử dụng phương pháp bánh sandwich kháng thể kép ELISA, có thể định lượng chính xác huyết thanh và các mẫu khác của Interleukin-7, dễ vận hành, được sử dụng rộng rãi trong miễn dịch học và các lĩnh vực nghiên cứu khoa học khác.
Chất trắng: 7 ELISA KIT
Chất trắng: 7 ELISA KITNó là một công cụ kiểm tra thường được sử dụng trong nghiên cứu khoa học để xác định định lượng hàm lượng interleukin-7 trong các mẫu sinh học. Interleukin-7 là một protein tiết hòa tan có kích thước 25kDa được mã hóa bởi gen IL-7, thuộc họ các yếu tố tạo máu và đóng một vai trò quan trọng trong sự biệt hóa, nhân lên và tồn tại của các tế bào lympho. Bộ thuốc thử này có thể hỗ trợ công tác nghiên cứu cơ chế bệnh tật liên quan, nghiên cứu phát triển thuốc, v. v.
Thành phần Kit
Enzyme liên kết tấm: 96 hoặc 48 lỗ, đã được bao bọc trước bởi kháng thể kháng IL-7 như một chất mang phản ứng.
Sản phẩm tiêu chuẩn: Thường là sản phẩm đông khô, thường có 2 chai. Trước khi sử dụng cần pha loãng lại với dung dịch pha loãng tiêu chuẩn và pha loãng thành các gradient nồng độ khác nhau, chẳng hạn như 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL, v.v., để vẽ đường cong tiêu chuẩn.
Mẫu xi giải phóng: Được sử dụng để pha loãng mẫu được thử nghiệm với nồng độ quá cao, đảm bảo nồng độ của nó nằm trong phạm vi phát hiện hiệu quả của bộ dụng cụ.
Kháng thể Enzyme: Tức là kháng thể kháng IL-7 được đánh dấu bằng HRP, là chất lỏng cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng với kháng thể tiêu chuẩn enzyme theo yêu cầu.
Dung dịch pha loãng kháng thể Enzyme: Đặc biệt dùng để pha loãng kháng thể enzyme.
Giải pháp cơ sởVí dụ, một chất nền TMB có thể phản ứng với HRP trong kháng thể tiêu chuẩn enzyme để tạo ra sự thay đổi màu sắc.
Chất tẩy rửa: Nói chung là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng với nước cất hoặc nước khử ion theo tỷ lệ cụ thể để rửa các tấm liên kết enzyme, loại bỏ các chất không liên kết và giảm nhiễu nền một cách hiệu quả.
Chấm dứt chất lỏng: Hầu hết các dung dịch axit mạnh (như axit sulfuric), được sử dụng để chấm dứt phản ứng tạo màu của chất nền, làm cho chất lỏng phản ứng ổn định màu sắc, tạo điều kiện cho việc đọc tiếp theo.
Niêm phong tấm phim: Được sử dụng để che phủ các tấm liên kết enzyme trong quá trình làm ấm và ngăn ngừa sự bay hơi của chất lỏng và ô nhiễm bên ngoài.
Hướng dẫn sử dụng: Chi tiết cách sử dụng bộ dụng cụ, cân nhắc, chỉ số hiệu suất, v.v.
Yêu cầu mẫu
Huyết thanhSau khi thu thập máu, để ở nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 4 ℃ qua đêm, sau đó ly tâm 1000 × g trong 20 phút, cẩn thận hấp thụ dịch thượng thanh dự phòng. Lấy máu nên sử dụng thiết bị dùng một lần không có nhiệt nguyên, không có nội độc tố.
Huyết tương: Có thể sử dụng axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA), heparin và như một chất chống đông máu. Trong vòng 30 phút sau khi lấy mẫu, ly tâm 1000 × g ở 2-8 ℃ trong 15 phút, lấy sạch.
nuôi cấy tế bào sạch: Nuôi cấy tế bào sạch ly tâm với 1000 x g trong 20 phút, sau khi loại bỏ các mảnh vỡ tế bào và tạp chất, lấy sạch để phát hiện.
