Máy chiết xuất axit nucleic

Thuốc thử chiết xuất RNA TriZol Total

Số hàng sản phẩm:R1000

Điều kiện bảo quản:Thuốc thử chiết xuất RNA TriZol TotalBảo quản ổn định 12 tháng ở nhiệt độ phòng.Chúng tôi khuyên bạn nên tiết kiệm trong2~8 ° C trong môi trường.

Lưu ý quan trọng:

Phenol có trong sản phẩm này, độc hại và ăn mòn. Nếu hít vào cơ thể, chạm vào da, nuốt phải, v.v. có thể dẫn đến ngộ độc, bỏng, cũng như các tổn thương cơ thể khác. Khi sử dụng sản phẩm này, bạn nên đeo các vật dụng bảo vệ như găng tay, mặt nạ mắt, mặt nạ, v.v. Nếu tiếp xúc không cẩn thận, bạn nên rửa ngay bằng nhiều nước và đến bệnh viện để điều trị.

Giới thiệu sản phẩm:

Thuốc thử chiết xuất RNA TriZol TotalLà thuốc thử chiết xuất RNA tổng phổ rộng. Hoạt động thử nghiệm nhanh chóng và thuận tiện, màu sắc tươi sáng, dễ phân lớp. Thuốc thử này có phạm vi ứng dụng rộng, có thể chiết xuất tổng RNA từ các mẫu mô động vật, vật liệu thực vật, các vi sinh vật khác nhau và tế bào nuôi cấy. Phương pháp này có tác dụng phân lập tốt hơn đối với một lượng nhỏ mô (50-100 mg) và tế bào (5 × 106) cũng như một lượng lớn mô (≥1g) và tế bào (>107). Các mẫu được phân tách đầy đủ trong thuốc thử chiết xuất RNA TriZol trong khi vẫn đảm bảo tính toàn vẹn của RNA càng nhiều càng tốt. Sau khi ly tâm chloroform được thêm vào, dung dịch được chia thành ba lớp: pha nước không màu ở trên, pha trung gian và pha hữu cơ màu đỏ ở dưới, với RNA được phân phối ở lớp trên. Sau khi thu thập lớp trên, tổng RNA có thể được thu hồi bằng kết tủa isopropyl alcohol. Toàn bộ RNA được chiết xuất có tính toàn vẹn tốt, không bị nhiễm protein và DNA và có thể được sử dụng trong các thí nghiệm thông thường khác nhau trong sinh học phân tử, chẳng hạn như RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、 Phiên dịch bên ngoài cơ thể.

Thuốc thử chiết xuất RNA tổng hợp TriZol có thể thúc đẩy sự kết tủa của nhiều RNA có kích thước phân tử khác nhau trong các chi khác nhau. Ví dụ, điện di của gel RNA agarose lấy từ gan chuột và nhuộm với ethidine bromide cho thấy nhiều dải trọng lượng phân tử cao không liên tục (thành phần mRNA và hnRNA) giữa 7kb và 15 kb, hai ribosome ưu thế~5 kb (28S) và~2 kb (18S), và RNA trọng lượng phân tử thấp từ 0,1 đến 0,3 kb (tRNA, 5S). Khi RNA được rút ra pha loãng với TE, tỷ lệ A260/A280 của nó là ≥ 1,8. Lưu ý rằng nếu đó là điện di của gel agarose thông thường, vị trí 28S là khoảng 2kb, 18S là khoảng 1kb và vị trí gel ở các nồng độ khác nhau thay đổi đáng kể.

Lưu ý:

1.Đối với mẫuSau khi chiết xuất TriZol Total RNA, thuốc thử có thể được đặt ở -70 ° C trong hơn một tháng nếu không được thêm vào chloroform ngay lập tức. Kết tủa RNA được bảo quản trong 75% ethanol, có thể được bảo quản trong một tuần ở 2-8 ° C và 1 năm ở -20 ° C. RNA có chu kỳ bán rã ngắn và dễ bị phân hủy, và các thí nghiệm tiếp theo như sao chép ngược thành cDNA, Northern Blot, v.v. được khuyến nghị càng sớm càng tốt sau khi chiết xuất.

