thụ thể interleukin 5 (hòa tan) ELISA KIT

thụ thể interleukin 5 (hòa tan) ELISA KIT

thụ thể interleukin 5 (hòa tan) ELISA KITNó là một công cụ được sử dụng để phát hiện định lượng hàm lượng thụ thể interleukin 5 hòa tan trong các mẫu sinh học, đóng một vai trò quan trọng trong lĩnh vực nghiên cứu khoa học, giúp hiểu sâu hơn về các quá trình sinh lý bệnh lý như điều hòa miễn dịch, phản ứng viêm. Sau đây xin giới thiệu với các bạn từ nhiều mặt:

1. Nguyên tắc phát hiệnSử dụng công nghệ xét nghiệm miễn dịch hấp phụ kết hợp enzyme lưỡng kháng thể (ELISA). Các tấm enzyme của bộ dụng cụ được bọc trước bằng các kháng thể đặc hiệu chống lại thụ thể interleukin 5 hòa tan. Khi thêm vào mẫu, thụ thể interleukin 5 hòa tan trong mẫu liên kết đặc hiệu với kháng thể pha rắn. Kháng thể thụ thể interleukin 5 chống hòa tan được đánh dấu bởi enzyme sau đó được thêm vào, với các thụ thể đã gắn vào kháng thể pha rắn để tạo thành phức hợp "kháng thể pha rắn-thụ thể interleukin 5 hòa tan-kháng thể enzyme". Sau khi rửa kỹ, loại bỏ các chất không liên kết, sau đó thêm dung dịch cơ chất (ví dụ: 3,3', 5,5'-tetramethylunianiline, tức là TMB). Dưới sự xúc tác của enzyme trong kháng thể tiêu chuẩn enzyme, phản ứng tạo màu xảy ra ở chất nền và độ sâu của màu tỷ lệ thuận với lượng thụ thể interleukin 5 hòa tan trong mẫu. Nồng độ của thụ thể này trong mẫu có thể được tính toán bằng cách đo độ hấp thụ bằng máy đo enzyme ở bước sóng cụ thể (thường là 450nm), tương phản với đường cong tiêu chuẩn.

2. Thành phần Kit

• Enzyme liên kết tấm: Có 96 lỗ hoặc 48 lỗ thông số kỹ thuật, đã được bao bọc trước bởi kháng thể thụ thể interleukin 5 kháng hòa tan, là chất mang của phản ứng.

• Sản phẩm tiêu chuẩn: Thường là sản phẩm đông khô, thường được trang bị 2 chai. Trước khi sử dụng cần pha loãng dung dịch tiêu chuẩn để hòa tan và pha loãng thành các gradient nồng độ khác nhau, ví dụ 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL, v.v. để vẽ đường cong tiêu chuẩn.

• Mẫu xi giải phóng: Được sử dụng để pha loãng mẫu được thử nghiệm với nồng độ quá cao, đảm bảo nồng độ mẫu nằm trong phạm vi phát hiện hiệu quả của bộ dụng cụ.

• Kháng thể Enzyme: Đó là kháng thể thụ thể interleukin 5 kháng hòa tan được đánh dấu bằng HRP (horseradish peroxidase), là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng với chất lỏng pha loãng kháng thể enzyme theo yêu cầu.

• Dung dịch pha loãng kháng thể Enzyme: Đặc biệt dùng để pha loãng kháng thể enzyme.

• Giải pháp cơ sởVí dụ, một chất nền TMB có thể phản ứng với HRP trong kháng thể tiêu chuẩn enzyme để tạo ra sự thay đổi màu sắc.

• Chất tẩy rửa: Nói chung là chất cô đặc, khi sử dụng cần pha loãng với nước cất hoặc nước khử ion theo tỷ lệ nhất định để rửa các tấm liên kết enzyme, loại bỏ các chất không liên kết và giảm nhiễu nền.

• Chấm dứt chất lỏng: Hầu hết các dung dịch axit mạnh (như axit sulfuric), được sử dụng để chấm dứt phản ứng tạo màu của chất nền, làm cho chất lỏng phản ứng ổn định màu sắc và dễ đọc.

