SYBR xanh lá cây phổ quát qPCR Mix

Điều kiện lưu trữ và vận chuyển

Bảo quản lâu dài xin vui lòng bảo quản tránh ánh sáng ở -20 ℃, Mix tan chảy có thể được lưu trữ ổn định trong điều kiện tránh ánh sáng 4 ℃ trong một tháng, cố gắng tránh đông lạnh nhiều lần.

Thành phần sản phẩm

SYBR xanh lá cây phổ quát qPCR Mix

Giới thiệu sản phẩm

SYBR xanh lá cây phổ quát qPCR Mixbởi Sybr ® Thuốc thử qPCR đặc biệt cho phương pháp nhuộm nhúng Green I, là dung dịch trộn sẵn 2 × chứa tất cả các thành phần qPCR ngoại trừ mồi và mẫu DNA, làm giảm các bước hoạt động, rút ngắn thời gian lấy mẫu và giảm nguy cơ nhiễm bẩn. Thành phần cốt lõi của nó là Taq DNA polymerase khởi động nhiệt được sửa đổi bởi kháng thể, kết hợp với hệ thống Buffer được tối ưu hóa cẩn thận cũng như yếu tố thúc đẩy phản ứng PCR, làm cho sản phẩm có tính đặc hiệu cao và hiệu quả khuếch đại cao, ức chế hiệu quả khuếch đại không đặc hiệu, có thể định lượng chính xác các mẫu trong phạm vi nồng độ rộng và có được kết quả qPCR ổn định và đáng tin cậy. Chất lỏng pha trộn trước có chứa thuốc nhuộm hiệu chỉnh chung, tương thích với phần lớn các thiết bị qPCR, bao gồm cả các dụng cụ yêu cầu hiệu chỉnh ROX, thường không cần thêm thuốc nhuộm hiệu chỉnh trong quá trình thử nghiệm.

Cách sử dụng

1. Sử dụng chú ý

① Do thuốc nhuộm trộn sẵn trong Mix, quá trình bảo quản hoặc điều chế hệ thống phản ứng của nó phải tránh ánh sáng mạnh;

b) Trước khi sử dụng đảo ngược lên xuống nhẹ nhàng trộn đều hỗn hợp, xin đừng trộn đều, tránh sinh ra quá nhiều bong bóng khí;

③ Thuốc nhuộm hiệu chỉnh Universal có sẵn trong Mix, phù hợp với tất cả các mô hình mà không cần thêm thuốc nhuộm.

2. Hệ thống phản ứng qPCR được đề xuất

a. Thông thường nồng độ cuối cùng của mồi được khuyến nghị là 0,2 μM, có thể được điều chỉnh trong phạm vi 0,1~1 μM khi phản ứng kém;

b. Mẫu bổ sung được khuyến nghị là 1~2μl, chẳng hạn như mẫu loại là chất lỏng cDNA chưa pha loãng, mẫu bổ sung không được vượt quá 10% tổng số hệ thống phản ứng. Số lượng bản sao của gen đích trong các mẫu DNA khác nhau là khác nhau và có thể được pha loãng gradient nếu cần thiết để xác định mức độ bổ sung mẫu DNA tốt nhất.

3. Quy trình phản ứng qPCR (có thể được điều chỉnh thích hợp theo mô hình)SYBR xanh lá cây phổ quát qPCR Mix

Hai bước

Ba bước

a. Thiết lập nhiệt độ ủ&mở rộng (ủ) theo giá trị Tm của mồi; Nếu đoạn khuếch đại trong vòng 200bp, thời gian ủ&mở rộng (mở rộng) có thể được đặt thành 15 sec; Ngoài ra, cài đặt thời gian ủ&kéo dài (mở rộng) cần được điều chỉnh theo thời gian thu thập dữ liệu tối thiểu cần thiết cho máy qPCR bạn đang sử dụng;

b. Có sự khác biệt trong chương trình thu thập đường cong nóng chảy của các thiết bị qPCR khác nhau, thường có thể sử dụng chương trình thu thập đường cong nóng chảy mặc định của thiết bị.

4. Tối ưu hóa thử nghiệm

Nếu hiệu suất phản ứng kém với điều kiện phản ứng mặc định, cần tối ưu hóa điều kiện phản ứng, có thể được thực hiện từ nồng độ mồi và quy trình khuếch đại:

① Điều chỉnh nồng độ mồi

Khi nồng độ mồi cuối cùng thay đổi trong khoảng 0,1~1,0 μM, nồng độ mồi càng thấp, độ đặc hiệu khuếch đại càng cao, nhưng hiệu quả khuếch đại sẽ giảm.

② Tối ưu hóa chương trình mở rộng

Cần tăng độ đặc hiệu khuếch đại, có thể sử dụng quy trình hai bước hoặc tăng nhiệt độ ủ; Để nâng cao hiệu quả mở rộng, bạn có thể sử dụng quy trình ba bước hoặc kéo dài thời gian mở rộng.

5. Nguyên tắc thiết kế mồi

① Chiều dài sản phẩm mở rộng đề nghị kiểm soát ở 80~200 bp;

Chiều dài mồi là 18~25 bp;

③ Giá trị Tm của mồi chuyển tiếp và mồi đảo ngược chênh lệch không quá 1 ℃ là tốt nhất, giá trị Tm được kiểm soát ở 58~62 ℃;

④ Kiểm soát nội dung GC của mồi từ 40%~60%;

⑤ Dẫn A, G, C, T phân bố tổng thể cố gắng để đồng đều, tránh T/C hoặc A/G cấu trúc liên tục (đặc biệt là 3');

⑥ Cơ sở cuối cùng của mồi 3'tốt nhất là G hoặc C;

Tránh các chuỗi bổ sung bên trong vật dẫn hoặc giữa hai vật dẫn;

⑧ Sử dụng chức năng NCBI BLAST để xác nhận tính đặc hiệu của mồi.

Được thành lập vào năm 2004, công ty Azaood của Mỹ là nhà phát triển và sản xuất enzyme tinh khiết chất lượng cao, protein, axit nucleic và bộ tách tế bào, huyết thanh bò thai cho nghiên cứu khoa học đời sống, chẩn đoán và ứng dụng công nghệ sinh họcLingdaoNgười; Công ty Azuod là nhà sản xuất chính được chứng nhận ISO9001, có thể đáp ứng các yêu cầu và ứng dụng từ nghiên cứu đến xử lý sinh học hàng loạt quy mô lớn và OEM.