ZETA LIFE Tế bào tăng sinh và xét nghiệm độc tính - CCK Kit

ZETA LIFE Tế bào tăng sinh và xét nghiệm độc tính - CCK Kit

Giá: ￥615 - 2800

thương hiệuZETA LIFE.

Số hàng:K009

Xuất xứ:Hoa Kỳ

nhà cung cấp:Thượng HảiLeica cùngCông ty TNHH Công nghệ sinh học

số lượng:1000

Tên tiếng Anh: cck8

Hạn sử dụng:24 tháng

Điều kiện lưu: Bảo quản tránh ánh sáng 4 ° C

quy cách:500T-3000T

ZETA LIFE Tế bào tăng sinh và xét nghiệm độc tính - CCK Kit

CellCounting Kit, viết tắt của CCK Kit, là một bộ xét nghiệm nhạy cảm nhanh dựa trên WST (muối tetrazole hòa tan trong nước, tên hóa học: 2- (2-methoxy-4-nitrophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5- (2,4-disulfonyl) -2H tetrazole mononatri muối) được sử dụng rộng rãi trong tăng sinh tế bào và độc tế bào.

CCK là một sản phẩm thay thế nâng cấp cho MTT với những ưu điểm rõ ràng so với MTT hoặc các sản phẩm tương tự khác của MTT như XTT.MTS:

- CCK bị khử bởi enzyme dehydrogenase trong ty thể thành formazan hòa tan trong nước, không cần một chất lỏng hòa tan cụ thể để hòa tan, trong khi WST và XTT, MTS tạo ra formazan không hòa tan trong nước, do đó có thể loại bỏ các bước hòa tan tiếp theo.

- CCK ổn định hơn XTT và MTS, làm cho kết quả thử nghiệm ổn định hơn.

- CCK và MTT, XTT, v.v. rộng hơn và độ nhạy cao hơn so với phạm vi tuyến tính.

So sánh giữa phương pháp CCK và các phương pháp phát hiện khác:

Hướng dẫn vận hành:

B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)

1, Đầu tiên sử dụng bảng đếm tế bào để đếm số lượng tế bào trong đình chỉ tế bào được chuẩn bị, sau đó tiêm tế bào.

2, theo tỷ lệ (ví dụ: tỷ lệ 1/2) lần lượt được pha loãng với tỷ lệ bằng nhau của môi trường nuôi cấy - một gradient nồng độ tế bào, thường phải làm 3-5 gradient nồng độ tế bào, mỗi nhóm 3-6 lỗ lặp.

3, nuôi cấy sau khi chủng ngừa 2-4 giờ để các tế bào dán vào tường, sau đó thêm nuôi cấy thuốc thử CCK - xác định giá trị ODD sau một thời gian nhất định, tạo ra một đường với số lượng tế bào làm tọa độ ngang (trục X),

Giá trị OD là đường cong tiêu chuẩn cho tọa độ dọc (trục Y). Từ đường cong tiêu chuẩn này có thể xác định được số lượng tế bào của một mẫu không xác định (điều kiện để thử đường cong tiêu chuẩn này là một trong những điều kiện để thử nghiệm).

Để dễ dàng xác định số lượng tế bào được tiêm chủng và thời gian nuôi cấy sau khi gia nhập CCK).

II. Kiểm tra hoạt động tế bào

1. Tiêm dịch đình chỉ tế bào (lỗ 100 ul) trong 96 tấm lỗ. Đặt các tấm nuôi cấy trong lồng nuôi cấy trước (ở 379C, 5% CO2).

Thêm dung dịch CCK 110ul vào mỗi lỗ (cẩn thận không tạo bong bóng trong lỗ, chúng sẽ ảnh hưởng đến việc đọc giá trị OD).

3. Ủ 14 giờ trong hộp nuôi cấy.

4. Dùng máy đo enzyme để xác định độ hấp thụ ánh sáng ở 450 nm.

Nếu giá trị ODD tạm thời không được xác định, bạn có thể thêm dung dịch HCL 10ul 0.1M hoặc dung dịch wIv SDS 1% vào mỗi lỗ và che nền văn hóa.

Tấm tránh ánh sáng được bảo quản trong điều kiện nhiệt độ phòng. Độ hấp thụ không thay đổi trong 24 giờ.

B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)

1, Cấu hình đình chỉ tế bào của 100u trong 96 tấm lỗ. Các tấm nuôi cấy được nuôi cấy trước 24 giờ (trong điều kiện 379C, 5% CO2).

