thụ thể interleukin-6 (hòa tan) ELISA KIT, sử dụng phương pháp ELISA chống bánh sandwich kép, huyết thanh định lượng chính xác và các mẫu khác của thụ thể hòa tan, hoạt động dễ dàng, được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu khoa học.
thụ thể interleukin-6 (hòa tan) ELISA KIT
thụ thể interleukin-6 (hòa tan) ELISA KITĐược thiết kế để kiểm tra định lượng hàm lượng thụ thể interleukin-6 hòa tan trong các mẫu sinh học, nó có ý nghĩa quan trọng đối với nghiên cứu miễn dịch và viêm trong lĩnh vực nghiên cứu khoa học.
Nguyên tắc phát hiện: Dựa trên phương pháp xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme lưỡng kháng thể. Các tấm liên kết enzyme được bao bọc trước bởi các kháng thể đặc hiệu chống lại thụ thể interleukin-6 hòa tan. Khi mẫu được thêm vào, thụ thể interleukin-6 hòa tan trong đó liên kết với kháng thể pha rắn. Kháng thể thụ thể interleukin-6 kháng hòa tan được đánh dấu bởi enzyme sau đó được thêm vào để tạo thành phức hợp kháng thể pha rắn interleukin-6 kháng thể interleukin-6 hòa tan. Các chất không liên kết được loại bỏ sau khi rửa, dung dịch cơ chất (ví dụ: TMB) được thêm vào để tạo màu dưới xúc tác enzyme, độ đậm màu tỷ lệ thuận với hàm lượng thụ thể này trong mẫu. Nồng độ thụ thể interleukin-6 hòa tan trong mẫu được đo bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450nm so với đường cong tiêu chuẩn.
Thành phần Kit
Enzyme liên kết tấm: Có 96 lỗ hoặc 48 lỗ thông số kỹ thuật, được bọc trước kháng thể, là vật mang phản ứng.
Sản phẩm tiêu chuẩn: Thường là sản phẩm đông khô, cần pha loãng với dung dịch pha loãng tiêu chuẩn và pha loãng thành một loạt các gradient nồng độ như 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL để vẽ đường cong tiêu chuẩn.
Mẫu xi giải phóng: Được sử dụng để pha loãng các mẫu được thử nghiệm với nồng độ quá cao để làm cho nồng độ mẫu phù hợp với phạm vi phát hiện của bộ dụng cụ.
Kháng thể Enzyme: Đó là kháng thể thụ thể interleukin-6 kháng hòa tan được gắn nhãn HRP, là chất cô đặc, cần pha loãng theo yêu cầu với dung dịch pha loãng kháng thể enzyme.
Dung dịch pha loãng kháng thể Enzyme: Đặc biệt dùng để pha loãng kháng thể enzyme.
Giải pháp cơ sởVí dụ, chất nền TMB phản ứng với HRP trong kháng thể nhãn enzyme để tạo ra sự thay đổi màu sắc.
Chất tẩy rửa: Nói chung là chất cô đặc, sau khi pha loãng theo tỷ lệ với nước cất hoặc nước khử ion, nó được sử dụng để rửa các tấm liên kết enzyme, loại bỏ các chất không liên kết và giảm nhiễu nền.
Chấm dứt chất lỏng: Hầu hết các dung dịch axit mạnh (như axit sulfuric), được sử dụng để chấm dứt phản ứng tạo màu cơ bản và ổn định màu của chất lỏng phản ứng để đọc.
Niêm phong tấm phim: Bao gồm các tấm liên kết enzyme trong thời gian ủ ấm, ngăn ngừa sự bay hơi của chất lỏng và ô nhiễm bên ngoài.
Hướng dẫn sử dụng: Mô tả chi tiết các phương pháp sử dụng, cân nhắc, chỉ số hiệu suất, v.v.
Yêu cầu mẫu
Huyết thanhSau khi thu thập máu, để nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 4 độ C qua đêm, ly tâm 1000 × g 20 phút để lấy sạch, lấy máu cần thiết bị dùng một lần không có nhiệt nguyên, không có nội độc tố.
