Chất trung gian trắng ELISA KIT-6 Receptor

Chất trung gian trắng ELISA KIT-6 Receptor

Chất trung gian trắng ELISA KIT-6 ReceptorNó là một công cụ nghiên cứu được sử dụng để kiểm tra định lượng hàm lượng thụ thể interleukin-6 trong các mẫu sinh học. IL-6R đóng vai trò quan trọng trong quá trình điều hòa miễn dịch và phản ứng viêm, và việc kiểm tra hàm lượng của nó có ý nghĩa rất lớn đối với các nghiên cứu liên quan.

1. Nguyên tắc phát hiện: Bộ thuốc thử đa phần áp dụng phương pháp đo hấp phụ miễn dịch kết hợp enzyme hai kháng thể. Một kháng thể đặc hiệu chống lại IL-6R được bao bọc trước trên một tấm enzyme. Khi mẫu được thêm vào, IL-6R trong mẫu liên kết cụ thể với kháng thể pha rắn. Các kháng thể kháng IL-6R được đánh dấu bởi enzyme sau đó được thêm vào để tạo thành phức hợp "kháng thể pha rắn IL-6R-enzyme" với IL-6R đã gắn vào kháng thể pha rắn. Sau khi rửa kỹ để loại bỏ các chất không liên kết, dung dịch cơ chất (như TMB) được thêm vào, được xúc tác bởi enzyme, phản ứng tạo màu xảy ra với chất nền, với độ sâu màu tỷ lệ thuận với hàm lượng IL-6R trong mẫu. Nồng độ IL-6R trong mẫu được tính toán bằng cách đo độ hấp thụ ở bước sóng cụ thể (thường là 450nm) bằng máy đo enzyme, tương phản với đường cong tiêu chuẩn.

2. Thành phần Kit

• Enzyme liên kết tấm: 96 hoặc 48 lỗ, đã được bao bọc trước bởi kháng thể IL-6R, là chất mang nơi phản ứng xảy ra.

• Sản phẩm tiêu chuẩn: Thông thường là đồ đông khô, có 2 chai. Trước khi sử dụng cần pha loãng dung dịch tiêu chuẩn và pha loãng thành các gradient nồng độ khác nhau như 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL để vẽ đường cong tiêu chuẩn.

• Mẫu xi giải phóng: Được sử dụng để pha loãng các mẫu được thử nghiệm với nồng độ quá cao, đảm bảo nồng độ mẫu nằm trong phạm vi phát hiện của bộ dụng cụ.

• Kháng thể Enzyme: Đó là kháng thể kháng IL-6R được đánh dấu bằng HRP, là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng với kháng thể tiêu chuẩn enzyme theo yêu cầu.

• Enzyme kháng thể xi giải phóng: Đặc biệt dùng để pha loãng kháng thể enzyme.

• Giải pháp cơ sởVí dụ, chất nền TMB có thể phản ứng với HRP trong kháng thể nhãn enzyme để tạo ra sự thay đổi màu sắc.

• Chất tẩy rửa: Thường là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng theo tỷ lệ với nước cất hoặc nước khử ion để rửa các tấm liên kết enzyme, loại bỏ các chất không liên kết và giảm nhiễu nền.

• Chấm dứt chất lỏng: Hầu hết các dung dịch axit mạnh (như axit sulfuric), được sử dụng để chấm dứt phản ứng tạo màu của chất nền, làm cho chất lỏng phản ứng ổn định màu sắc và dễ đọc.

• Niêm phong tấm phim: Được sử dụng để che phủ các tấm liên kết enzyme trong quá trình làm ấm và ngăn ngừa sự bay hơi của chất lỏng và ô nhiễm bên ngoài.

• Hướng dẫn sử dụng: Chi tiết cách sử dụng bộ dụng cụ, cân nhắc, chỉ số hiệu suất, v.v.

3. Yêu cầu mẫu

• Huyết thanhSau khi lấy máu, để ở nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 4 độ C qua đêm, sau đó ly tâm 1000 × g trong 20 phút, lấy dự phòng. Lấy máu nên sử dụng thiết bị dùng một lần không có nhiệt nguyên, không có nội độc tố.

• Huyết tương: Có thể sử dụng axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA), heparin và như một chất chống đông máu. Trong vòng 30 phút sau khi lấy mẫu, ly tâm 1000 × g ở 2-8 ℃ trong 15 phút, lấy sạch.

• nuôi cấy tế bào sạch: Nuôi cấy tế bào sạch ly tâm với 1000 x g trong 20 phút, sau khi loại bỏ các mảnh vỡ tế bào và tạp chất, lấy sạch để phát hiện.

