Fluo-8 AM Bộ xét nghiệm dòng canxi miễn phí tế bào

Có thể đàm phánCập nhật vào05/06

Mô hình

Thiên nhiên của nhà sản xuất: Nhà sản xuất

Danh mục sản phẩm

Nơi xuất xứ

Tư vấn trực tuyến

Tổng quan

Fluo-8 AM Bộ phát hiện dòng canxi tế bào miễn phí $r $n Nhiều phản ứng sinh học quan trọng trong tế bào liên quan đến dòng canxi. Phát hiện sự thay đổi dòng canxi tức thời trong tế bào là rất quan trọng đối với nghiên cứu phản ứng sinh học nội bào và nghiên cứu phát triển thuốc nhắm mục tiêu. Phương pháp nhuộm huỳnh quang kết hợp đặc hiệu canxi là phương pháp thường được sử dụng để phát hiện dòng canxi trong tế bào.

Chi tiết sản phẩm

Tổng quan

mô tả

Phát hiện sự thay đổi dòng canxi tức thời trong tế bào là rất quan trọng đối với nghiên cứu phản ứng sinh học nội bào và nghiên cứu phát triển thuốc nhắm mục tiêu. Phương pháp nhuộm huỳnh quang liên kết đặc hiệu canxi là phương pháp phổ biến để phát hiện dòng canxi trong tế bào. Fluo-8 AM cải thiện khả năng nạp tế bào và đáp ứng canxi như một thuốc nhuộm phát hiện dòng canxi thế hệ mới, là thuốc nhuộm huỳnh quang gắn kết đặc hiệu canxi mạnh mẽ hiện nay của zui, với huỳnh quang sáng gấp đôi so với Fluo-4 AM và sáng hơn bốn lần so với Fluo-3 AM. Lời bài hát: Love Will BelieveFluo-8 AM Bộ xét nghiệm dòng canxi miễn phí tế bàoKhông cần rửa tế bào và loại bỏ thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 khi phát hiện dòng canxi và nạp tế bào Fluo-8, đơn giản hóa quá trình thử nghiệm và đặc biệt phù hợp với các thí nghiệm sàng lọc thông lượng cao cho các hợp chất.

Thành phần sản phẩm

Fluo-8 AM Bộ xét nghiệm dòng canxi miễn phí tế bàoCác thành phần và thông số kỹ thuật như sau. Khuyến nghị sử dụng thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 96 - 100 μL mỗi lỗ cho tấm lỗ và 25 μL mỗi lỗ cho tấm 384 - lỗ. 96T, 960T và 9600T có thể thực hiện các thí nghiệm với 1, 10 và 100 tấm 96 hoặc 384 lỗ tương ứng.

Thành phần	96T	960T	9600T
Bộ đệm tải Fluo-8	10 mL	100ml	10 × 100ml
Fluo-8 AM (400x)	25μL	250μL	10 × 250μL
Thuốc thử QF (10x)	1 mL	10 mL	10 × 10ml

