RT SuperMix tất cả trong một cho qPCR 试剂

Điều kiện lưu trữ và vận chuyển

-20℃

Thành phần sản phẩm

RT SuperMix tất cả trong một cho qPCR 试剂

Giới thiệu sản phẩm

All-in-One RT SuperMix for qPCR (với dsDNase) là bộ dụng cụ tổng hợp chuỗi cDNA chất lượng cao, dễ dàng và giảm ô nhiễm, chứa tất cả các thành phần cần thiết để tổng hợp chuỗi cDNA như M-MLV GIIIReverse Transcriptase và phản ứng của nó Buffer, chất ức chế enzyme RNA, dNTPs, Oligo (dT) 20VN và mồi ngẫu nhiên để bắt đầu phản ứng chỉ bằng cách thêm mẫu RNA và nước. All-in-One RT SuperMix for qPCR (withdsDNase) là một bộ tổng hợp chuỗi cDNA được nâng cấp, có thể thu được tối đa 12 kb cDNA trong 15 phút, với các sản phẩm có thể được sử dụng trong các thí nghiệm như qPCR, PCR thông thường, v.v. RNA chiết xuất từ mô hoặc tế bào có xu hướng bị ô nhiễm DNA bộ gen còn sót lại, và nếu quá trình loại bỏ không được thực hiện trước khi phiên mã ngược, DNA bộ gen và cDNA sẽ được khuếch đại đồng thời khi phản ứng qPCR được thực hiện ở hạ lưu, đặc biệt là khi mồi được thiết kế trên cùng một exon, ảnh hưởng đến độ chính xác định lượng. DSDNase được sử dụng trong bộ dụng cụ này có khả năng tiêu hóa cụ thể DNA trong chuỗi kép hoặc DNA trong chuỗi kép hỗn hợp DNARNA và nhạy cảm với nhiệt, có thể bị vô hiệu hóa nhanh chóng và không thể đảo ngược ở nhiệt độ phản ứng sao chép ngược. So với các phương pháp truyền thống cho phép DNase I loại bỏ ô nhiễm DNA bộ gen, dsDNase không cần thêm EDTA để vô hiệu hóa, không chỉ tiết kiệm thời gian thử nghiệm mà còn giảm ức chế phản ứng sao chép ngược. Có thể căn cứ vào mức độ nghiêm trọng của ô nhiễm DNA bộ gen, lựa chọn phương pháp thao tác tiến hành tách biệt giữa ô nhiễm DNA bộ gen và phiên mã ngược, hoặc là phương pháp thao tác tiến hành một bước giữa ô nhiễm DNA bộ gen và phiên mã ngược.

Cách sử dụng

Đối với các mẫu RNA có hàm lượng DNA thấp trong bộ gen (sơ đồ khuyến nghị)

RT SuperMix tất cả trong một cho qPCR 试剂

① Hệ thống phản ứng được điều chế trên băng như sau:

a. Khuyến cáo sử dụng RNA chất lượng cao chiết xuất từ bộ dụng cụ làm mẫu.

b) Nhẹ nhàng hấp trộn đều, trong nháy mắt;

③ Nhiệt độ 37 ℃ 2 phút để loại bỏ ô nhiễm DNA di truyền;

Nhiệt độ 55 độ C 15 phút;

⑤ Sau khi kết thúc phản ứng, nhiệt độ 85 ℃ 2 phút để chấm dứt phản ứng;

⑥ Nhanh chóng đặt cDNA thu được trên băng để sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo; Hoặc bảo quản ngay lập tức ở -20 ℃.

Đối với các mẫu RNA có hàm lượng DNA cao

1. Loại bỏ ô nhiễm DNA di truyền

① Hệ thống phản ứng được điều chế trên băng như sau:

a. Khuyến nghị sử dụng RNA chiết xuất từ bộ dụng cụ làm khuôn mẫu.

b) Nhẹ nhàng hấp trộn đều, trong nháy mắt;

③ Nhiệt độ 37 ℃ 2 phút để loại bỏ ô nhiễm DNA di truyền;

Lưu ý: Nếu DNA trong RNA bị ô nhiễm nghiêm trọng, có thể kéo dài thời gian ấm lên 37 ° C đến 5 phút.

Nhiệt độ 65 ℃ trong 2 phút, dsDNase bị vô hiệu hóa, sau đó đặt trên băng.

2. Tổng hợp cDNA sợi đầu tiên

① Hệ thống phản ứng được điều chế trên băng như sau:

b) Nhẹ nhàng hấp trộn đều, trong nháy mắt;

Nhiệt độ 50 độ C 15 phút;

Lưu ý: Nếu RNA mục tiêu không chứa cấu trúc Poly (A), có thể được ủ ấm trước 25 ° C trong 10 phút.

④ Sau khi kết thúc phản ứng, nhiệt độ 85 ℃ trong 2 phút để chấm dứt phản ứng;

⑤ Dung dịch cDNA thu được được đặt trên băng để sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo.

Lưu ý: dung dịch cDNA được lưu trữ ở -20 ℃, khuyến cáo không quá 1 tuần; Ở -80 ℃ có thể lưu trữ lâu dài.

Lưu ý

Trong dung dịch tiền hỗn hợp đã chứa Oligo (dT) 20VN và mồi ngẫu nhiên, không chỉ cho mRNA sinh vật nhân chuẩn có chứa cấu trúc Poly (A), mà còn cho các mẫu như RNA sinh vật nhân sơ, rRNA sinh vật nhân chuẩn và tRNA không có cấu trúc Poly (A), nhưng không phải cho các mẫu RNA nhỏ như miRNA.

Được thành lập vào năm 2004, công ty Azaood của Mỹ là nhà phát triển và sản xuất enzyme tinh khiết chất lượng cao, protein, axit nucleic và bộ tách tế bào, huyết thanh bò thai cho nghiên cứu khoa học đời sống, chẩn đoán và ứng dụng công nghệ sinh học; Công ty Azuod là nhà sản xuất chính được chứng nhận ISO9001, có thể đáp ứng các yêu cầu và ứng dụng từ nghiên cứu đến xử lý sinh học hàng loạt quy mô lớn và OEM.