Môi trường nuôi cấy nội tạng đại tràng dựa trên khuôn mẫu Plus (khuếch đại)

Bộ Organoid thuộc địa của con người Plus（Mở rộng）

Bộ nuôi cấy cơ quan đại tràng của con ngườiThêm(Mở rộng)

1、 Mô tả sản phẩm

Bộ nuôi cấy cơ quan đại tràng của con người dựa trên khuôn mẫuThêm(Mở rộng)Human Colonic Organoid Kit Plus (Mở rộng) Thêm] là một môi trường dùng để khuếch đại các cơ quan đại tràng của con người, khi khuếch đại các cơ quan đại tràng của con người chủ yếu bao gồm các tế bào gốc đại tràng và các tế bào tiền thân đại tràng. Các cơ quan đại tràng tái tạo các đặc điểm của biểu mô đại tràng trong cơ thể về khả năng tự làm mới và phân biệt, cấu trúc mô, loại tế bào và chức năng, và do đó là mô hình in vitro lý tưởng cho nghiên cứu đại tràng ở người.

2、 Thông tin sản phẩm

3、 Các thuốc thử và vật tư tự chế khác

4、 Hướng dẫn sử dụng môi trường đại tràng (khuếch đại) của con người

1、 Sau khi nhận được môi trường organoid, môi trường được đặt4Tủ lạnh độ C được rã đông.

2、 Sau khi cơ sở nuôi cấy tan băng, trộn đều lên xuống, trong tủ an toàn sinh học hoặc trong phòng làm việc sạch sẽ, căn cứ vào nhu cầu hàng ngày, đề nghị lắp ráp thành10 mL/Ống.

3、 Môi trường sau khi đóng gói xin vui lòng niêm phong và lưu trữ trong-20℃Bạn có thể sử dụng sau khi lấy cơ sở đào tạo đã phân bố để cân bằng nhiệt độ phòng.

5、 Xây dựng và nuôi cấy các cơ quan đại tràng của con người

Lưu ý: Nghiên cứu liên quan đến vật liệu mô người nguyên thủy phải tuân thủ tất cả các quy định của cơ quan và chính phủ có liên quan. Phải có sự đồng ý của tất cả các đối tượng trước khi thu thập các vật liệu mô chính của con người.

a) Thành lập các cơ quan colonoid của thế hệ nguyên thủy

1、 Mẫu mô nguyên thủy phải được tách ra khỏi cơ thể.5 phútmạc đường ruột muqueuses digestives (2-8℃Trong ống mẫu, mẫu cần được bao phủ bằng chất bảo quản mô sống (nếu mẫu đã được đặt trong một bộ đệm hoặc môi trường khác, hãy thay thế toàn bộ dung dịch bằng chất bảo quản mô sống được làm lạnh trước). Nhiệt độ thấp (2~8℃) Vận chuyển đến phòng thí nghiệm.

2、 Đặt keo ma trận trước khi thử nghiệm4℃Làm tan băng trên băng, đồng thời lấy môi trường ra đặt cân bằng nhiệt độ phòng. Ống ly tâm, ống nghiệm hoặc đầu hút nhựa tiếp xúc với tế bào cần được sử dụng sau khi dùng dịch dưỡng ẩm chống dính với các cơ quan.

3、 Trong bàn làm việc sạch, mẫu được chuyển vào đĩa petri để đánh giá xem mô thu được có bao gồm biểu mô hay không. Nếu có chất béo hoặc mô cơ, hãy sử dụng dao hoặc nhíp dưới kính hiển vi giải phẫu để loại bỏ càng nhiều thành phần không biểu mô này càng tốt. Nếu không có chất béo hoặc mô cơ, hãy chuyển sang bước tiếp theo ngay lập tức.

4、 Chuyển các mẫu mô được trang bị kháng kép chứa trước khi làm mátDPBSTrong đĩa nuôi cấy, khoang ruột hướng lên trên, một tay dùng kẹp một đầu mô ruột, tay kia dùng miếng nhẹ nhàng cạo đi chất nhầy hoặc phân còn sót lại trên bề mặt khoang ruột, sau đó đặt mô ruột kết vào một ổ kháng sinh mới.DPBSRửa trong đĩa nuôi cấy.2-3Lần sau. Làm sạch ruột vỡ đến khoảng2mm * 5mmKích thước, sau đó chuyển sang50 mLTrong ống ly tâm, chấn động dữ dội.30s(Chấn động lên xuống dọc20Một lần nữa, hẹnSố 1Ba lần)Bỏ qua, lặp lại.3Lần sau.