Cách sử dụng

1. Căn cứ vào nhu cầu thí nghiệm, tế bào được cấy vào đáy 96 - lỗ hoặc 384 - lỗ, nồng độ huyết thanh của tế bào nuôi cấy không vượt quá 10%. Theo thí nghiệm cần 37 ℃ 5% CO2Hộp ấp nở một thời gian nhất định.
2, Lấy bộ đệm nạp Fluo-8 và thuốc thử QF (10x), cân bằng đến nhiệt độ phòng và trộn đều.
Lấy Fluo-8 AM ra, hòa tan ở nhiệt độ phòng, thu thập nội dung ly tâm ở đáy ống và đặt trên băng. Nếu Fluo-8 AM không phải là một lần sử dụng hết, nó nên được tách ra, -20 ℃ bảo quản tránh ánh sáng, tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại.
4, Số lượng thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 cần thiết được tính theo lượng thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 cho mỗi lỗ và môi trường trong lỗ, v.v.
Thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 được pha loãng theo 10 lần để thêm vào bộ đệm nạp Fluo-8, ví dụ thuốc thử 1mL 10x QF được thêm vào bộ đệm nạp Fluo-8 9mL, trộn đều. Fluo-8 AM là 400X, thêm bộ đệm nạp Fluo-8 (bao gồm 1x QF) theo công thức trên theo 1X, đây là thuốc thử nạp tế bào Fluo-8.
Một số tế bào, chẳng hạn như tế bào CHO, cần thêm propionesulfonshu (Probenecid, CAS: 57-66-9) vào thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 để ngăn chặn sự vận chuyển của tế bào Fluo-8 ra khỏi tế bào. Propione-shu được cung cấp bởi chính khách hàng và nồng độ propione-shu cuối cùng được khuyến nghị để thêm thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 là 2,5mM. Đối với các tế bào khác nhau, nồng độ tối ưu có thể cần được tối ưu hóa.
Propionesulfone-shu công thức:Được pha loãng thành 250 mM với bộ đệm 1X HBSS trước khi sử dụng, nó được thêm vào thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 ở nồng độ 2,5 mM. (Bộ đệm HBSS được cung cấp bởi chính khách hàng với công thức 20 mM HEPES buffer pH7,4+1X Hank's Balanced Salt Solution, pH 7,4).
7, Phương pháp tiêu chuẩn phát hiện: Thêm và nuôi cấy tế bào trong môi trường lỗ và khối lượng khác của thuốc thử nạp tế bào Fluo-8, chẳng hạn như 96-lỗ môi trường 100 μL mỗi lỗ môi trường thêm 100 μL Fluo-8 tế bào nạp thuốc thử.
（Phương pháp phát hiện tùy chọn:Môi trường chứa 10% FBS có thể làm giảm giá trị đọc và tăng nền, có thể loại bỏ môi trường trong lỗ, trộn thuốc thử nạp tế bào Fluo-8 (bước 5 và 6 công thức) và bộ đệm HBSS theo tỷ lệ 1: 1, thêm thử nghiệm hỗn hợp này tương đương với 2 lần môi trường gốc thể tích. Hoặc nuôi cấy tế bào bằng môi trường FBS nồng độ thấp, được phát hiện theo phương pháp tiêu chuẩn Bước 7.)
8,37 độ C ấp trứng 1 giờ. Nhiệt độ ủ cụ thể (ví dụ: nhiệt độ phòng hoặc 37 ° C) và thời gian (0,5 giờ đến 2 giờ trở lên) cần được tối ưu hóa theo các thí nghiệm cụ thể.
9, Thực hiện kiểm tra dòng canxi nội bào: theo nhu cầu thí nghiệm và thiết bị kiểm tra để thiết lập các thông số phát hiện, thêm hợp chất thử nghiệm, đọc dưới cùng để phát hiện cường độ huỳnh quang. Các thiết bị kiểm tra bao gồm FlexStation, FLIPR (Molecular Devices). FlexStation 3 đọc huỳnh quang với Ex/Em=485/525 nm.

Hiệu suất

Phương pháp lưu trữ/bảo quản

Bảo quản tránh ánh sáng ở nhiệt độ -20 ℃ hoặc thấp hơn sau khi bộ dụng cụ nhận được. Bộ đệm nạp Fluo-8 và thuốc thử QF (10x) có thể được bảo quản tránh ánh sáng ở 4 ℃ 1 tháng sau khi sử dụng ban đầu, Fluo-8 AM nên được bảo quản tránh ánh sáng ở -20 ℃ hoặc nhiệt độ thấp hơn, bảo quản lâu dài (>1 tháng), đề nghị bảo quản ở -80 ℃.

Lưu ý

1. Các đợt khác nhau không đề nghị sử dụng lẫn nhau.
2. Không có bằng chứng kinh nghiệm, không đề nghị thay đổi lượng thuốc thử.

Sơ đồ kết quả thí nghiệm

Các tế bào HeLa được tiêm vào một tấm đen 96 lỗ với mật độ 4 × 105Tế bào/ml. Các tế bào được lơ lửng trong dung dịch nuôi cấy Hank với 1% huyết thanh bò thai (FBS). Sau khi các tế bào được dán vào tường, môi trường được thay thế bằng bộ đệm tải Fluo-8, 50 microliters mỗi lỗ. Ủ các tế bào ở 37 độ C trong 1 giờ. Loại bỏ bộ đệm tải, thêm thuốc thử phát hiện, 100 microliters mỗi lỗ. Tín hiệu canxi được phát hiện trên máy đo enzyme FlexStation 3 trong khi một loạt các chất chủ vận pha loãng được thêm vào. Ghi lại giá trị huỳnh quang trước và sau khi kích thích chất chủ vận (ánh sáng kích thích/ánh sáng phát xạ=485/525 nanomet) và tính toán một nửa nồng độ hiệu quả của chất chủ vận (EC50) (kết quả phù hợp với dữ liệu báo cáo).

Gợi ý ấm áp: Sản phẩm này chỉ được sử dụng cho các thí nghiệm khoa học, không hỗ trợ nghiên cứu lâm sàng và các nghiên cứu khác

Sản phẩm tương tự Khuyến nghị