Thí nghiệm tương tác phân tử: đồng kết tủa miễn dịch IP/CO-IP

I. Giới thiệu công nghệ

IP (Immunoprecipitation) và Co-IP (Immunoprecipitation) là các kỹ thuật cốt lõi để nghiên cứu chức năng và tương tác của protein, được sử dụng rộng rãi trong sinh học phân tử và sinh học tế bào.

II. Nguyên tắc kỹ thuật

IP thông qua các kháng thể đặc hiệu so với protein mục tiêuLiên kết, sử dụng kháng thể để cô lập protein mục tiêu (tức là kháng nguyên) và do đó phát hiện sự biểu hiện của một protein nhất địnhCO-IP dựa trên IP để xác minh sự tương tác giữa các protein. Bằng cách bắt một protein (protein mồi), phát hiện protein tương tác (protein đích) gắn với nó,Do đóMục đích của protein được nghiên cứu bởi Specific RichTừ đó nghiên cứu các protein tương tác với các protein đã biết trong phức hợp.

III. Cảnh ứng dụng

• IP: Làm giàu protein phong phú thấp được sử dụng để xác định phổ khối (IP-MS), để xác minh tính đặc hiệu kháng thể.

• Co-IP: Nghiên cứu các phức hợp yếu tố phiên mã, tương tác kinase-cơ chất và xác minh các tương tác đã biết hoặc khám phá các đối tác tương tác mới (ví dụ: phức hợp đường tín hiệu).

IV. Lợi thế kỹ thuật

• IP: có tính đặc hiệu cao và phụ thuộc vào sự gắn kết đặc biệt của kháng thể-kháng nguyên.

• Tính linh hoạt: Hỗ trợ có thể chọn hạt từ (dễ vận hành, tương thích tự động) hoặc agar (dung lượng liên kết cao).

• Công ty- IP: Tính xác thực trong cơ thể: Nghiên cứu là sự tương tác giữa các protein trong trạng thái tự nhiên của cơ thể, có thể phản ứng với các protein tương đối thực tế.

V. Loại mẫu

Tế bào tươi (tế bào dán tường/tế bào lơ lửng), tế bào đông lạnh, mô đông lạnh, mẫu dịch lysis.

VI. Yêu cầu mẫu

• Mẫu tế bào: khoảng 5 × 10 ^ 6 (có thể là 2 đĩa 6cm, hoặc được lưu trữ trong ống ly tâm ở dạng tế bào lơ lửng, hoặc 2 chai T25);

• Mô đông lạnh: khoảng 40 mg; mẫu lysis: nồng độ protein không dưới 2 mg/mg và tổng lượng protein không dưới 3 mg.

VII. Chuẩn bị mẫu&Vận chuyển

• Mẫu tế bào sống: khoảng cách gần hơn có thể cung cấp mẫu tươi, sẽ nuôi cấy trong đĩa/chai T25/ống ly tâm bên trong mẫu tế bào tươi ở nhiệt độ bình thường chuyển phát nhanh (muộn nhất là ngày hôm sau), trong thành phố có thể flash hoặc giao hàng trực tiếp, khoảng cách xa hơn, có thể -80 ℃ băng khô tế bào đông lạnh vận chuyển;

• Mẫu mô&mẫu chất lỏng lysis: -80 ℃ Băng khô đông lạnh vận chuyển.

8.Thuốc thử cần cung cấp

Kháng thể IB và kháng thể IP để phát hiện

IX. Chu kỳ thử nghiệm

1-2 tuần (không bao gồm khối phổ)

X. Khác

Xét nghiệm Western blot/protein