Tế bào bạch cầu đơn nhân ở người THP-1

Tế bào bạch cầu đơn nhân ở người THP-1

【THP1; O-THP-1; Bệnh viện Nhi khoa Tohoku-1】

l Xác định tế bào

Chứng nhận STR đã được thông qua

l Nguồn tế bào

Kho tài nguyên quốc gia

l Bối cảnh tế bào

Nó được thành lập từ máu ngoại vi của một cậu bé 1 tuổi mắc bệnh bạch cầu đơn bào cấp tính (AML) tái phát vào năm 1978. Tế bào này có thể nuốt các hạt sữa và các tế bào hồng cầu kích hoạt mà không có globulin miễn dịch tế bào chất và bề mặt. Sự khác biệt tế bào đơn nhân có thể được gây ra với verbohol TPA.

Lưu ý: Đột biến NRAS được chỉ định không chính xác là p.Gly12Ser trong PubMed=9379676.

l Đặc tính tế bào

1) Nguồn: Bệnh bạch cầu mono cấp tính, mono

2) Hình thái: Monocyte, lơ lửng

3) Nội dung:>Số lượng tế bào 1x106

4) Thông số kỹ thuật: chai T25 hoặc gói lưu trữ đông lạnh 1mL

5) Ứng dụng: Chỉ sử dụng cho nghiên cứu khoa học

l Điều kiện nuôi dưỡng

1) Chuẩn bị môi trường RPMI-1640 (awcell-0002 được khuyến nghị); Huyết thanh bò thai chất lượng cao, 10%; 0,05 mMβ-qiu ethanol (khuyến cáo mức nuôi cấy tế bào: awcell-8211); Kháng gấp đôi, 1%.

2) Tham khảo tỷ lệ truyền: kiểm soát mật độ tế bào ở 2-4 × 105cell/mL khi truyền và truyền khi tế bào phát triển đến 8-10 × 105cell/mL.

3) Tham khảo tần số thay đổi chất lỏng: thay đổi chất lỏng khi truyền.

4) Điều kiện nuôi: pha khí: không khí, 95%; CO2, 5%. Nhiệt độ: 37 độ C, độ ẩm buồng nuôi cấy là 70% -80%.

5) Chất lỏng đông lạnh: * Chất lỏng nuôi cấy 95%, DMSO 5% (sau khi sử dụng chất lỏng đông lạnh này, tỷ lệ sống sót phục hồi theo kinh nghiệm của ngân hàng tôi là khoảng 50%, sau khi phục hồi cần nuôi thêm 7-10 ngày để phục hồi tăng trưởng)

l Thận trọng

[Ghi chú]:

Tế bào này là tế bào lơ lửng, căn cứ vào kinh nghiệm nuôi dưỡng cùng với phản hồi của khách hàng, khi truyền đời sử dụng [phương pháp bán đổi dịch] đối với trạng thái tế bào tương đối có lợi, vì vậy kho của tôi đề nghị ngài sử dụng [phương pháp bán đổi dịch] để truyền đời.

1. Sau khi bạn nhận được các tế bào được vận chuyển bằng ống ly tâm 15ml do chúng tôi cung cấp, vui lòng không thu thập các tế bào bằng cách ly tâm, có thể chuẩn bị hai chai nuôi cấy T25 mới trước, sau đó trộn đều các tế bào và di chuyển vào hai chai nuôi cấy T25 mới, bổ sung môi trường đến 10ml. Đặt chúng vào hộp nuôi cấy 37 ℃.

2. Bạn nhận được các tế bào được vận chuyển trong chai nuôi cấy T25, trước tiên hãy thu thập các tế bào bằng cách ly tâm, sau đó treo lại các tế bào với 12ml cấu hình theo yêu cầu của hướng dẫn * Môi trường thổi đều sau đó di chuyển vào hai chai nuôi cấy T25 mới để nuôi cấy.

3. THP-1 tế bào lơ lửng. Tế bào này thích được xử lý nhẹ nhàng khi nuôi cấy, với việc xử lý ly tâm tế bào càng ít càng tốt để gây hại cho tế bào. Khi thay dịch không nên thay thế toàn bộ môi trường nuôi cấy, đề nghị bạn sử dụng [phương pháp bán dịch] để truyền dịch, thêm môi trường nuôi cấy tế bào để pha loãng tế bào đến duy trì mật độ là được.

4. Tế bào tương đối nhạy cảm với chất lượng huyết thanh, kho của tôi đề nghị ông sử dụng huyết thanh chất lượng cao nhập khẩu để nuôi dưỡng. Nếu các tế bào phát triển chậm, hãy thử sử dụng FBS khác hoặc tạm thời tăng nồng độ FBS lên 20%.

Trong dịch nuôi cấy của tế bào này cần bổ sung beta-qiu ethanol (mức nuôi cấy tế bào), nếu không, có thể ảnh hưởng đến trạng thái tế bào.

Beta-qiu-based ethanol có độ ổn định hạn chế và không thể thêm beta-qiu-based ethanol vào môi trường * để lưu trữ lâu dài, với beta-mercapyl ethanol được thêm vào mỗi lần truyền hoặc bổ sung chất lỏng.

Beta-qiu-ethanol (2-qiu-ethanol) được thêm vào tế bào lympho hoặc các nền văn hóa tế bào khác vì thiếu hụt axit amin cysteine trong FBS được sử dụng trong môi trường, trong khi có rất nhiều cysteine. Một số tế bào, chẳng hạn như tế bào T, không thể vận chuyển cysteine vào tế bào chất và phải chuyển đổi nó thành cysteine. Beta-qiu ethanol làm giảm cysteine thành dạng có thể được vận chuyển bởi tế bào và sau đó chuyển thành cysteine cần thiết cho sự phát triển của tế bào. Beta-qiu ethanol cũng là một chất khử phá vỡ nhiều chất chuyển hóa độc hại được sản xuất bởi các tế bào trong nuôi cấy, do đó cải thiện môi trường xung quanh tế bào.