5、 Tiêu hóa: Tham gia30mlcủaDPBSThêm vào giải pháp300 μL 0,5 M EDTAĐếnEDTANồng độ cuối cùng là5 mM.Đặt4℃Trên giường lắc,80 vòng / phút, tiêu hóa20 ~ 30 phút(Tùy thuộc vào kích thước mẫu, có thể được tiêu hóa)20Quan sát tình trạng tiêu hóa dưới gương sau khi thổi và trộn đều trong vài phút, nếu quan sát thấy cấu trúc ẩn hoàn chỉnh thì có thể tiến hành thao tác tiếp theo).

6、 Tẩy rửa: Sau khi tiêu hóa hoàn thành, yên lặng đợi đoạn ruột lắng đọng, vứt bỏ. Thêm vào Pre-coldDPBSNhẹ nhàng lắc đều, để yên rồi vứt đi, lặp lại.2Thứ hai để loại bỏEDTA。

7、 Đang xem mục từ: join30mlPre-lạnh bao gồm0,1% BSAcủaDPBSVòng xoáy.10 phútLấy đi.100μmLọc màn hình, bộ sưu tập đình chỉ mô đi qua lưới lọc, bộ sưu tập lặp lại2Lần sau.

8、 Bộ sưu tập:300gLực ly tâm4℃Ly tâm3 phút。

9、 Hấp thụ chất lỏng trong và treo lại chất lắng đọng trong cơ sở nuôi cấy cơ quan biểu mô, lấy chất lỏng để đếm số lượng ẩn.

10、 300gLực ly tâm4℃Ly tâm3 phútThiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (>70%) Trộn đều trên băng (chú ý: trộn đều động tác thổi phải nhẹ nhàng, phải tránh sinh ra nhiều bọt khí, trộn đều nhiệt độ bình thường thì cần phải khống chế ở15(trong vòng vài giây), trộn đều rồi đặt lên băng. Lưu ý: Keo ma trận nên được giữ trên băng để ngăn chặn sự đông cứng của nó. Tiến hành quá trình này càng sớm càng tốt. khoảng50Một cái hang nên được cấy vào.25μLTrong chất keo. Không pha loãng keo ma trận quá mức (tỷ lệ keo ma trận nên>70%(Khối lượng keo ma trận/Tổng thể tích)), vì điều này có thể ức chế sự hình thành chính xác của các giọt rắn.

11、 Điểm huyền dịch hỗn hợp giữa keo ma trận và tế bào vào đáy của tấm nuôi cấy, sử dụng đầu súng hơi san bằng huyền dịch, chú ý tránh huyền dịch tiếp xúc với vách bên của tấm lỗ. (Khuyến nghị:96Tiêm phòng tấm lỗ3 ~ 10μLlỗ,48Tiêm phòng tấm lỗ10 ~ 20μLlỗ,24Tiêm phòng tấm lỗ20 ~ 30μLlỗ).

12、 Lưu ý: Một khi các cơ quan được treo lại trong keo ma trận, hãy trồng càng sớm càng tốt, vì keo ma trận có thể đông cứng trong ống nghiệm hoặc đầu hút pipet.

13、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp nuôi cấy.15-25Phút, để chất keo đóng băng.

14、 Sau khi keo ma trận được đông cứng, từ từ thêm môi trường organoid cân bằng nhiệt độ phòng dọc theo tường để tránh phá hủy cấu trúc đã đông cứng. (Khuyến nghị:96Thêm bảng lỗ100μL/lỗ,48Thêm bảng lỗ250μL/lỗ,24Thêm bảng lỗ500μL/lỗ). Lưu ý: Không thêm môi trường trực tiếp lên trên cùng của các giọt keo ma trận, vì điều này có thể phá hủy cấu trúc đông máu.

15、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp bồi dưỡng nhiệt độ ổn định.

16、 Mỗi2~3Thiên thay đổi môi trường một lần, cẩn thận hút môi trường ra khỏi lỗ, và thêm môi trường hình cơ quan mới cân bằng nhiệt độ phòng.

