Bộ nuôi cấy cơ quan khí quản của con người Plus

Bộ dụng cụ Organoid đường thở của con người Plus

Bộ nuôi cấy cơ quan khí quản của con ngườiThêm

1、 Mô tả sản phẩm

mạc đường ruột muqueuses digestives (Bộ dụng cụ Organoid đường thở của con người Plus) là một môi trường tế bào được xác định về mặt hóa học để thiết lập và duy trì các cơ quan khí quản của con người có nguồn gốc từ các tế bào gốc khí quản của con người. Sự tự đổi mới của biểu mô đường thở được thúc đẩy bởi sự tăng sinh của các tế bào gốc cơ bản. Các cơ quan khí quản của con người chứa các tế bào cơ bản, tế bào lông, tế bào tiết và một lượng nhỏ các tế bào thần kinh nội tiết, vì vậy các cơ quan thể hiện tất cả các đặc điểm của nó với biểu mô đường thở về kiến trúc, thành phần loại tế bào và động lực tự đổi mới, và do đó có tiềm năng to lớn cho việc nghiên cứu phát triển đường thở và bệnh tật.

2、 Thông tin sản phẩm

3、 Vật liệu và thuốc thử tự chế khác

4、 Hướng dẫn sử dụng môi trường khí quản của con người

1、 Sau khi nhận được môi trường nuôi cấy cơ quan, đặt môi trường nuôi cấy vào4℃Tủ lạnh được rã đông;

2、 Sau khi cơ sở nuôi cấy tan băng, trộn đều lên xuống, trong tủ an toàn sinh học hoặc trong phòng làm việc sạch sẽ, căn cứ vào nhu cầu hàng ngày, đề nghị lắp ráp thành10 mL/Ống;

3、 Môi trường sau khi đóng gói xin vui lòng niêm phong và lưu trữ trong-20℃Bạn có thể sử dụng sau khi lấy cơ sở đào tạo đã phân bố để cân bằng nhiệt độ phòng.

5、 Xây dựng và nuôi cấy các cơ quan khí quản của con người

Lưu ý: Nghiên cứu liên quan đến vật liệu mô người nguyên thủy phải tuân thủ tất cả các quy định của cơ quan và chính phủ có liên quan. Phải có sự đồng ý của tất cả các đối tượng trước khi thu thập các vật liệu mô chính của con người.

a) Thành lập các cơ quan phế quản của thế hệ trước

1、 Mẫu mô nguyên thủy phải được tách ra khỏi cơ thể.5 phútmạc đường ruột muqueuses digestives (2-8℃Trong ống mẫu, mẫu cần được bao phủ bằng chất bảo quản mô sống (nếu mẫu đã được đặt trong một bộ đệm hoặc môi trường khác, hãy thay thế toàn bộ dung dịch bằng chất bảo quản mô sống được làm lạnh trước). Nhiệt độ thấp (2~8℃) Vận chuyển đến phòng thí nghiệm.

2、 Đặt keo ma trận trước khi thử nghiệm4℃Làm tan băng trên băng, đồng thời lấy môi trường ra đặt cân bằng nhiệt độ phòng. Ống ly tâm, ống nghiệm hoặc đầu hút nhựa tiếp xúc với tế bào cần được sử dụng sau khi dùng dịch dưỡng ẩm chống dính với các cơ quan.

3、 Trong bàn làm việc sạch, mẫu được chuyển vào đĩa petri để đánh giá xem mô thu được có bao gồm biểu mô hay không. Nếu có chất béo hoặc mô cơ, hãy sử dụng dao hoặc nhíp dưới kính hiển vi giải phẫu để loại bỏ càng nhiều thành phần không biểu mô này càng tốt. Nếu không có chất béo hoặc mô cơ, hãy chuyển sang bước tiếp theo ngay lập tức.

4、 Với môi trường cơ bản của các cơ quan biểu mô hoặc với kháng képDPBSRửa sạch các mô hai lần.

5、 Sử dụng nhíp để di chuyển mô đến1,5 mlTrong ống ly tâm, trên băng với vô trùng sẽ vỡ thành0.5~2mm²Kích thước.