• Mô san lấp mặt bằng: Rửa sạch các mô bằng bộ đệm phosphate được làm lạnh trước (PBS, 0,01M, pH=7,4) để loại bỏ máu còn sót lại. Sau khi cắt mô, thêm PBS theo tỷ lệ khoảng 1: 9 (w/v) để nghiền kỹ trên băng. Sau 5 - 10 phút ly tâm 5000 x g, lấy sạch để phát hiện.

• Sau khi lấy mẫu, nếu kiểm tra trong thời gian ngắn, nó có thể được lưu trữ ở 4 ℃; Nếu cần bảo quản trong thời gian dài, cần đặt ở -20 ℃ hoặc -80 ℃, và để tránh đông lạnh nhiều lần, các mẫu tan máu thường không thích hợp để kiểm tra.

4. Quy trình hoạt động

• Chuẩn bịLấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh và cân bằng nó đến nhiệt độ phòng trước 30 phút. Đồng thời, dung dịch giặt cô đặc được pha loãng với nước cất hoặc nước khử ion theo tỷ lệ yêu cầu.

• Thêm mẫu: Đặt các lỗ trống, các lỗ tiêu chuẩn và các lỗ mẫu. Lỗ trống được thêm vào mẫu xi giải phóng, lỗ tiêu chuẩn được thêm vào nồng độ khác nhau của các sản phẩm tiêu chuẩn, lỗ mẫu được thêm vào mẫu được xử lý, số lượng mẫu mỗi lỗ thường là 100 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ ấm lên trong 90 phút.

• giặt rửa: Sau khi ôn dục kết thúc, bỏ đi chất lỏng trong lỗ, dùng chất tẩy rửa đổ đầy các lỗ, ngâm 1 - 2 phút rồi quăng khô, lặp lại giặt 5 lần, đảm bảo đáy rửa sạch chất chưa kết hợp.

• Kháng thể với enzyme: Mỗi lỗ cho thêm 100 ml dung dịch kháng thể được pha loãng tốt, 37 độ C ôn dục 60 phút.

• Rửa lại: Lặp lại các bước giặt trên.

• Kết xuất màuMỗi lỗ thêm dung dịch cơ bản 90 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ tránh ánh sáng hiển thị màu 15-30 phút (cần được đánh giá theo tình hình hiển thị màu thực tế).

• Chấm dứt phản ứng: Mỗi lỗ được thêm vào 50 μL terminator, khi màu sắc của dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu vàng.

• Đọc: Độ hấp thụ (giá trị OD) của mỗi lỗ được đo bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450nm trong vòng 15 phút sau khi chấm dứt dịch.

• Kết quả tính toán: Lấy nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD làm tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Theo giá trị OD của mẫu để tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn, nếu mẫu được pha loãng, cần nhân với bội số pha loãng tương ứng để có được nồng độ thực tế.

5. chỉ số hiệu suất

• Phạm vi phát hiệnSự khác biệt giữa các bộ dụng cụ khác nhau, phạm vi phát hiện phổ biến là 31,2-2000 pg/mL và các phạm vi khác, có thể đáp ứng nhu cầu phát hiện hàm lượng IL-6R trong nhiều mẫu.

• Độ nhạyThông thường, nó có thể thấp tới 15,6 pg/mL hoặc thậm chí thấp hơn và có thể phát hiện dấu vết của IL-6R trong mẫu.

• Đặc trưngNó rất đặc hiệu với IL-6R và hầu như không có phản ứng chéo với các chất như các thụ thể cytokine khác.

• Độ lặp lại: Hệ số biến đổi trong tấm thường nhỏ hơn 10%, hệ số biến đổi giữa các tấm nhỏ hơn 15%, đảm bảo tính ổn định và độ tin cậy của kết quả kiểm tra.

6. Lưu ý

• Nghiêm ngặt thao tác theo hướng dẫn sử dụng, các loại thuốc thử khác nhau không thể trộn lẫn.

• Khi thao tác sử dụng đầu hút một lần, phòng ngừa ô nhiễm giao nhau, thêm mẫu cần phải chính xác.

• Rửa đầy đủ là chìa khóa để đảm bảo kết quả chính xác, rửa tấm không có đáy dễ dẫn đến kết quả dương tính giả.

• Dung dịch chất nền nhạy cảm với ánh sáng, cần bảo quản và sử dụng tránh ánh sáng, phản ứng kết màu phải tiến hành trong điều kiện tránh ánh sáng.

• Chất kết thúc có tính ăn mòn, chú ý bảo vệ tốt khi vận hành, tránh tiếp xúc với da và mắt.

• Đề nghị các sản phẩm tiêu chuẩn và mẫu đều làm kiểm tra hồi lộ để nâng cao tính chính xác của kết quả. Bộ dụng cụ này chỉ được sử dụng cho mục đích nghiên cứu khoa học và không được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng.