Bộ nuôi cấy cơ quan ruột non của con người dựa trên khuôn mẫu

Bộ Organoid ruột con người

Bộ nuôi cấy cơ quan ruột non của con người

1、 Mô tả sản phẩm

mạc đường ruột muqueuses digestives (Bộ Organoid ruột con người) Là một bộ dụng cụ nuôi cấy cơ quan ruột non được sử dụng để thiết lập và duy trì nguồn gốc tế bào gốc trưởng thành đường ruột của con người, bộ dụng cụ này cung cấp đầy đủ các thuốc thử được tách ra từ các hốc ruột non, phục hồi các hốc, phân tích hoạt động và nuôi cấy. Nó có thể duy trì hoạt động của các hốc ruột non ở mức độ lớn hơn và nâng cao tỷ lệ hình thành các cơ quan ruột non. Các cơ quan ruột non của con người được nuôi dưỡng chủ yếu bao gồm các tế bào gốc ruột non, tế bào khuếch đại nhanh, tế bào hấp thụ ruột, tế bào pane, tế bào cốc và một lượng nhỏ tế bào nội tiết ruột. Về khả năng tự cập nhật, cấu trúc mô, loại tế bào và chức năng, các cơ quan ruột non của con người có thể tái tạo một phần các đặc điểm của biểu mô ruột của con người, do đó là mô hình in vitro lý tưởng để nghiên cứu cơ chế ổn định trạng thái ruột và bệnh tật.

2、 Thông tin sản phẩm

3、 Vật liệu và thuốc thử tự chế khác

4、 Chuẩn bị môi trường ruột non của con người

Điều chế phương tiện nuôi cấy ruột non của người trong công việc siêu sạch vô trùng. Để xây dựng10 mLVí dụ, môi trường nuôi cấy cơ quan ruột non của con người, nếu số lượng cần thiết khác nhau, số lượng có thể được điều chỉnh cho phù hợp.

1、 Yếu tố nuôi cấy ruột non của con người tan băng trên băngB(50x),Yếu tố nuôi cấy ruột non của con ngườiC(250x),Yếu tố nuôi cấy ruột non của con ngườiD(250x)。

Lưu ý: Sau khi rã đông, nên nuôi cấy các yếu tố của ruột non của con ngườiB(50x), nhân tố nuôi dưỡng cơ quan ruột nonC(250x). Bảo quản và sử dụng sau khi tách riêng, tránh đông lạnh và tan chảy lặp đi lặp lại.

2、 Sau khi cơ sở nuôi cấy tan băng, trộn đều lên xuống, trong tủ an toàn sinh học hoặc trong phòng làm việc sạch sẽ, căn cứ vào nhu cầu hàng ngày, đề nghị lắp ráp thành10 mL/Ống.

3、 Môi trường sau khi đóng gói xin vui lòng niêm phong và lưu trữ trong-20℃Bạn có thể sử dụng sau khi lấy cơ sở đào tạo đã phân bố để cân bằng nhiệt độ phòng.

Lưu ý: Môi trường ruột non của con người sau khi xây dựng có thể được tìm thấy trong2-8°CLưu trữ, đề nghị sử dụng trong vòng hai tuần. Ngoài ra, các yếu tố nuôi cấy cơ quan ruột non của con ngườiB(50x)Nó chứa vi khuẩn và kháng sinh nấm.(50x)。

5、 Xây dựng và nuôi cấy các cơ quan ruột non của con người

Lưu ý: Các nghiên cứu liên quan đến vật liệu mô chính của con người phải tuân theo tất cả các quy định của cơ quan và chính phủ có liên quan. Phải có sự đồng ý của tất cả các đối tượng trước khi thu thập các vật liệu mô chính của con người.

a) Thành lập các cơ quan ruột non của thế hệ nguyên thủy

1、 Lấy mẫu: Sử dụng ống ly tâm để thu thập mô ruột non của thế hệ ban đầu trong chất bảo vệ mô lạnh, giữ mẫu mô trong4 ° CCho đến khi bắt đầu chia lìa.

