Phát hiện lai tại chỗ

Có thể đàm phánCập nhật vào05/06

Mô hình

Thiên nhiên của nhà sản xuất: Nhà sản xuất

Danh mục sản phẩm

Nơi xuất xứ

Tư vấn trực tuyến

Tổng quan

Nguyên tắc cơ bản của phát hiện lai tại chỗ là sử dụng trình tự cơ bản bổ sung giữa các sợi đơn của phân tử axit nucleic, ghép nối axit nucleic ngoại sinh có phóng xạ hoặc không phóng xạ (tức là đầu dò) với DNA hoặc RNA được đo trên mô, tế bào hoặc nhiễm sắc thể, kết hợp thành một phân tử lai axit nucleic chuyên dụng, qua một số phương tiện phát hiện nhất định sẽ hiển thị vị trí của axit nucleic được đo trên mô, tế bào hoặc nhiễm sắc thể.

Chi tiết sản phẩm

Phương pháp và các bước thử nghiệm FISH

Một. Đầu dò biến tính

Đặt đầu dò trong bồn tắm nước nhiệt độ không đổi 75oC trong 5 phút, ngay lập tức đặt 0oC, 5~10 phút, làm cho đầu dò DNA sợi đôi biến tính.

Hai. Biến tính mẫu

① Các mẫu vật trượt chuẩn bị 5-8um được nướng trong bể 50oC trong 2-3 giờ. (Mẫu vật được nhuộm Giemsa cần được nướng trước khi phai màu trong dung dịch cố định).

② Lấy mẫu vật trượt và ngâm nó trong dung dịch biến tính 70% formamide/2 × SSC với phân số thể tích 70~75oC làm biến tính 2~3 phút.

③ Ngay lập tức, theo thứ tự, mẫu vật được khử nước theo phân số thể tích 70%, phân số thể tích 90% và chuỗi ethanol băng 100% thể tích, mỗi lần 5 phút, sau đó không khí khô.

Ba. Việt

Đầu dò DNA đã bị biến tính hoặc được ủ trước 10μL được nhỏ giọt trên mẫu vật trượt đã bị biến tính và mất nước, được phủ bằng nắp trượt 18 × 18, được đóng gói bằng Parafilm và được đặt trong một hộp tối ẩm ướt để lai 37oC qua đêm (khoảng 15~17h). Do có ít chất lỏng lai hơn và nhiệt độ lai cao hơn và kéo dài, quá trình này được thực hiện trong một hộp ướt để duy trì trạng thái ẩm của mẫu vật.

Bốn. Trang chủ

Bước này giúp loại bỏ các đầu dò liên kết không cụ thể, do đó làm giảm cơ sở.

(1) Ngày hôm sau, mẫu vật được lấy ra khỏi hộp nhiệt độ 37oC, nhẹ nhàng tháo nắp bằng lưỡi dao.

(2) Mẫu vật trượt lai được đặt trong phân số thể tích 50% formamide/2 × SSC đã được làm nóng trước 42~50oC để rửa 3 lần, mỗi lần 5 phút.

(3) Rửa 3 lần trong 1 × SSC đã được làm nóng trước 42~50oC, mỗi lần 5 phút.

(4) Ở nhiệt độ phòng, mẫu vật trượt được rửa nhẹ trong 2 × SSC.

(5) Lấy miếng trượt ra và sấy khô tự nhiên.

(6) Lấy 200 μL dung dịch nhuộm phức tạp (PI/antifade hoặc DAPI/antifade nhuộm) và thêm vào mẫu vật trượt, đậy nắp.

Năm. Kính hiển vi huỳnh quang quan sát kết quả FISH

Sản phẩm tương tự Khuyến nghị