Bộ xét nghiệm gen báo cáo Difluorinase

Bộ kiểm tra Firefly & Renilla (Bộ xét nghiệm gen báo cáo DifluorinaseCung cấp một phương tiện hiệu quả để phát hiện biểu hiện gen, trong thử nghiệm DLR, hoạt động của Firefly luciferase và Renilla luciferase có thể được phát hiện lần lượt trong một mẫu duy nhất. Đầu tiên lấy luciferin làm chất nền để phát hiện hoạt tính của đom đóm fluorinase, sau đó thêm vào chất ức chế xúc tác của đom đóm fluorinase, đồng thời thêm vào coelenterazine để phát hiện hoạt tính của seanephrine fluorinase, thực hiện phát hiện gen báo cáo của bisfluorinase. Sự biểu hiện của gen có thể được phát hiện rất nhạy cảm và hiệu quả thông qua hệ thống phát quang sinh học, fluorinase và chất nền của nó. Thông thường, nhân bản phần tử điều hòa phiên mã của gen quan tâm hoặc vùng con khởi động 5'ở thượng nguồn Luciferase, hoặc nhân bản vùng 3'-UTR ở hạ nguồn Luciferase, xây dựng thành plasmid gen báo cáo, sau đó chuyển sang tế bào, xử lý tế bào phân giải sau tế bào bằng các loại thuốc thích hợp, thông qua phát hiện hoạt động cao thấp của fluorinase để đánh giá tác dụng điều hòa phiên mã của các gen mục đích như xử lý thuốc. Sea-Nephroglomerase được sử dụng nhiều hơn như một nhân sâm nội bộ để phát hiện hiệu quả truyền nhiễm để loại bỏ sự khác biệt về số lượng tế bào và hiệu quả truyền nhiễm.
Fluorinase, một protein có trọng lượng phân tử khoảng 61 kD, có thể xúc tác fluorin để tạo ra oxyluciferin trong điều kiện có ATP, ion magiê và oxy, tạo ra tín hiệu ánh sáng trong quá trình fluorin bị oxy hóa. Hythận fluorinase, một protein có trọng lượng phân tử khoảng 36 kD, có thể xúc tác quá trình oxy hóa coelenteramide của coelenteramide trong điều kiện oxy hóa, cũng tạo ra tín hiệu ánh sáng trong quá trình oxy hóa coelenteramide. Tín hiệu ánh sáng của bộ dụng cụ này có thể được xác định bằng máy phát quang hóa học, máy đánh dấu enzyme hoặc máy đo nhấp nháy lỏng. Bộ dụng cụ này có các tính năng như phát hiện nhanh, độ nhạy cao, phạm vi phát hiện rộng và không có sự can thiệp của hoạt động nội sinh tế bào.
Tính năng sản phẩm:
Nhanh chóng: Quá trình phân giải tế bào được thực hiện trong vòng 10-15 phút.
Thuận tiện: Thuốc thử dễ pha chế, các bước phát hiện mẫu đơn giản.
Nhạy cảm: có thể phát hiện zui thấp 10-20Fluorinase của mol.
Nồng độ enzyme có thể lên tới 8 bậc độ lớn.
Thành phần sản phẩm:

1, Phân hủy tế bào
(1) Môi trường được loại bỏ, cộng với PBS nhẹ nhàng rửa hai lần (các tế bào dán tường có thể thực hiện thao tác này trực tiếp, các tế bào lơ lửng cần thu thập tế bào ly tâm). Thêm 1 × Lysis Buffer theo sơ đồ sau (pha loãng thành phần A bằng nước vô trùng 4: 1), sau đó đặt đĩa nuôi cấy lên bộ dao động nhỏ ở nhiệt độ phòng 15 phút để phân giải đầy đủ các tế bào.
Lưu ý: Sản phẩm nứt có thể được bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 6 giờ, -70 ℃ có thể được lưu trữ lâu dài (sản phẩm nứt không thể được đông lạnh và tan chảy nhiều lần).
(2) Ly tâm sản phẩm cracking 10.000-15.000 vòng/phút 3-5 phút, sau khi ly tâm di chuyển chất lỏng thượng lưu vào ống EP mới để kiểm tra tiếp theo.
Lưu ý: Nó có thể được phát hiện ngay lập tức sau khi phân hủy tế bào, nó cũng có thể được đông lạnh và phát hiện lại khi cần thiết. Các mẫu đông lạnh cần phải hòa tan đến nhiệt độ phòng rồi kiểm tra.
2, Công thức chất lỏng làm việc
(1) Khôi phục tất cả các thành phần về nhiệt độ phòng.
(2) Hòa tan đầy đủ thành phần C với thành phần B, tạo thành dung dịch làm việc Firefly fluorinase 0,2 mg/mL.
Lưu ý: Firefly fluorin enzyme làm việc lỏng không thể được đông lạnh nhiều lần, nếu một lần thử nghiệm liều lượng ít hơn, đề nghị theo một lần sử dụng lượng để lắp ráp thành một quy cách nhỏ.
(3) Pha loãng thành phần E thành dung dịch làm việc hydronephron fluorease với thành phần D, pha loãng thành phần 1 ul E thành phần 49 µL D.
Ghi chú: Dịch làm việc của enzyme huỳnh quang thận biển cần được phối hợp hiện tại.
3, phát hiện giá trị phát quang hóa học
(1) Mở dụng cụ có chức năng phát hiện ánh sáng hóa học theo hướng dẫn vận hành dụng cụ, chẳng hạn như máy đo enzyme đa chức năng, đặt các thông số, thời gian xác định là 10 giây, khoảng thời gian xác định là 2 giây.
(2) Khi xác định mỗi mẫu, lấy mẫu 20-100 ul (nếu kích thước mẫu đủ, vui lòng thêm 100 ul; nếu kích thước mẫu không đủ có thể giảm liều lượng thích hợp, nhưng số lượng lỗ phát hiện cần phải phù hợp). 1 × Lysis Buffer là kiểm soát trống.
B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)
Lưu ý: Vì ánh sáng này là ánh sáng tức thời, nên phát hiện ngay lập tức sau khi thêm dung dịch làm việc Firefly fluorinase.
B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)
(5) Giá trị RLU được xác định bằng fluorinase đom đóm chia cho giá trị RLU được xác định bằng fluorinase thận biển trong trường hợp nội sâm. Mức độ kích hoạt của các gen được báo cáo cho các mục liên mẫu khác nhau được so sánh dựa trên tỷ lệ thu được. Các tính toán tương tự cũng có thể được thực hiện nếu bạn sử dụng fluorinase làm nhân tố bên trong.

-20 ℃ bảo quản. Thành phần C đề nghị sử dụng trước nước vô trùng cấu hình 2 mg/mL lưu trữ, thành phần B, thành phần D và thành phần C cấu hình lưu trữ,
Phân phối số lượng nhỏ theo nhu cầu thí nghiệm. Tất cả dịch công tác kiểm tra đề nghị phối hợp với hiện tại, tránh nhiều lần đông lạnh tan.

bộ xét nghiệm di truyền báo cáo luciferase,Bộ xét nghiệm gen báo cáo Difluorinase