Giới thiệu bộ dụng cụ phát hiện quang phổ:
PDC, được tìm thấy chủ yếu trong nấm men, là một trong những enzyme quan trọng trong quá trình lên men ethanol, xúc tác quá trình khử carboxyl pyruvate để tạo ra acetaldehyde.
Nguyên tắc xác định:
PDC xúc tác quá trình khử cacboxyl pyruvate để tạo ra acetaldehyde, thêm ethanol dehydrogenase (ADH) để xúc tác hơn nữa quá trình khử acetaldehyde của NADH để tạo ra ethanol và NAD+; NADH có đỉnh hấp thụ ở 340nm, trong khi NAD+thì không. Hoạt động của PDC được tính bằng cách xác định tốc độ giảm hấp thụ ánh sáng 340nm.
Tự chuẩn bị dụng cụ và vật tư:
Máy nghiền, đá, máy ly tâm để bàn, máy quang phổ UV, đĩa đo thạch anh 1ml, súng pipet có thể điều chỉnh và hơi nước đôi.
Thành phần đại lý và điều chế:
Chiết xuất: chất lỏng 100mL × 1 chai, bảo quản ở 4 ℃.
Thuốc thử I: chất lỏng 20mL × 1 chai, bảo quản ở 4 ℃.
Thuốc thử 2: bột × 1 chai, bảo quản tránh ánh sáng ở 4 ℃. 1 ml nước cất hòa tan trước khi sử dụng; Sau khi phân phối thuốc thử không hết - 20 độ C, cấm đông lạnh tan nhiều lần.
Thuốc thử 3: bột × 1 chai, bảo quản tránh ánh sáng ở 4 ℃. 1 ml nước cất hòa tan trước khi sử dụng; Sau khi phân phối thuốc thử không hết - 20 độ C, cấm đông lạnh tan nhiều lần.
Thuốc thử IV: bột × 1 chai, 4 ℃ bảo quản tránh ánh sáng. 1 ml nước cất hòa tan trước khi sử dụng; Sau khi phân phối thuốc thử không hết - 20 độ C, cấm đông lạnh tan nhiều lần.
Bảng hoạt động xác định:
Công thức tính toán hoạt động enzyme:
a. Công thức tính toán được xác định bằng đĩa tỷ lệ thạch anh vi lượng như sau:
(1) Tính theo nồng độ protein mẫu:
Định nghĩa hoạt động enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết cho mỗi miligam histone xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút là một đơn vị hoạt động enzyme (U).
Hoạt động DAO (nmol/phút/mg prot)=× V Chống tổng ÷ (V-dạng × Cpr) ÷ T=18 × A460 ÷ Cpr
(2) Tính theo chất lượng mẫu:
Định nghĩa hoạt động enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết cho mỗi gram mô để xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút được xác định là một đơn vị hoạt động enzyme.
Hoạt động DAO (nmol/phút/g Trọng lượng tươi)=× V Chống Tổng ÷ (V-Mẫu ÷ V-Mẫu Tổng × W) ÷ T=18 × A460 ÷ W
(3) Tính theo số lượng tế bào:
Định nghĩa hoạt động enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết để xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút trên 104 tế bào được xác định là một đơn vị hoạt động enzyme.
Hoạt động DAO (nmol/phút/104cell)=× V tổng số ÷ (V-mẫu ÷ V-mẫu tổng số × số lượng tế bào) ÷ T=18 × A460 ÷ số lượng tế bào
(4) Theo thể tích chất lỏng
Định nghĩa hoạt động của enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết để xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút trong một ml huyết thanh được xác định là một đơn vị hoạt động của enzyme.
Hoạt động DAO (nmol/phút/mL)=× V Chống tổng ÷ V Mẫu ÷ T=18 × A460
Epsilon: oxy hóa láng giềng Fenanilamine millimol hệ số tuyệt chủng: 7,5 L/mmol/cm; d: Đường kính ánh sáng của đĩa đo màu, 1cm; Tổng phản ứng V: Tổng thể tích phản ứng, 0,2mL; Mẫu V: Thể tích mẫu trong phản ứng, 0,05mL; Tổng mẫu V: Thêm thể tích chiết xuất, 1mL; Cpr: Nồng độ protein mẫu, mg/mL; W: khối lượng mẫu, g; T: thời gian phản ứng, 30 phút
b. Công thức tính toán được xác định bằng tấm 96 lỗ như sau
(1) Tính theo nồng độ protein mẫu:
Định nghĩa hoạt động enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết cho mỗi miligam histone xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút là một đơn vị hoạt động enzyme (U).
Hoạt động DAO (nmol/phút/mg prot)=× V Chống tổng ÷ (V-dạng × Cpr) ÷ T=36 × A460 ÷ Cpr
(2) Tính theo chất lượng mẫu:
Định nghĩa hoạt động enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết cho mỗi gram mô để xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút được xác định là một đơn vị hoạt động enzyme.
Hoạt động DAO (nmol/phút/g Trọng lượng tươi)=× V Tổng số ÷ (V-mẫu ÷ V-mẫu Tổng số × W) ÷ T=36 × A460 ÷ W
(3) Tính theo số lượng tế bào:
Định nghĩa hoạt động enzyme: Ở pH7.2, ở nhiệt độ 37 ℃, lượng enzyme cần thiết để xúc tác sản xuất 1nmol H2O2 mỗi phút trên 104 tế bào được xác định là một đơn vị hoạt động enzyme.
Kháng thể apolipoprotein L5, kháng thể đặc hiệu histone lysine demethylase 1
Kháng thể apolipoprotein M, kháng thể histone lysine demethylase PHF8
Kháng thể apolipoprotein O, kháng thể histone lysine N-methyl EZH1
Chuột trắng Intermedin-3 (IL-3) Elisa xét nghiệm Kit
Chuột trắng Medium 3 (IL-3) Elisa thử nghiệm Kit miễn phí thế hệ
Chuột Interleukin 32 (IL-32) Elisa Bộ xét nghiệm phân tích
Chuột trắng Intermedin 32 (IL-32) Elisa xét nghiệm Kit
Chuột Interleukin 33 (IL-33) Elisa Bộ xét nghiệm phân tích
Pyruvate Decarboxylase (PDC) Hộp kiểm tra quang phổ UV cho vi khuẩn cột RNAout50 Phần mềm cột RNAout50
Staphylococcus column RNAout50 Sụn cột RNAout50 lần
Mycobacterium cylindrium RNAout50 lần Staphylococcus cylindrium RNAout50 lần
Bộ dụng cụ nâng đôi RNA-DNA của vi khuẩn dạng cột 50 lần đông máu dạng cột DNAout50 lần
Cột G+Vi khuẩn RNAout50 Cột Nước tiểu DNAout50