Khuôn mẫu sinh học ung thư buồng trứng của con người Bộ nuôi cấy cơ quan

Bộ Organoid Ung thư Buồng trứng Con người

Bộ nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng người

1、 Mô tả sản phẩm

mạc đường ruột muqueuses digestives (Bộ Organoid Ung thư Buồng trứng Con người) là một môi trường tế bào được xác định hóa học để thiết lập và duy trì các cơ quan ung thư buồng trứng ở người. Các cơ quan khối u có nguồn gốc từ bệnh nhân tóm tắt các đặc điểm di truyền và bệnh lý của khối u ban đầu và do đó hứa hẹn rất lớn trong nghiên cứu y học và y học chính xác.

2、 Thông tin sản phẩm

3、 Vật liệu và thuốc thử tự chế khác

4、 Chuẩn bị môi trường nội tạng ung thư buồng trứng ở người

Vì ung thư buồng trứng có nhiều phân nhóm phân tử, việc chuẩn bị môi trường hoàn chỉnh cũng sẽ liên quan đến việc sử dụng các thành phần khác nhau tùy thuộc vào phân nhóm bệnh lý của chúng. Để chuẩn bị một môi trường hoàn chỉnh cho các cơ quan ung thư buồng trứng, điều quan trọng là phải sử dụng các kỹ thuật vô trùng. Đây là chuẩn bị10 mLVí dụ về một môi trường hoàn chỉnh. Nếu bạn cần chuẩn bị khối lượng khác nhau, hãy điều chỉnh số lượng cho phù hợp.

Do tính không đồng nhất cao của ung thư buồng trứng huyết tương, các công thức khác nhau cần được thử nghiệm và một công thức có tác dụng tăng trưởng được chọn để nuôi cấy tiếp theo. Chuẩn bị các phương tiện truyền thông đầy đủ liên quan đến việc chuẩn bị các phân nhóm của chúng theo danh sách sau.

Do tính không đồng nhất cao của ung thư buồng trứng huyết tương, các công thức khác nhau cần được thử nghiệm và một công thức có tác dụng tăng trưởng được chọn để nuôi cấy tiếp theo. Nuôi cấy hoàn chỉnh liên quan đến việc chuẩn bị các phân nhóm của chúng, theo danh sách sau

a) công thức1：

Yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngB（50 lần) Yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngC（250x) và yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngE（250x) Đặt trên băng để rã đông và trộn đều. đặt200μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngB（50 lần），40μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngC（250x) và40μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngE（250x) Tham giaSố lượng 9.72mlTrong cơ sở nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng. Trộn đều.

b) công thức2：

Yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngB（50 lần) Yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngC（250x) Yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngD（250x) và yếu tố nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứngF（2000x(Đặt trên băng tan băng. Trộn đều. đặt200μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngB（50 lần）、40μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngC（250x）、40μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngD（250x) và5μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngF（2000x) Tham gia9.715mLTrong cơ sở nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng. Trộn đều.

Lưu ý: Nếu bạn không sử dụng nó ngay lập tức, vui lòng2-8°CLưu trữ đầy đủ cơ sở nuôi cấy không vượt quá2Hàng tuần. Yếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngBthuốc nhét hậu môn suppositoires (50 lần）。

c) công thức3：

ở“công thức2”Tham gia vào môi trường nuôi dưỡng hoàn chỉnh.20μLYếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngG（500x）

Lưu ý: Môi trường nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng sau khi điều chế có thể được tìm thấy trong2-8°CLưu trữ, đề nghị sử dụng trong vòng hai tuần. Yếu tố nuôi cấy nội tạng ung thư buồng trứngB (50x)Bên trong có vi khuẩn và kháng sinh nấm.

5、 Nuôi cấy thế hệ đầu của các cơ quan ung thư buồng trứng có nguồn gốc từ bệnh nhân

Lưu ý: Các nghiên cứu liên quan đến vật liệu mô chính của con người phải tuân theo tất cả các quy định của cơ quan và chính phủ có liên quan. Phải có sự đồng ý của tất cả các đối tượng trước khi thu thập các vật liệu mô chính của con người.

a) Thành lập các cơ quan ung thư buồng trứng thế hệ đầu

1、 Các mảnh mô ung thư buồng trứng nguyên phát được thu thập bằng ống ly tâm trong dung dịch lưu trữ mô nguyên phát lạnh. Giữ mẫu mô trong4℃Cho đến khi sự chia ly bắt đầu.