2, Thêm 10ul nồng độ khác nhau của vật liệu được thử nghiệm vào bảng nuôi cấy.

Ủ đĩa trong một khoảng thời gian thích hợp (ví dụ: 6, 12, 24 hoặc 48 giờ).

Bạn muốn thêm dung dịch CCK 10ul vào mỗi lỗ (chú ý không tạo bong bóng trong lỗ nữa, chúng sẽ ảnh hưởng đến việc đọc giá trị OD).

5- Ấp ủ tấm nuôi trong hộp nuôi 1 - 4 tiếng.

6. Dùng máy đánh dấu enzyme để xác định độ hấp thụ ánh sáng ở 450 nm.

Nếu giá trị ODD tạm thời không được xác định, để xác định sau này, bạn có thể thêm dung dịch HCL 10ul 0.1M hoặc dung dịch wIv SDS 1% vào mỗi lỗ và che tấm nuôi cấy khỏi ánh sáng để bảo quản ở nhiệt độ phòng. Độ hấp thụ không thay đổi trong 24 giờ.

Lưu ý: Nếu chất được thử nghiệm có tính oxy hóa hoặc giảm, môi trường tươi có thể được thay thế trước khi thêm CCK (loại bỏ môi trường và rửa tế bào bằng môi trường hai lần, sau đó thêm môi trường mới), loại bỏ tác dụng của thuốc. Đương nhiên dưới tình huống dược vật ảnh hưởng tương đối nhỏ, có thể không thay đổi cơ sở bồi dưỡng, trực tiếp khấu trừ cơ sở bồi dưỡng sau khi thêm vào dược vật hấp thu chỗ trống là được.

Chuẩn bị:

①Đề nghị trước tiên làm vài lỗ dò tìm số lượng tế bào tiêm chủng và thời gian nuôi cấy sau khi thêm thuốc thử CCK.

②Trong trường hợp có điều kiện, đề nghị áp dụng pipet đa kênh, có thể giảm bớt sự khác biệt về giảm lỗ song song. tham gia

Khi sử dụng thuốc thử CCK, đề nghị dán nghiêng vào tường nuôi cấy, không cắm vào dưới trang nuôi cấy, dễ tạo ra bong bóng khí, sẽ can thiệp vào việc đọc giá trị ODD.

③Các tế bào máu trắng có thể cần được nuôi cấy trong một thời gian dài.

④Khi sử dụng tấm 96 lỗ tiêu chuẩn, lượng tiêm chủng nhỏ cho các tế bào dán tường ít nhất là 1.000/lỗ L (môi trường 100u). Độ nhạy tương đối thấp khi phát hiện các tế bào máu trắng, do đó

Không ít hơn 2.500/lỗ F (môi trường 100 ul) được khuyến nghị. Nếu bạn đang thử nghiệm với một tấm 24 lỗ hoặc 6 lỗ, trước tiên hãy tính lượng tiêm tương ứng cho mỗi lỗ và thêm dung dịch CCK theo 10% tổng thể tích môi trường trên mỗi lỗ.

⑤Nếu không có bộ lọc 450nm, bạn có thể sử dụng bộ lọc có độ hấp thụ từ 430-490 nm, nhưng bộ lọc 450nm có độ nhạy phát hiện cao hơn.。

⑥Độ hấp thụ của phenol đỏ trong môi trường nuôi cấy có thể bị loại bỏ khi tính toán bằng cách khấu trừ độ hấp thụ của đáy trong lỗ trống, do đó không ảnh hưởng đến việc phát hiện.

Tính toán động:

Cell Vitality *(%)=[A (định lượng) -A (trống)]/[A (0 định lượng) -A (trống)] x100

A (định lượng): hấp thụ của các lỗ có tế bào, dung dịch CCK và dung dịch thuốc

A (trống): hấp thụ của các lỗ có môi trường và dung dịch CCK mà không có tế bào

A (0 liều): hấp thụ các lỗ có tế bào, dung dịch CCK mà không có dung dịch thuốc

* Cell Vitality: Cell Boost Vitality hoặc Cell Toxic Vitality

Điều kiện bảo quản:

49C Bảo quản tránh ánh sáng, có hiệu lực trong một năm.

Lời khuyên ấm áp: Không thể sử dụng trong điều trị lâm sàng.