Bộ xét nghiệm Fluorescenase NLuc

NLuc lucifferase là một enzyme phân tử nhỏ (19,1 kDa) được biến đổi gen, là protein gen báo cáo phát quang sinh học có hiệu suất zhuo Việt. Nó sáng hơn khoảng 150 lần so với đom đóm (Photinus pyralis) hoặc hythận luciferase và sử dụng một chất tương tự mới của coynetine (Furimazine) để tạo ra tín hiệu phát sáng kiểu cường độ cao. Phản ứng phát sáng này không phụ thuộc vào ATP trong khi đạt được độ nhạy phát hiện cao nhất bằng cách ức chế tín hiệu phát sáng cơ bản.
NLuc Reporter Gene Assay Kit cung cấp một tác nhân đơn giản, có thể được thêm vào một lần với độ nhạy cao, tạo ra tín hiệu mạnh hơn với sự hiện diện của NLuc fluorinase.
Thành phần sản phẩm:

1. Vật liệu tự chuẩn bị:
PBS； Đa đạo bài thương; Bảng nuôi cấy tế bào màu trắng không thấm ánh sáng/đen; Máy phát quang hóa học hoặc máy đánh dấu enzyme.
2. Chuẩn bị trước khi phát hiện:
(1) Đặt trước chất nền phát hiện NLuc (50 ×) và chất đệm chất nền phát hiện NLuc ở nhiệt độ phòng.
(2) Dựa trên lượng sử dụng thực tế, trộn một lượng vừa phải chất nền phát hiện NLuc (50 ×) với bộ đệm chất nền phát hiện NLuc theo tỷ lệ 1: 50, tránh ánh sáng dự phòng ở nhiệt độ phòng. Ví dụ: nếu bạn cần 10 mL chất lỏng phản ứng, bạn cần thêm 0,2 mL chất nền phát hiện.
Lưu ý: Các chất lỏng phản ứng còn lại có chứa chất nền mới không được khuyến khích giữ lại sau khi kết thúc thí nghiệm.
3, Phương pháp hoạt động:
(1) Tấm nuôi cấy tế bào được lấy ra khỏi hộp nuôi cấy tế bào, đặt 5-15 phút và trở lại nhiệt độ phòng.
Ghi chú: Sử dụng bảng nuôi cấy tế bào màu trắng không thấm ánh sáng hoặc màu đen, giảm nhiễu tín hiệu giữa các lỗ.
(2) Thêm giải pháp kiểm tra
Một chất lỏng phản ứng chứa chất nền cân bằng đến nhiệt độ phòng được thêm vào mỗi lỗ tế bào bằng cách sử dụng nhiều ống xả, với thể tích mẫu tương tự và trộn đều với thể tích nuôi cấy tế bào. Ví dụ, tấm 96 lỗ thường được thêm vào dung dịch nuôi cấy 80-100 μL, tương ứng với dung dịch thử nghiệm 80-100 μL; Tấm 384 lỗ thường được thêm vào dung dịch nuôi cấy 20-30 μL, tương ứng với dung dịch thử nghiệm 20-30 μL.
(3) Phát hiện ánh sáng
Phát hiện NLuc luciferase trong máy phát quang hóa học hoặc máy đo enzyme sau khi trộn đều báo cáo hoạt động gen.
Lưu ý: Để có kết quả xét nghiệm tốt nhất, vui lòng hoàn thành thử nghiệm trong vòng 1 giờ sau khi thêm thuốc thử.
4. Phân tích dữ liệu:
(1) Thiết kế thử nghiệm: Theo các mục đích thử nghiệm khác nhau, nhóm kiểm soát, nhóm thử nghiệm và nhóm kiểm soát trống nên được thiết lập trong mỗi bảng nuôi cấy. Để đảm bảo tính chính xác của thí nghiệm, về mặt lý thuyết, mỗi nhóm thí nghiệm (bao gồm cả nhóm đối chứng) nên trừ đi các phép đo phát sáng của fluorinase đom đóm trong nhóm đối chứng trống.
a) Nhóm đối chiếu trống:
Bối cảnh F: Tế bào không nhiễm+chất lỏng phản ứng.
Lưu ý: Nhóm kiểm soát trống phải có cùng kích thước mẫu như mẫu thử nghiệm, chứa cùng một kết hợp môi trường/huyết thanh như mẫu thử nghiệm, cộng với cùng một tác nhân thử nghiệm wan.
② Nhóm thí nghiệm: Các tế bào truyền nhiễm được xử lý bằng hợp chất thí nghiệm (tức là nhóm thí nghiệm F).
③ Nhóm đối chứng: Các tế bào chuyển tiếp không được xử lý để chuẩn hóa kết quả (tức là nhóm đối chứng F).
(2) Kết quả tính toán:
Nhóm thử nghiệm=Nhóm thử nghiệm F - Background F.
Nhóm kiểm soát=nhóm kiểm soát F - nền F.
Multiple of expression=nhóm thử nghiệm/nhóm kiểm soát.

- Bảo quản ở 20 ℃, có giá trị trong một năm. Chất nền phát hiện NLac (50 ×) được khuyến nghị bảo quản ở nhiệt độ -80 ℃.

1, phản ứng enzyme nhạy cảm hơn với nhiệt độ, tất cả các tác nhân cân bằng đến nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trước khi phát hiện mẫu phải được sử dụng lại;
2. Khi phát hiện cần sử dụng tấm 96 lỗ màu trắng hoặc đen. Nếu sử dụng tấm 96 lỗ trong suốt thông thường, sẽ có sự can thiệp lẫn nhau giữa các lỗ liền kề;
Dụng cụ phát hiện: Các dụng cụ có thể phát hiện ánh sáng hóa học đều phù hợp, nhưng do cài đặt và độ nhạy của các dụng cụ khác nhau, giá trị tín hiệu quang đo được cũng sẽ khác nhau;
4, xác định máy đo huỳnh quang ống đơn, thời gian của mỗi mẫu sau khi trộn với thuốc thử xác định cho đến trước khi xác định phải phù hợp;
5. Vì sự an toàn của chính bạn, xin hãy bảo vệ hiệu quả trước khi thử nghiệm;