Nếu các thí nghiệm hạ lưu rất nhạy cảm với DNA, nên sử dụng RNase Free DNase I để xử lý RNA.

3.+Lĩnh vực thức ăn chăn nuôi: Nguyên liệu bổ sung thực phẩm vi chất trong chăn nuôi (Mở mới hoặc chiết xuấtRNA chuyên dụng), 75% ethanol (nước được xử lý bởi DEPC), nước miễn phí RNase hoặc nước được xử lý bởi DEPC.

4. Công ty sản xuất thuốc thử chiết xuất RNA TriZol Reagent có chất lượng tuyệt vời, có thể thay thế TriZol Reagent của Invitrogen. Chất lượng chiết xuất giống như thí nghiệm hạ lưu *.

Video tổng hợp báo cáo tin tức dựa trên luật sử dụng hợp lý – Fair use for news reporting ((

Gợi ý:

dùngCần đeo găng tay và bịt mắt khi chiết xuất RNA TriZol Total. Tránh tiếp xúc với da và quần áo. Hoàn thành hoạt động trong tủ hút hóa chất. Tránh hít phải đường hô hấp. Nếu không có hướng dẫn đặc biệt, tất cả các hoạt động nên ở nhiệt độ phòng 15~30 ° C.

1. Bột mịn cân bằng

a. Tổ chức thực vật:

Lấy mô thực vật tươi nghiền kỹ trong nitơ lỏng hoặc sau khi xử lý mô thực vật vỡ trực tiếp trongThuốc thử chiết xuất RNA TriZol TotalMài trung bình và nhanh chóng, mỗi 50-100 mg mô thêm 1 ml thuốc thử chiết xuất RNA TriZol, trộn đều. Lưu ý: Khối lượng mẫu thường không vượt quá 10% tổng khối lượng thuốc thử chiết xuất RNA TriZol.

b) Tổ chức động vật:

Lấy tươi hoặc- 70 ℃ mô động vật đông lạnh cố gắng cắt nhỏ, mỗi 30-100 mg mô thêm 1 ml thuốc thử chiết xuất RNA TriZol, máy san lấp mặt bằng tiến hành xử lý san lấp mặt bằng. Hoặc trộn với thuốc thử chiết xuất RNA TriZol Total 1ml sau khi nghiền trong nitơ lỏng. Lưu ý: Khối lượng mẫu thường không vượt quá 10% tổng khối lượng thuốc thử chiết xuất RNA TriZol.

c. Tế bào nuôi cấy đơn tầng:

Cố gắng loại bỏ chất lỏng còn sót lại và đi thẳng vào đường kính.1 ml thuốc thử chiết xuất TriZol Total RNA được thêm vào tấm nuôi cấy 3,5 cm được bao phủ và thổi liên tục các tế bào lysis. Số lượng thuốc thử chiết xuất RNA TriZol cần thiết được xác định dựa trên diện tích của đĩa nuôi cấy chứ không phải số lượng tế bào (cộng với 1 ml mỗi 10cm2). Khi lượng thuốc thử chiết xuất TriZol Total RNA không đủ có thể dẫn đến nhiễm DNA trong RNA được chiết xuất.

Chú ý:

Các tế bào nuôi cấy dán tường thường không thể * rơi ra khỏi chai (đĩa), điều này không có nghĩa là lysis không *, tại thời điểm này màng tế bào thực sự đã * vỡ và đã được giải phóng tất cảRNA， Tiếp tục làm là được.