6、 Dùng mô cắt nhỏ50hệ thống treo nặng của khối lượng mô gấp đôi và chuyển đến15 mLBên trong ống ly tâm, thổi vào khối mô treo nặng. vào37℃，100 vòng / phútTiêu hóa dao động ngang trong máy lắc nhiệt độ không đổi trong điều kiện15-30phút, mỗi10Quan sát tình hình tiêu hóa một phút, đợi khi khối mô phân tán rõ rệt, khi huyền dịch tương đối vẩn đục, lấy một lượng vừa phải để kiểm tra kính tiêu hóa huyền dịch, đợi trong huyền dịch có nhiều nhóm tế bào sống hơn là có thể chấm dứt tiêu hóa, nếu khối mô lớn hoặc tiêu hóa không thể kéo dài thời gian tiêu hóa thích hợp. Các thông số kỹ thuật khác nhau có thể được sử dụng trong quá trình tiêu hóa (theo thứ tự từ lớn đến nhỏ như10 mL、5 mL、1 mL) Ống dẫn dịch thổi vào mô tiêu hóa huyền dịch, giúp tiêu hóa đầy đủ. Khi hầu hết các tổ chức có thể vượt qua1 mLKhi bộ di dịch hút đầu, quá trình tiêu hóa hoàn thành.

7、 đặtFBSThêm vào hỗn hợp tiêu hóa mô, nồng độ cuối cùng là2%Và sử dụng.100μmLọc tế bào.

8、 Bộ lọc được thu thập và trong4℃Dưới đây.250gLy tâm3phút. Trong trường hợp kết tủa màu đỏ có thể nhìn thấy, hút chất lỏng trên, thêm2 mLGiải pháp lysis tế bào máu đỏ treo lại kết tủa, phá vỡ các tế bào máu đỏ ở nhiệt độ phòng1phút và trong4℃Dưới đây.250gLy tâm3phút.

9、 Hấp thụ chất lỏng trong và treo lại lượng mưa trong môi trường cơ sở của các cơ quan biểu mô, trong4℃Dưới đây.250gLy tâm3phút, lặp lại bước này một lần nữa để loại bỏ dịch tiêu hóa vàFBSTrước khi ly tâm có thể tiến hành kiểm tra hoạt tính tế bào với lượng huyền dịch vừa phải.

10、 mạc đường ruột muqueuses digestives (>70%) Trộn đều trên băng (chú ý: trộn đều động tác thổi phải nhẹ nhàng, phải tránh sinh ra nhiều bọt khí, trộn đều nhiệt độ bình thường thì cần phải khống chế ở15(trong vòng vài giây), trộn đều rồi đặt lên băng. Lưu ý: Keo ma trận nên được giữ trên băng để ngăn chặn sự đông cứng của nó. Tiến hành quá trình này càng sớm càng tốt. khoảng10,000Các tế bào cần được tiêm25μLTrong chất keo. Không pha loãng keo ma trận quá mức (tỷ lệ keo ma trận nên>70%(Khối lượng keo ma trận/Tổng thể tích)), vì điều này có thể ức chế sự hình thành chính xác của các giọt rắn.

11、 Điểm huyền dịch hỗn hợp giữa keo ma trận và tế bào vào đáy của tấm nuôi cấy, sử dụng đầu súng hơi san bằng huyền dịch, chú ý tránh huyền dịch tiếp xúc với vách bên của tấm lỗ. (Khuyến nghị:96Tiêm phòng tấm lỗ3 ~ 10μLlỗ,48Tiêm phòng tấm lỗ10 ~ 20μLlỗ,24Tiêm phòng tấm lỗ20 ~ 30μLlỗ).

Lưu ý: Một khi các cơ quan được treo lại trong keo ma trận, hãy trồng càng sớm càng tốt, vì keo ma trận có thể đông cứng trong ống nghiệm hoặc đầu hút pipet.

12、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp nuôi cấy.15-25Phút, để chất keo đóng băng.

13、 Sau khi keo ma trận được đông cứng, từ từ thêm môi trường organoid cân bằng nhiệt độ phòng dọc theo tường để tránh phá hủy cấu trúc đã đông cứng. (Khuyến nghị:96Thêm bảng lỗ100μL/lỗ,48Thêm bảng lỗ250μL/lỗ,24Thêm bảng lỗ500μL/lỗ). Lưu ý: Không thêm môi trường trực tiếp lên trên cùng của các giọt keo ma trận, vì điều này có thể phá hủy cấu trúc đông máu.

14、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp bồi dưỡng nhiệt độ ổn định.

15、 Mỗi2~3Thiên thay đổi môi trường một lần, cẩn thận hút môi trường ra khỏi lỗ, và thêm môi trường hình cơ quan mới cân bằng nhiệt độ phòng.