2、 Làm sạch: Chuyển mẫu mô để được trang bị làm lạnh trướcDPBSTrong đĩa petri đệm, khoang ruột hướng lên trên, một tay sử dụng kẹp một đầu mô ruột, tay kia sử dụng miếng nhẹ nhàng cạo lông tơ ruột trên bề mặt khoang ruột, sau khi lông tơ ruột được cạo sạch, đặt mô ruột vào một hàm mớiDPBSRửa trong đĩa nuôi cấy, rửa lại.2Lần sau. Phá vỡ ruột non sau khi rửa2mmRộng, chuyển sang đĩa petri mới, vớiDPBSrửa sạch2Lần lượt.

3、 Tiêu hóa: Chuyển đoạn ruột đã rửa sạch để chứa5mM / L EDTALạnh trướcDPBSTiêu hóa trung bình, đặt4℃hoặc ủ trong đá vụn20 ~ 30 phút, tiêu hóa20 phútTrái phải có thể dùng máy di dịch nhẹ nhàng thổi vào đoạn ruột, lấy kính hiển vi lên quan sát dưới, đợi đến khi xuất hiện ổ ẩn hoàn chỉnh là có thể ngừng tiêu hóa, nếu không có ổ ẩn có thể kéo dài thời gian tiêu hóa thích hợp.

4、 Rửa: Sau khi tiêu hóa hoàn tất, các mảnh mô được chuyển đến một hàm mớiDPBSRửa sạch đĩa nuôi cấy, lặp lại.2Thứ hai để loại bỏEDTA。

5、 Treo nặng: với5 mLPipette trong pre-cold0,1% BSAcủaDPBSđĩa petri hoặc50 mLthổi, treo lại các mảnh mô trong ống ly tâm, làm cho các mô liên tục đi qua đầu pipet để tạo ra lực cắt cơ học do đó làm cho các hang động tách ra khỏi lớp cơ sở, lấy một phần của kiểm tra gương treo, khi có thể nhìn thấy một số lượng lớn các cấu trúc giống như hang động, ngừng thổi, và sau khi thổi đình chỉ mô70μmLọc màn hình.

6、 Thu thập: thu thập đình chỉ mô đi qua lưới lọc,300gLực ly tâm4℃Ly tâm3 phút。

7、 Count: Bỏ qua, sử dụng1 mL 0,1% BSAcủaDPBSKết tủa mô treo nặng, lấy20μLĐình chỉ thực hiện kiểm tra gương và đếm ẩn, và sau khi đếm xong, đình chỉ có chứa lượng ẩn mong muốn được hấp thụ,300gLực ly tâm4℃Ly tâm3 phútSau khi vứt bỏ thì đặt lên băng.

8、 Kết tủa mô treo lại với lượng keo ma trận thích hợp, mật độ treo lại được khuyến nghị cho mỗi10μLMa trận Glue Suspension chứa70Đến100Một cái hang, sau khi treo nặng thì đặt trên băng, thời gian treo nặng không vượt quá.30 tuổiĐể tránh keo ma trận đông cứng quá sớm.

Lưu ý: Tỷ lệ pha loãng keo ma trận nên được tìm thấy trong70%Trên đây để đảm bảo tính ổn định cấu trúc của keo cơ bản trong quá trình bồi dưỡng.

9、 Điểm đình chỉ hỗn hợp keo ma trận và tế bào mô vào24Tấm lỗ tích cực dưới cùng, mỗi lỗ30μLTrái và phải, tránh tiếp xúc với vách bên của tấm lỗ.10.Sau khi tiêm chủng xong, bảng nuôi cấy......37℃CO2 trong môi trường nhiệt độ ổn định, ủ30 phútTrái phải đợi cơ chất keo đọng lại.

10、 Sau khi keo kết dính, chậm rãi thêm vào cơ sở nuôi cấy ruột non đã được điều chế tốt dọc theo vách tường,24Tấm lỗ Mỗi lỗ500μLTránh phá hủy cấu trúc đã đóng băng.

11、 đặt24Tấm lỗ đặt37℃Nuôi cấy trong bể nuôi cấy CO2.

