Thí nghiệm tương tác phân tử: đồng kết tủa miễn dịch nhiễm sắc tố ChIP

I. Giới thiệu công nghệ

ChIP (đồng kết tủa miễn dịch nhiễm sắc tố) là một kỹ thuật quan trọng để nghiên cứu sự tương tác của protein với DNA, được sử dụng rộng rãi trong các lĩnh vực như xác định vị trí gắn kết yếu tố phiên mã, phân tích sửa đổi biểu sinh, v.v.

II. Nguyên tắc kỹ thuật

Sử dụng sự gắn kết cụ thể của kháng thể kháng nguyên, các mảnh DNA liên kết với protein đích được kết tủa để có thể phản ánh đúng các protein điều hòa liên kết với trình tự DNA.

III. Cảnh ứng dụng

Thông số kỹ thuật sản phẩm: - Type: Digital Multifunction Imaging System - Standard Functions: Copy, Print (Vị trí gắn kết DNA của p53, NF-κB).

2. Epigenetics: phân tích sửa đổi histone (ví dụ:H3K27me3) vai trò trong im lặng di truyền.

Cơ chế bệnh tật: Khám phá các mô hình liên kết gen của các protein bất thường như MYC trong ung thư.

4. Có sẵn vớiQpcr, seq và các công nghệ khác được sử dụng cùng nhau.

IV. Lợi thế kỹ thuật

ChIP nắm bắt các liên kết động của protein với DNA ở trạng thái thực tế bên trong tế bào thông qua liên kết chéo formaldehyde, tránh âm tính giả hoặc dương tính giả trong các thí nghiệm in vitro, đặc biệt thích hợp để nghiên cứu các sự kiện liên kết ngắn như yếu tố phiên mã.VàKháng thể đặc hiệu có thểLại nữa.Làm giàu chính xác các đoạn DNA gắn với protein mục tiêu, kết hợp qPCR hoặc giải trình tự (ChIP-seq) để phát hiện mức độ tế bào thấp (như bộ dụng cụ được tối ưu hóa) với độ nhạy đáng kểVà có tính thích hợp rộng rãi.

V. Loại mẫu

Tế bào tươi (tế bào dán tường/tế bào lơ lửng), tế bào đông lạnh, mô đông lạnh, mẫu tế bào sau liên kết chéo.

VI. Yêu cầu mẫu

Mẫu tế bào: khoảng 1 × 10 ^ 7 (có thể là 1 đĩa 10cm, hoặc được lưu trữ trong ống ly tâm ở dạng tế bào lơ lửng, hoặc 1 chai T75);

Mô đông lạnh: khoảng 70 mg;

Mẫu tế bào liên kết chéo: Các tế bào được xử lý bằng cách sử dụng liên kết chéo formaldehyde 1%.

VII. Chuẩn bị mẫu&Vận chuyển

Các mẫu tế bào sống: khoảng cách gần hơn có thể được vận chuyển trong đĩa/chai T75/ống ly tâm của các mẫu tế bào tươi ở nhiệt độ bình thường (muộn nhất là ngày hôm sau), trong thành phố có thể được vận chuyển bằng đèn flash hoặc trực tiếp, khoảng cách xa hơn, có thể được vận chuyển bằng băng khô tế bào đông lạnh -80 ℃;

Mẫu mô&mẫu tế bào sau liên kết chéo: -80 ℃ Vận chuyển băng khô đông lạnh.

8.Thuốc thử cần cung cấp

Xét nghiệm kháng thể cấp ChIP.

IX. Chu kỳ thử nghiệm

1-2 tuần (không bao gồm giải trình tự)

X. Khác

Phát hiện tiếp theo Khi chọn RT PCR, bạn cần cung cấp vị trí để phát hiện tiếp theo.

Các bước cụ thể của tế bào liên kết chéo formaldehyde: thêm nồng độ formaldehyde cuối cùng là 1% vào đĩa tế bào, ủ ở 37 ° C trong 10 phút; ② Rửa tế bào hai lần bằng DPBS lạnh có chứa [1mM PMSF, 1μg/ml ức chế peptidase và 1μg/ml pepstatin A]. ③ Các tế bào được cạo vào 2ml DPBS lạnh có chứa chất ức chế protease và chuyển vào ống ly tâm để gửi đông lạnh.