16、 Theo dõi chặt chẽ tình trạng tăng trưởng của các cơ quan, lý tưởng nhất là các cơ quan đường thở của con người7-14Xây dựng trong ngày.

b) Văn hóa truyền thừa của các cơ quan khí quản của con người

1、 Các cơ quan được nuôi cấy đến đường kính100 ~ 500μmVới kích thước lớn (hoặc khi màu đen không còn tăng nữa), có thể tiến hành truyền thừa organoid (khoảng mỗi thế hệ)1~2tuần). Các vật liệu tiêu dùng sau đây tiếp xúc với tế bào cần được rửa sạch bằng dung dịch dưỡng ẩm:

2、 Hút môi trường cũ, thêm vào môi trường nền tảng của các cơ quan biểu mô thể tích khác, dùng dao cạo tế bào hoặc đầu hút pipet nhẹ nhàng cạo (hoặc thổi) keo ma trận và hỗn hợp các cơ quan, chuyển đến1,5 mlTrong ống ly tâm (thu thập tối đa mỗi ống)2~3Các cơ quan lỗ, tránh khối lượng quá lớn, hiệu quả tiêu hóa thấp), thổi5~10Thứ hai, tách các cơ quan và chất nền ra,300gLy tâm3phút.

3、 Loại bỏ chất lỏng thượng lưu.5Dịch tiêu hóa cơ quan gấp đôi thể tích hỗn hợp keo nền và cơ quan, sau khi trộn đều sẽ được đặt37℃Tiêu hóa trong nuôi cấy5~10phút. Lấy ra, trộn đều, lấy ra.10μLKiểm tra nội soi hỗn hợp có tiêu hóa thành khối tế bào nhỏ hay không, tiêu hóa không đầy đủ có thể kéo dài thời gian tiêu hóa thích hợp. Nếu yêu cầu số lượng tế bào, cần tiêu hóa thành một tế bào duy nhất, có thể kéo dài thời gian tiêu hóa đến10~20Sau một phút, kết thúc quá trình tiêu hóa, chờ nhuộm màu xanh để đếm tế bào. Theo dõi chặt chẽ quá trình tiêu hóa cho phép thời gian ủ trong dịch phân ly organoid ngắn nhất.

4、 Sau khi tiêu hóa xong, tham gia5Môi trường cơ sở biểu mô khối lượng gấp đôi thổi và trộn đều để chấm dứt phản ứng tiêu hóa, sau đó250gLy tâm3phút.

5、 Hấp thụ chất lỏng thượng bì, rửa sạch bằng môi trường cơ bản của các cơ quan biểu mô2Thứ hai để loại bỏ dịch tiêu hóa còn sót lại. Làm sạch thứ cấp có thể kết hợp các cơ quan và thu thập chúng trong cùng một ống ly tâm

6、 Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (>70%) Trộn đều trên băng (chú ý, trộn đều động tác thổi phải nhẹ nhàng, phải tránh sinh ra nhiều bọt khí, trộn đều nhiệt độ bình thường thì cần khống chế ở15(trong vòng vài giây), trộn đều rồi đặt lên băng. Lưu ý: Tỷ lệ pha loãng keo ma trận nên được tìm thấy trong70%Trên đây để đảm bảo tính ổn định cấu trúc của keo cơ bản trong quá trình bồi dưỡng.

7、 Điểm huyền dịch hỗn hợp giữa keo ma trận và tế bào vào đáy của tấm nuôi cấy, sử dụng đầu súng hơi san bằng huyền dịch, chú ý tránh huyền dịch tiếp xúc với vách bên của tấm lỗ. (Khuyến nghị:96Tiêm phòng tấm lỗ3 ~ 10μLlỗ,48Tiêm phòng tấm lỗ10 ~ 20μLlỗ,24Tiêm phòng tấm lỗ20 ~ 30μLlỗ). Lưu ý: Để ngăn ngừa keo ma trận đông cứng ở nhiệt độ phòng, bước này nên được thực hiện càng sớm càng tốt.

8、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp nuôi cấy.15-25Phút, để chất keo đóng băng.

9、 Sau khi keo ma trận được đông cứng, từ từ thêm môi trường organoid cân bằng nhiệt độ phòng dọc theo tường để tránh phá hủy cấu trúc đã đông cứng. (Khuyến nghị:96Thêm bảng lỗ100μL/lỗ,48Thêm bảng lỗ250μL/lỗ,24Thêm bảng lỗ500μL/lỗ). Lưu ý: Không thêm môi trường trực tiếp lên trên cùng của các giọt keo ma trận, vì điều này có thể phá hủy cấu trúc đông máu.

10、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp bồi dưỡng nhiệt độ ổn định.

11、 Mỗi2~3Thiên thay đổi môi trường một lần, cẩn thận hút môi trường ra khỏi lỗ, và thêm môi trường hình cơ quan mới cân bằng nhiệt độ phòng.

12、 Theo dõi chặt chẽ tình trạng tăng trưởng của organoid cho đến khi organoid cần thực hiện các thí nghiệm tiếp theo.

V2.1Phiên bản

Cập nhật thời gian:2025/5/27