12、 mỗi2~3Mỗi ngày thay thế cơ sở nuôi cấy một lần, khi thay thế cơ sở nuôi cấy nên tránh phá hủy chất keo. Theo dõi chặt chẽ tình trạng tăng trưởng của các cơ quan, lý tưởng nhất là các cơ quan ruột non của con người nên được theo dõi trong5Đến7Xây dựng trong ngày.

b) Nuôi cấy di truyền của các cơ quan ruột non của con người

1、 Đối nhân xử thế, các cơ quan ruột non được nuôi dưỡng đến đường kính.200 ~ 500μmKhi kích thước lớn (hoặc khi màu đen không còn tăng nữa), có thể tiến hành di truyền các cơ quan ruột non của con người (khoảng mỗi thế hệ)5khoảng ngày). Dùng đầu súng đã trải qua dưỡng dịch nhuận tẩy thổi cạo lấy bộ phận sinh dục, đồng thời chuyển bộ phận sinh dục và truyền dịch nuôi cấy đến bộ phận sinh dục đã trải qua dưỡng dịch nhuận tẩy1.5mLEPTrong ống.

2、 +Lĩnh vực thức ăn chăn nuôi: Nguyên liệu bổ sung thực phẩm vi chất trong chăn nuôi (5~10(Thứ hai) Làm cho các cơ quan ruột non tách ra khỏi keo nền,300gLy tâm3 phút。

3、 Bỏ cuộc, tham gia1 mLMôi trường cơ bản thổi các cơ quan một lần nữa5~10Thứ hai, lấy một ít kính huyền dịch quan sát trạng thái cơ quan:

1) Nếu các cơ quan đã bị phân tán thành các mảnh nhỏ, bạn có thể chọn thổi cơ học các cơ quan phân tán trực tiếp.300gLy tâm3 phútDùng sau ly tâm.PBShoặc làm sạch môi trường cơ bản2Lần sau.

2) Nếu nội tạng còn nguyên vẹn300gLy tâm3 phútSau đó, bỏ cuộc, tham gia.5Dịch tiêu hóa cơ quan gấp đôi thể tích hỗn hợp keo nền và ruột non, sau khi trộn đều sẽ được đặt37℃Tiêu hóa trong nuôi cấy2 phút. tham gia5Môi trường cơ bản gấp đôi thể tích dịch tiêu hóa chấm dứt tiêu hóa. Sử dụng sau ly tâmPBShoặc làm sạch môi trường cơ bản2Lần sau.

4、 Kết tủa organoid sau khi làm sạch với lượng keo ma trận thích hợp, sau khi treo nặng được đặt trên băng, thời gian treo nặng không vượt quá30 tuổiĐể tránh keo ma trận đông cứng quá sớm.

Lưu ý: Tỷ lệ pha loãng keo ma trận nên được tìm thấy trong70%Trên đây để đảm bảo tính ổn định cấu trúc của keo cơ bản trong quá trình bồi dưỡng.

5、 Điểm một hỗn hợp của keo ma trận và đình chỉ organoid vào24Tích cực dưới cùng của tấm lỗ, tránh đình chỉ tiếp xúc với tường bên của tấm lỗ, mỗi lỗ30μL左右。

Lưu ý: Để ngăn ngừa keo ma trận đông cứng ở nhiệt độ phòng, bước này nên được thực hiện càng sớm càng tốt.

6、 Sau khi tiêm chủng xong, bảng nuôi cấy......37℃CO2 trong môi trường nhiệt độ ổn định, ủ15 phútTrái phải đợi cơ chất keo đọng lại rồi lấy ra.

7、 Điều chế môi trường ruột non của con người.

8、 Sau khi keo nền đông lại, dọc theo vách lỗ thêm vào cơ sở nuôi cấy cơ quan ruột non của người đã được hâm nóng trước thời hạn,24Tấm lỗ Mỗi lỗ500μL。

9、 Đặt nền văn hóa tế bào vào37℃Nuôi cấy trong lồng nuôi cấy, theo dõi chặt chẽ tình trạng phát triển của các cơ quan ruột non của con người, mỗi3Thiên Vu chụp ảnh dưới kính hiển vi đảo ngược, ghi lại hình thái và phân bố của các cơ quan ruột non trong nhiều trường nhìn.

V2.0Phiên bản

Cập nhật thời gian:2025/6/17