Mô san lấp mặt bằng: Rửa sạch các mô bằng bộ đệm phosphate được làm lạnh trước (PBS, 0,01M, pH=7,4) để loại bỏ máu còn sót lại. Sau khi cắt mô, thêm PBS theo tỷ lệ khoảng 1: 9 (w/v) để nghiền kỹ trên băng. Sau 5 - 10 phút ly tâm 5000 x g, lấy sạch để phát hiện.
Nếu mẫu được kiểm tra trong thời gian ngắn sau khi thu thập, nó có thể được lưu trữ ở 4 ℃; Nếu cần bảo quản trong thời gian dài, cần đặt ở -20 ℃ hoặc -80 ℃, và để tránh đông lạnh nhiều lần, các mẫu tan máu thường không thích hợp để kiểm tra.
Quy trình hoạt động
Chuẩn bịLấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh và cân bằng nó đến nhiệt độ phòng trước 30 phút. Đồng thời, dung dịch giặt cô đặc được pha loãng với nước cất hoặc nước khử ion theo tỷ lệ yêu cầu.
Thêm mẫu: Đặt các lỗ trống, các lỗ tiêu chuẩn và các lỗ mẫu. Lỗ trống được thêm vào mẫu xi giải phóng, lỗ tiêu chuẩn được thêm vào nồng độ khác nhau của các sản phẩm tiêu chuẩn, lỗ mẫu được thêm vào mẫu được xử lý, số lượng mẫu mỗi lỗ thường là 100 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ ấm lên trong 90 phút.
Rửa: Sau khi ôn dục kết thúc, bỏ đi chất lỏng trong lỗ, dùng chất tẩy rửa đổ đầy các lỗ, ngâm 1 - 2 phút rồi quăng khô, lặp lại giặt 5 lần, đảm bảo đáy rửa sạch chất chưa kết hợp.
Kháng thể với enzyme: Mỗi lỗ cho thêm 100 ml dung dịch kháng thể được pha loãng tốt, 37 độ C ôn dục 60 phút.
Rửa lại: Lặp lại các bước giặt trên.
Kết xuất màuMỗi lỗ thêm dung dịch cơ bản 90 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ tránh ánh sáng hiển thị màu 15-30 phút (cần được đánh giá theo tình hình hiển thị màu thực tế).
Chấm dứt phản ứng: Mỗi lỗ được thêm vào 50 μL terminator, khi màu sắc của dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu vàng.
Đọc: Độ hấp thụ (giá trị OD) của mỗi lỗ được đo bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450nm trong vòng 15 phút sau khi chấm dứt dịch.
Kết quả tính toán: Lấy nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD làm tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Theo giá trị OD của mẫu để tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn, nếu mẫu được pha loãng, cần nhân với bội số pha loãng tương ứng để có được nồng độ thực tế.
Chỉ số hiệu suất
Phạm vi phát hiệnCó sự khác biệt giữa các bộ dụng cụ khác nhau, phạm vi thử nghiệm phổ biến là 15,6-1000 pg/mL, có thể đáp ứng nhu cầu phát hiện hàm lượng IL-7 trong nhiều mẫu.
Độ nhạyThông thường, nó có thể thấp tới 7,8 pg/mL hoặc thậm chí thấp hơn và có thể phát hiện dấu vết của IL-7 trong mẫu.
Đặc trưngNó rất đặc hiệu với IL-7 và hầu như không có phản ứng chéo với các chất như cytokine khác.
-
Độ lặp lại: Hệ số biến đổi trong tấm thường nhỏ hơn 10%, hệ số biến đổi giữa các tấm nhỏ hơn 15%, đảm bảo tính ổn định và độ tin cậy của kết quả kiểm tra.