D. Đình chỉ tế bào:

Ly tâm thu thập tế bào. ởCác tế bào lysis được thổi liên tục bằng pipet trong thuốc thử chiết xuất RNA tổng thể TriZol. Mỗi 5~10 ×10⁶Tế bào động vật, tế bào thực vật hoặc nấm men hoặc 1ml mỗi 1 × 107 vi khuẩnThuốc thử chiết xuất RNA TriZol Total. Nên tránh rửa tế bào trước khi thêm thuốc thử chiết xuất TriZol Total RNA, vì điều này sẽ làm tăng khả năng phân hủy mRNA. Phá vỡ một số nấm men và vi khuẩn có thể yêu cầu sử dụng máy san lấp mặt bằng.

F. Máu:

Sử dụngThuốc thử chiết xuất RNA TriZol TotalPhản ứng LS.

2.Đặt mẫu đồng đều trong điều kiện nhiệt độ phòng sau khi chấn động dữ dội5 phút để phân ly nucleoprotein *.

3. Các bước tùy chọn:

ởLực ly tâm 12.000 vòng/phút ở 4 ° CLy tâm 10 phút, lấy sạch.

Ví dụ như trong mẫu có nhiều protein, chất béo, đa đường hoặc cơ bắp, củ của cây cối v. v. có thể được loại bỏ bằng ly tâm. Lượng mưa sau khi ly tâm chứa màng ngoài tế bào, polysaccharide, và trọng lượng phân tử caoDNA， Trong đó có RNA. Khi xử lý các mẫu mô mỡ, lớp trên là một lượng lớn dầu cần được loại bỏ. Lấy chất lỏng đồng đều làm sáng tỏ tiến hành bước tiếp theo.

4.mỗi1 mlThuốc thử chiết xuất RNA TriZol TotalThêm 0,2ml chloroform. Đóng nắp ống, chấn động mạnh trong 15 giây và đặt nó ở nhiệt độ phòng trong 2~3 phút.

5.ở4 ° C 12.000 rpm lực ly tâm đông lạnh tốc độ cao ly tâm trong 10-15 phút. Hỗn hợp sau khi ly tâm được chia thành ba lớp: lớp chloroform phenol hữu cơ màu đỏ thấp hơn, lớp giữa, lớp mẫu nước không màu trên. RNA tồn tại trong các lớp mẫu nước, không có ngoại lệ. Công suất của lớp mẫu nước là khoảng 50-60% tổng công suất chiết xuất RNA của TriZol. (Lớp hữu cơ và lớp trung gian là protein và DNA, nếu cần chiết xuất, vui lòng liên hệ với chúng tôi để biết phương pháp chiết xuất).

6.Chuyển một lớp mẫu nước vào một ống ly tâm sạch sẽ và thêm một lượng isopropyl alcohol bằng nhau. Đặt nhiệt độ phòng sau khi trộn ngược10 phút.

Sự kết tủa RNA thường không nhìn thấy được trước khi ly tâm, và sau khi ly tâm, sự kết tủa keo hình thành ở cả hai bên và dưới ống.

7.ở nhiệt độ phòng hoặc4°C 12.000 rpm ly tâm trong 10 phút, bỏ đi.

8.tham gia75% lượng mưa ethanol. Lượng mưa được rửa bằng 1 ml ethanol 75% cho mỗi 1 ml thuốc thử chiết xuất RNA TriZol Total.

9.ở nhiệt độ phòng hoặc4°C 12.000 rpm Ly tâm trong 3 phút, bỏ đi, cẩn thận không để mất kết tủa RNA.

Chú ý: một lượng nhỏ chất lỏng còn lại có thể ly tâm trong thời gian ngắn, sau đó dùng đầu súng hút ra, chú ý không nên hút ra lắng đọng.

10.Đặt nhiệt độ phòng2-3 phút, để khô. Thêm 30-100μl RNase nước miễn phí để hòa tan RNA đầy đủ và RNA thu được được giữ ở -70oC, ngăn ngừa sự suy thoái.

Chú ý: một lượng nhỏ chất lỏng còn lại có thể ly tâm trong thời gian ngắn, sau đó dùng đầu súng hút ra, chú ý không nên hút ra lắng đọng.