17、 Theo dõi chặt chẽ tình trạng tăng trưởng của các cơ quan.

b) Nuôi cấy di truyền của các cơ quan đại tràng của con người

1、 Các cơ quan được nuôi cấy đến đường kính600μmVới kích thước lớn (hoặc khi màu đen không còn tăng nữa), có thể tiến hành truyền thừa organoid (khoảng mỗi thế hệ)1tuần). Các vật liệu tiêu dùng sau đây tiếp xúc với tế bào cần được rửa sạch bằng dung dịch dưỡng ẩm:

2、 Hút môi trường cũ, thêm vào môi trường nền tảng của các cơ quan biểu mô thể tích khác, dùng dao cạo tế bào hoặc đầu hút pipet nhẹ nhàng cạo (hoặc thổi) keo ma trận và hỗn hợp các cơ quan, chuyển đến1,5 mlTrong ống ly tâm (thu thập tối đa mỗi ống)2~3Các cơ quan lỗ, tránh khối lượng quá lớn, hiệu quả tiêu hóa thấp), thổi5~10Thứ hai, tách các cơ quan và chất nền ra,300gLy tâm3phút.

3、 Loại bỏ chất lỏng thượng lưu.5Dịch tiêu hóa cơ quan gấp đôi thể tích hỗn hợp keo nền và cơ quan, sau khi trộn đều sẽ được đặt37℃Tiêu hóa trong nuôi cấy3phút. Lấy ra, trộn đều, lấy ra.10μLXét nghiệm nội soi hỗn hợp có tiêu hóa thành không?300μmKhối cơ quan trái phải.

Lưu ý: Một trong những bước của kết tủa treo lại cần phải kiểm soát cường độ thổi và số lần, là các khối cơ quan được kiểm soát trong kích thước300μm左右。

4、 Sau khi tiêu hóa xong, tham gia5Môi trường cơ bản của các cơ quan biểu mô khối lượng gấp đôi thổi nhẹ và trộn đều để chấm dứt phản ứng tiêu hóa, sau đó250gLy tâm3phút.

5、 Hấp thụ chất lỏng thượng bì, rửa sạch bằng môi trường cơ bản của các cơ quan biểu mô2Thứ hai để loại bỏ dịch tiêu hóa còn sót lại. Việc làm sạch thứ cấp có thể kết hợp các cơ quan và thu thập chúng trong cùng một ống ly tâm.

6、 Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (>70%) Trộn đều trên băng (chú ý, trộn đều động tác thổi phải nhẹ nhàng, phải tránh sinh ra nhiều bọt khí, trộn đều nhiệt độ bình thường thì cần khống chế ở15(trong vòng vài giây), trộn đều rồi đặt lên băng. Lưu ý: Tỷ lệ pha loãng keo ma trận nên được tìm thấy trong70%Trên đây để đảm bảo tính ổn định cấu trúc của keo cơ bản trong quá trình bồi dưỡng.

7、 Điểm huyền dịch hỗn hợp giữa keo ma trận và tế bào vào đáy của tấm nuôi cấy, sử dụng đầu súng hơi san bằng huyền dịch, chú ý tránh huyền dịch tiếp xúc với vách bên của tấm lỗ. (Khuyến nghị:96Tiêm phòng tấm lỗ3 ~ 10μLlỗ,48Tiêm phòng tấm lỗ10 ~ 20μLlỗ,24Tiêm phòng tấm lỗ20 ~ 30μLlỗ). khoảng50Một khối cơ quan được cấy vào.25μLTrong chất keo. Lưu ý: Để ngăn ngừa keo ma trận đông cứng ở nhiệt độ phòng, bước này nên được thực hiện càng sớm càng tốt.

8、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp nuôi cấy.15-25Phút, để chất keo đóng băng.

9、 Sau khi keo ma trận được đông cứng, từ từ thêm môi trường organoid cân bằng nhiệt độ phòng dọc theo tường để tránh phá hủy cấu trúc đã đông cứng. (Khuyến nghị:96Thêm bảng lỗ100μL/lỗ,48Thêm bảng lỗ250μL/lỗ,24Thêm bảng lỗ500μL/lỗ). Lưu ý: Không thêm môi trường trực tiếp lên trên cùng của các giọt keo ma trận, vì điều này có thể phá hủy cấu trúc đông máu.

10、 Đặt nền văn hóa vào37℃và5% CO₂Trong hộp bồi dưỡng nhiệt độ ổn định.

11、 Mỗi2~3Thiên thay đổi môi trường một lần, cẩn thận hút môi trường ra khỏi lỗ, và thêm môi trường hình cơ quan mới cân bằng nhiệt độ phòng.

12、 Tình trạng tăng trưởng của organoid được theo dõi chặt chẽ cho đến khi các organoid cần tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.

V2.0Phiên bản

Cập nhật thời gian:2025/6/12