2、 Đánh giá xem các mảnh mô thu được có bao gồm biểu mô hay không. Nếu có chất béo hoặc mô cơ, hãy sử dụng dao hoặc nhíp dưới kính hiển vi giải phẫu để loại bỏ càng nhiều thành phần không biểu mô này càng tốt. Nếu không có chất béo hoặc mô cơ, hãy chuyển sang bước tiếp theo ngay lập tức.

3、 với môi trường cơ bản của các cơ quan biểu mô hoặcDPBSRửa sạch các mô hai lần.

4、 Sử dụng dao hoặc cắt mô thành1-3mm³Những mảnh nhỏ, được đặt trong đĩa nuôi cấy tế bào.

5、 ở37℃Xuống dùng10 mLGiải pháp tiêu hóa mô khối u trong15 mLPhân đoạn mô tiêu hóa trong ống ly tâm, với thời gian tiêu hóa thay đổi, từ30phút đến1.5Giờ không đợi. Cẩn thận giám sát quá trình tiêu hóa, có thể thổi thích hợp để quan sát mức độ tiêu hóa. Khi hầu hết các tổ chức có thể vượt qua1 mLKhi bộ di dịch hút đầu, quá trình tiêu hóa hoàn thành.

6、 đặtFBSThêm vào hỗn hợp tiêu hóa mô, nồng độ cuối cùng là2%Và sử dụng.100μmLọc tế bào.

7、 Thu thập và in4 ° CDưới đây.250gTế bào lọc ly tâm3phút. Trong trường hợp kết tủa màu đỏ có thể nhìn thấy, hít vào chất lỏng thượng lưu và sử dụng2 mLGiải pháp lysis tế bào máu đỏ treo lại kết tủa, phá vỡ các tế bào máu đỏ ở nhiệt độ phòng1phút và trong4 ° CDưới đây.250gLy tâm3phút.

8、 Hấp thụ chất lỏng thượng thanh và treo lại lượng mưa trong môi trường cơ bản, trong4 ° CDưới đây.250gLy tâm3Phút, lặp lại bước này một lần nữa.

9、 Hấp thụ chất lỏng thượng thanh và treo lại lượng mưa trong keo ma trận. Keo ma trận nên được giữ trên băng để ngăn chặn sự đông cứng của nó. Tiến hành quá trình này càng sớm càng tốt. Lượng keo ma trận được sử dụng phụ thuộc vào kích thước của hạt. khoảng10，000Các tế bào cần được tiêm25μLTrong chất keo.

10、 Không pha loãng keo ma trận quá mức (tỷ lệ keo ma trận nên>70%(Khối lượng keo ma trận/Tổng thể tích)), vì điều này có thể ức chế sự hình thành chính xác của các giọt rắn. Đặt keo ma trận có chứa organoid trong24đáy của tấm nuôi cấy tế bào lỗ, mỗi giọt bao quanh trung tâm của lỗ khoảng30μL。

Lưu ý: Một khi các cơ quan được treo lại trong keo ma trận, hãy trồng càng sớm càng tốt, vì keo ma trận có thể đông cứng trong ống nghiệm hoặc đầu hút pipet. Đừng để các hạt ma trận chạm vào tường ống.

11、 Đặt nền văn hóa vào37°Cvà5% CO₂Trong hộp nuôi cấy.15-25Phút, để gel nền rắn lại.

12、 Chuẩn bị số lượng cần thiết của môi trường organoid ung thư buồng trứng.

13、 mạc đường ruột muqueuses digestives (15-25phút), mở tấm và cẩn thận thêm vào mỗi lỗ500μLMôi trường nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng người.

Lưu ý: Không thêm môi trường trực tiếp lên trên cùng của các giọt keo ma trận, vì điều này có thể phá hủy cấu trúc đã đông cứng.

14、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp bồi dưỡng nhiệt độ ổn định.

15、 Mỗi3-4Ngày thay đổi môi trường một lần, cẩn thận hút môi trường ra khỏi lỗ và thay thế nó bằng môi trường organoid tươi, nóng trước.