Các tế bào nhạy cảm hơn với mật độ tế bào, khi nuôi cấy, di truyền, chú ý giữ mật độ tế bào trong phạm vi thích hợp (cụ thể xin vui lòng tham khảo hướng dẫn sử dụng tế bào).

7. tế bào này sau khi đông lạnh tồn tại tỷ lệ hồi phục thấp, khi đông lạnh tồn tại xin xem xét nâng cao lượng tế bào

8. Thông thường, sự tăng trưởng của tế bào có thể được duy trì bằng cách thêm một môi trường * vào các tế bào đang phát triển, với các tế bào có thể được ly tâm và treo lại trong môi trường mới được ghép nối cứ sau 7 ngày để hoàn thành việc thay đổi hoàn toàn tế bào.

ATCC hướng dẫn các tế bào thp-1 để giữ cho tế bào sống

thiết bị = modal

(Số lượng tế bào thường xuyên là cách tốt nhất để theo dõi THP-1.) Những tế bào này nên được nuôi cấy cứ sau 2 đến 3 ngày bằng cách thêm một lượng nhỏ môi trường tươi vào bình (để chúng có điều kiện). Bạn không cần phải ly tâm các tế bào mỗi lần và truyền lại chúng. Khi được nuôi cấy trong phòng thí nghiệm của chúng tôi, vào ngày thứ hai, các tế bào thường có thể mở rộng thành các bình lớn hơn với nhiều môi trường hơn. Việc chuyển giao là cần thiết khi mật độ tế bào đạt 8 × 10 5 tế bào sống/ml. Mật độ tế bào không được phép vượt quá 1 × 10 (6) tế bào sống/ml.)

1. Bỏ đi nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa canxi, ion magiê 1 - 2 lần.

2. Thêm 0,25% (w/v) trypsin-0,53 mM EDTA trong chai nuôi cấy (T25 chai 1-2mL, T75 chai 2-3mL), đặt trong hộp nuôi cấy 37 ℃ tiêu hóa trong 1-2 phút (các tế bào khó tiêu hóa có thể kéo dài thời gian tiêu hóa thích hợp), sau đó quan sát tình trạng tiêu hóa tế bào dưới kính hiển vi, nếu phần lớn tế bào tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều hành, gõ vài lần vào chai sau đó thêm 3-4ml môi trường chứa 10℃ để chấm dứt tiêu hóa.

3. Nhẹ nhàng đánh đều rồi hút ra, ly tâm 3 - 5 phút trong điều kiện 1000 vòng M, bỏ đi chất lỏng, bổ sung 1 - 2 ml chất lỏng nuôi cấy rồi thổi đều. Đình chỉ tế bào được chia thành chai T25 mới theo tỷ lệ 1: 2, thêm 6-8ml môi trường * mới được cấu hình theo yêu cầu của hướng dẫn để duy trì sự tăng trưởng của tế bào, truyền thừa tiếp theo được thực hiện theo tỷ lệ 1: 2~1: 5 theo tình hình thực tế.

3) Đóng băng tế bào: Sau khi nhận được tế bào, nên đóng băng một số hạt giống tế bào trong quá trình nuôi cấy 3 thế hệ đầu tiên để sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo.

4) Môi trường vận chuyển (môi trường truyền dịch) không còn có thể được sử dụng để nuôi cấy tế bào, hãy thay thế bằng môi trường * mới được xây dựng theo các điều kiện nuôi cấy tế bào được chỉ định. Đề xuất truyền gen đầu tiên sau khi nhận được tế bào T25 Cultural Bottle 1: 2.

l Hình thức vận chuyển

Nhiệt độ thấp: (1) 1mL đông lưu trữ đóng gói băng khô vận chuyển, sau khi nhận được -80 độ tủ lạnh lưu trữ qua đêm sau khi chuyển sang nitơ lỏng hoặc hồi sức trực tiếp, nếu bạn thấy rằng đá khô đã bay hơi sạch sẽ, nắp chai đông lưu trữ rơi ra, bị hỏng và ô nhiễm tế bào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi ngay lập tức.

Nhiệt độ bình thường: (2) Nhiệt độ bình thường của các tế bào sống sót phục hồi chai T25 được vận chuyển, hoạt động sau khi nhận được theo phương pháp xử lý của tế bào sau khi nhận được.

l An toàn sinh học

Tất cả các tế bào động vật được coi là có khả năng gây nguy hiểm sinh học, phải được vận hành trong bảng an toàn sinh học thứ cấp và chú ý bảo vệ, tất cả các chất thải và dụng cụ đã tiếp xúc với tế bào này cần được khử trùng để loại bỏ.

2. Nên luôn sử dụng găng tay bảo hộ, quần áo và đeo mặt nạ bảo hộ khi hồi sức các tế bào đông lạnh. LƯU Ý: Các ống lưu trữ đông lạnh bị rò rỉ khi ngâm trong nitơ lỏng và sẽ từ từ được lấp đầy bằng nitơ lỏng. Khi tan băng, việc chuyển đổi nitơ lỏng thành pha khí có thể khiến thùng chứa phát nổ hoặc thổi bay nắp của nó bằng lực nguy hiểm, tạo ra các mảnh vụn bay để gây thương tích cho người.