DH5 aλpir tế bào cảm nhận *

DH5 aλpir tế bào cảm nhận *

Tên sản phẩm: DH5αλpir Chemical Competent Cell
Mã sản phẩm: G6018-10 (10 chiếc 100ul), G6018-100 (100 chiếc 100ul)
Thông số kỹ thuật/Giới thiệu: G6018-10 (10 chiếc 100ul), G6018-100 (100 chiếc 100ul)

Kiểu gen

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

Mô tả ngắn gọn |

Dòng CLBio DH5a vào pir có nguồn gốc từ DH5a và LAMpir, được gọi là DH5a vào pir, được giới thiệu trong bộ gen của E. coli DH5a, dòng này có thể biểu hiện protein PIR, cho phép các plasmid chứa R6Kg orireplicator nhân đôi bình thường trong đó. Các chủng DH5a pir bị thiếu nucleolactase (endA), làm tăng sản lượng và chất lượng của DNA plasmid; Loại khiếm khuyết enzyme tái tổ hợp (recA) làm giảm xác suất tái tổ hợp tương đồng của các mảnh chèn, đảm bảo sự ổn định của DNA chèn; Sự hiện diện của lacZOM15 làm cho DH5a có sẵn để sàng lọc đốm xanh, trắng; Nhưng các chủng DH5a vào pir phát triển chậm hơn và nên kéo dài thời gian phát triển khi nuôi cấy bằng phẳng hoặc lắc lỏng. Các tế bào thụ thể CLBio DH5aλpir được tạo ra bằng một quy trình đặc biệt với hiệu suất chuyển đổi>1X109 cfu/μg DNA.

Hướng dẫn vận hành:

Các tế bào thụ thể DH5aλpir được lấy ra từ -80 ° C và nhanh chóng được đưa vào băng, 5 phút sau khi khối vi khuẩn tan chảy, thêm DNA mục tiêu (plasmid hoặc sản phẩm kết nối) và trộn đều bằng tay vào đáy ống EP, để trong băng 25 phút.

2.42*C Tắm nước nóng trong 45 giây, nhanh chóng đặt lại băng. Lên và để yên 2 phút, lắc lư sẽ làm giảm hiệu suất chuyển hóa.

3. Thêm 700 μ1 môi trường LB vô trùng không có kháng sinh vào ống ly tâm, sau khi trộn đều 37 ° C, phục hồi 200 vòng/phút trong 70 phút.

5.000 vòng/phút ly tâm 1 phút thu thập nấm, để lại khoảng 100 μl thanh lọc nhẹ nhàng thổi khối vi khuẩn nặng và bôi lên môi trường LB có chứa kháng sinh tương ứng.

5. Đặt tấm ngược lên tủ nuôi cấy 37 ° C trong ít nhất 18 giờ.

Lưu ý：

1. Tế bào cảm nhậnđề nghịChậm rãi tan chảy trong băng. Thêm DNA mục tiêu trong vòng 8 phút vào băng, không thể để quá lâu trong băng, lưu trữ lâu sẽ làm giảm hiệu quả chuyển đổi.

2. Các chủng DH5aλpir phát triển chậm và nên kéo dài thời gian phát triển của vi khuẩn (37 ° C, hơn 18 giờ) khi nuôi cấy trên một tấm phẳng hoặc lắc lỏng.

3. Chuyển đổi nồng độ plasmid cao hoặc các sản phẩm kết nối hiệu quả cao có thể làm giảm lượng vi khuẩn cuối cùng được sử dụng cho tấm phủ tương ứng.

DH5 aλpir tế bào cảm nhận *