16、 Theo dõi chặt chẽ tình trạng tăng trưởng của organoid, lý tưởng nhất là các organoid ung thư buồng trứng ở người7-10Xây dựng trong ngày.

b) Nuôi cấy di truyền của các cơ quan ung thư buồng trứng ở người

1、 Dùng đầu súng đã qua dưỡng dịch nhuận tẩy thổi cạo lấy bộ phận sinh dục, cũng đem huyền dịch của bộ phận sinh dục và môi trường chuyển đến bộ phận sinh dục đã qua dưỡng dịch nhuận tẩy1,5 ml EPTrong ống.

2、 Dùng đầu thương đã trải qua dưỡng dịch nhuận tẩy dùng sức treo lại loại cơ quan đình chỉ, khiến cho loại cơ quan và chất keo phân cách.

3、 250gLực ly tâm Nhiệt độ phòng Ly tâm3 phút。

4、 Vứt bỏ, sử dụng dịch tiêu hóa cơ quan hoặc phá hủy máy móc. Để phân ly tế bào sử dụng dịch tiêu hóa organoid, đình chỉ lại dịch tiêu hóa organoid, pipet liên tục thổi lên và xuống và đặt37°Cấp cho đến khi các cơ quan phân ly. Sử dụng súng lọc cho mỗi2Cứ mỗi phút thổi lên thổi xuống.8Thứ hai, để giúp các cơ quan phân ly. Theo dõi chặt chẽ quá trình tiêu hóa cho phép thời gian ủ trong dịch phân ly organoid ngắn nhất. Trong trường hợp xảy ra sự cố máy móc, trong1,5 mlĐình chỉ cơ quan đình chỉ nặng trong môi trường cơ bản của cơ quan biểu mô. Cẩn thận hấp thụ huyền phù organoid với pipet, lên và xuống nhiều lần30Thứ hai, điều này sẽ giúp tiêu hóa.

Lưu ý: Không phân ly nhiều hơn trong chất phân ly organoid7phút, vì điều này có thể dẫn đến sự phát triển và thậm chí phá hủy các cơ quan kém hơn. Theo nguyên tắc chung, nếu đó là một hỗn hợp của các tế bào nhỏ, có thể quan sát thấy rằng10-50Một khối tế bào tạo thành, tiêu hóa đã hoàn thành.

5、 Sau khi tiêu hóa xong, dùng1 mLMôi trường cơ bản của các cơ quan biểu mô thực hiện một lần rửa, sau đó ở nhiệt độ phòng250gLy tâm3phút.

6、 Bỏ đi thanh lọc, sử dụng lượng keo ma trận thích hợp để lắng đọng các cơ quan treo lại, sau khi treo lại được đặt trên băng, thời gian treo lại không vượt quá30 tuổiĐể tránh keo ma trận đông cứng quá sớm.

Lưu ý: Tỷ lệ pha loãng keo ma trận nên được tìm thấy trong70%Trên đây để đảm bảo tính ổn định cấu trúc của keo cơ bản trong quá trình bồi dưỡng.

7、 Điểm một hỗn hợp của keo ma trận và đình chỉ organoid vào24Tích cực dưới cùng của tấm lỗ, tránh đình chỉ tiếp xúc với tường bên của tấm lỗ, mỗi lỗ30uLPhải và trái. Lưu ý: Để ngăn ngừa keo ma trận đông cứng ở nhiệt độ phòng, bước này nên được thực hiện càng sớm càng tốt.

8、 Sau khi tiêm chủng xong, bảng nuôi cấy......37℃CO2 trong môi trường nhiệt độ ổn định, ủ15 phútTrái phải đợi cơ chất keo đọng lại.

9、 Xây dựng môi trường nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng.

10、 Sau khi keo kết dính, thêm vào cơ sở nuôi cấy cơ quan ung thư buồng trứng đã được phối chế tốt,24Tấm lỗ Tham gia mỗi lỗ250uLMôi trường nuôi cấy.

11、 đặt2Tấm lỗ đặt37℃Nuôi cấy carbon dioxide trong môi trường nuôi cấy cho đến khi các cơ quan cần thử nghiệm thêm

V2.0Phiên bản

Cập nhật thời gian:2025/6/21