Thí nghiệm phân tử Tương tác phân tử: Thí nghiệm chặn di chuyển gel EMSA

I. Giới thiệu công nghệ

Kỹ thuật EMSA là thí nghiệm di chuyển gel hoặc di chuyển điện di, được sử dụng để nghiên cứu sự tương tác giữa các protein gắn DNA/RNA và trình tự gắn DNA/RNA liên quan của chúng;

II. Nguyên tắc kỹ thuật

Protein tinh khiết hoặc chiết xuất thô tế bào được ủ với đầu dò DNA hoặc RNA được đánh dấu, trong điện di gel polyacrylamide không biến tính, DNA-protein hoặc phức hợp RNA-protein di chuyển chậm hơn so với đầu dò không liên kết, cho phép phiên mã hoặc điều chỉnh protein được kích hoạt liên kết với DNA hoặc RNA được phát hiện.

III. Cảnh ứng dụng

1. Nghiên cứu điều hòa biểu hiện gen: xác định vị trí liên kết và đặc tính liên kết của yếu tố phiên mã với DNA, nghiên cứu cơ chế điều hòa biểu hiện gen.

2. Nghiên cứu cơ chế bệnh tật: Phân tích sự bất thường trong điều hòa biểu hiện của các gen liên quan đến bệnh và khám phá cơ chế phát triển của bệnh.

3. Phát hiện mục tiêu dược phẩm: sàng lọc và xác định protein gắn DNA liên quan đến bệnh tật để cung cấp mục tiêu cho nghiên cứu và phát triển thuốc.

4. Nghiên cứu con đường tín hiệu: Nghiên cứu những thay đổi hoạt động của protein gắn kết DNA trong con đường tín hiệu và ảnh hưởng của chúng đối với các gen hạ nguồn.

IV. Lợi thế kỹ thuật

1. Hoạt động thử nghiệm tương đối đơn giản và không đòi hỏi khắt khe về điều kiện thử nghiệm.

2. Nó có thể phát hiện nhiều kích thước và cấu trúc phân tử axit nucleic và phạm vi kích thước protein rộng, có thể phát hiện sự liên kết giữa các protein khác nhau và các phân tử axit nucleic khác nhau trong một hệ thống phản ứng duy nhất.

3. Đầu dò đánh dấu biotin ổn định, an toàn, chính xác và có ái lực cao.

V. Loại mẫu

Tế bào tươi (tế bào dán tường/tế bào lơ lửng), tế bào đông lạnh, mô đông lạnh, mẫu protein nhân tế bào hoặc các yếu tố phiên mã tinh khiết, một phần của thí nghiệm cũng có thể sử dụng protein biểu hiện tái tổ hợp.

VI. Yêu cầu mẫu

Mẫu tế bào: khoảng 1 × 10 ^ 7 (có thể là 1 đĩa 10cm, hoặc được lưu trữ trong ống ly tâm ở dạng tế bào lơ lửng, hoặc 1 chai T75);

Mô đông lạnh: khoảng 400 mg;

Mô thực vật: khoảng 2g; cytonuclein, yếu tố phiên mã tinh khiết, protein biểu hiện tái tổ hợp, vv: mỗi màng cung cấp ít nhất 50ul ở nồng độ không dưới 0,5mg/ml.

VII. Chuẩn bị mẫu&Vận chuyển

Các mẫu tế bào sống: khoảng cách gần hơn có thể được vận chuyển trong đĩa/chai T75/ống ly tâm của các mẫu tế bào tươi ở nhiệt độ bình thường (muộn nhất là ngày hôm sau), trong thành phố có thể được vận chuyển bằng đèn flash hoặc trực tiếp, khoảng cách xa hơn, có thể được vận chuyển bằng băng khô tế bào đông lạnh -80 ℃;

Mẫu mô&mẫu chất lỏng khác: -80 ℃ Băng khô đông lạnh vận chuyển.

8.Thuốc thử cần cung cấp

Kháng thể đặc hiệu liên kết protein trên 50ul ở nồng độ lớn hơn 0,5 mg/ml.

IX. Chu kỳ thử nghiệm

2-3 tuần

X. Khác

Trình tự thăm dò, chẳng hạn như trình tự không thăm dò, cung cấp thông tin liên quan đến protein gắn DNA hoặc tài liệu liên quan.