• Niêm phong tấm phim: Bao gồm các tấm liên kết enzyme trong quá trình làm ấm và ngăn ngừa sự bay hơi của chất lỏng và ô nhiễm bên ngoài.

• Hướng dẫn sử dụng: Chi tiết cách sử dụng bộ dụng cụ, cân nhắc, chỉ số hiệu suất, v.v.

3. Yêu cầu mẫu

• Huyết thanhSau khi lấy máu, để ở nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 4 độ C qua đêm, sau đó ly tâm 1000 × g trong 20 phút, lấy dự phòng. Lấy máu nên sử dụng thiết bị dùng một lần không có nhiệt nguyên, không có nội độc tố.

• Huyết tương: Có thể sử dụng axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA), heparin và như một chất chống đông máu. Trong vòng 30 phút sau khi lấy mẫu, ly tâm 1000 × g ở 2-8 ℃ trong 15 phút, lấy sạch.

• nuôi cấy tế bào sạch: Nuôi cấy tế bào sạch ly tâm với 1000 x g trong 20 phút, sau khi loại bỏ các mảnh vỡ tế bào và tạp chất, lấy sạch để phát hiện.

• Mô san lấp mặt bằng: Rửa sạch các mô bằng bộ đệm phosphate được làm lạnh trước (PBS, 0,01M, pH=7,4) để loại bỏ máu còn sót lại. Sau khi cắt mô, thêm PBS theo tỷ lệ khoảng 1: 9 (w/v) để nghiền kỹ trên băng. Sau 5 - 10 phút ly tâm 5000 x g, lấy sạch để phát hiện.

• Sau khi lấy mẫu, nếu kiểm tra trong thời gian ngắn, nó có thể được lưu trữ ở 4 ℃; Nếu cần bảo quản trong thời gian dài, cần đặt ở -20 ℃ hoặc -80 ℃, và để tránh đông lạnh nhiều lần, các mẫu tan máu thường không thích hợp để phát hiện.

4. Quy trình hoạt động

• Chuẩn bịLấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh và cân bằng nó đến nhiệt độ phòng trước 30 phút. Đồng thời, dung dịch giặt cô đặc được pha loãng với nước cất hoặc nước khử ion theo tỷ lệ yêu cầu.

• Thêm mẫu: Đặt các lỗ trống, các lỗ tiêu chuẩn và các lỗ mẫu. Lỗ trống được thêm vào mẫu xi giải phóng, lỗ tiêu chuẩn được thêm vào nồng độ khác nhau của các sản phẩm tiêu chuẩn, lỗ mẫu được thêm vào mẫu được xử lý, số lượng mẫu mỗi lỗ thường là 100 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ ấm lên trong 90 phút.

• giặt rửa: Sau khi ôn dục kết thúc, bỏ đi chất lỏng trong lỗ, dùng chất tẩy rửa đổ đầy các lỗ, ngâm 1 - 2 phút rồi quăng khô, lặp lại giặt 5 lần, đảm bảo đáy rửa sạch chất chưa kết hợp.

• Kháng thể với enzyme: Mỗi lỗ cho thêm 100 ml dung dịch kháng thể được pha loãng tốt, 37 độ C ôn dục 60 phút.

• Rửa lại: Lặp lại các bước giặt trên.

• Kết xuất màuMỗi lỗ thêm dung dịch cơ bản 90 μL, trộn đều nhẹ nhàng, 37 ℃ tránh ánh sáng hiển thị màu 15-30 phút (cần được đánh giá theo tình hình hiển thị màu thực tế).

• Chấm dứt phản ứng: Mỗi lỗ được thêm vào 50 μL terminator, khi màu sắc của dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu vàng.

• Đọc: Độ hấp thụ (giá trị OD) của mỗi lỗ được đo bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450nm trong vòng 15 phút sau khi chấm dứt dịch.

• Kết quả tính toán: Lấy nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD làm tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Theo giá trị OD của mẫu để tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn, nếu mẫu được pha loãng, cần nhân với bội số pha loãng tương ứng để có được nồng độ thực tế.