Huyết tương: Có thể sử dụng EDTA, heparin và các chất chống đông máu khác, trong vòng 30 phút sau khi thu thập mẫu, 1000 × g ly tâm ở 2-8 ℃ được làm sạch trong 15 phút.
nuôi cấy tế bào sạch: 1000 × g ly tâm trong 20 phút, sau khi loại bỏ các mảnh vỡ tế bào và tạp chất để làm sạch phát hiện.
Mô san lấp mặt bằng: Rửa sạch mô bằng PBS làm lạnh trước (0,01M, pH=7,4), loại bỏ máu còn lại, nhấn 1: 9 (w/v) cộng với PBS sau khi cắt mô, nghiền đầy đủ trên băng, 5000 × g ly tâm 5-10 phút để lấy sạch.
Nếu xét nghiệm ngắn hạn sau khi thu thập mẫu, nó có thể được bảo quản ở 4 ℃; Bảo quản lâu dài cần -20 ℃ hoặc -80 ℃ đông lạnh, và tránh đông lạnh nhiều lần, các mẫu tan máu thường không thích hợp để kiểm tra.
Quy trình hoạt động
Chuẩn bị: Lấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh, cân bằng đến nhiệt độ phòng (khoảng 30 phút), pha loãng dung dịch giặt cô đặc.
Thêm mẫu: Đặt lỗ trống, lỗ tiêu chuẩn và lỗ mẫu. Lỗ trống cộng với mẫu xi giải phóng, lỗ tiêu chuẩn cộng với các sản phẩm tiêu chuẩn nồng độ khác nhau, lỗ mẫu cộng với mẫu được xử lý tốt, mỗi lỗ cộng với lượng mẫu thường là 100 μL, nhẹ nhàng trộn đều, 37 ℃ ấm lên trong 90 phút.
Rửa: Bỏ chất lỏng bên trong lỗ, đổ đầy các lỗ bằng chất tẩy rửa, ngâm 1 - 2 phút rồi quăng khô, rửa lại 5 lần, đảm bảo rửa sạch chất chưa kết hợp.
Kháng thể với enzyme: Mỗi lỗ thêm 100 ml dung dịch kháng thể tiêu chuẩn enzyme pha loãng tốt, 37 độ C ôn dục 60 phút.
Rửa lại: Lặp lại các bước giặt trên.
Kết xuất màu: Mỗi lỗ thêm dung dịch cơ bản 90 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 độ C tránh ánh sáng hiển thị màu 15 - 30 phút (theo tình huống hiển thị màu thực tế).
Chấm dứt phản ứng: 50 μL terminator được thêm vào mỗi lỗ, màu sắc của dung dịch thay đổi từ màu xanh sang màu vàng.
Đọc: Trong vòng 15 phút sau khi chấm dứt dịch, đo độ hấp thụ (giá trị OD) của các lỗ bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450nm.
Kết quả tính toán: Vẽ đường cong tiêu chuẩn với nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn là tọa độ ngang và giá trị OD là tọa độ dọc. Theo giá trị ODD của mẫu để tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn, nếu mẫu đã pha loãng, cần nhân với bội số pha loãng tương ứng để có được nồng độ thực tế.
Chỉ số hiệu suất
Phạm vi phát hiệnThường là khoảng 15,6-1000 pg/mL, đáp ứng nhiều nhu cầu kiểm tra mẫu.
Độ nhạyCó thể thấp tới 7,8 pg/mL hoặc thậm chí thấp hơn, có thể phát hiện một lượng nhỏ các thụ thể trung gian trắng hòa tan-6.
Đặc trưngRất đặc hiệu đối với thụ thể này và hầu như không có phản ứng chéo với các thụ thể cytokine khác, v.v.
Độ lặp lại: Hệ số biến đổi trong tấm thường nhỏ hơn 10%, hệ số biến đổi giữa các tấm nhỏ hơn 15%, đảm bảo kết quả kiểm tra ổn định và đáng tin cậy.
