Kiểm tra độc tính tế bào trong ống nghiệm dương tính

thểKiểm tra độc tính tế bào bên ngoài dương tínhbởiViện nghiên cứu Hatano (HRI)Sản xuất nghiên cứu，Được sử dụng rộng rãi trong thí nghiệm độc tế bào in vitro, có thể đáp ứng dược điển Trung Quốc-Phương pháp kiểm tra độc tính tế bào,Tiêu chuẩn ISO 10993vàYBB 00012003Yêu cầu tham số của phương pháp kiểm tra độc tính tế bào.

Kiểm tra độc tính tế bào trong ống nghiệm dương tínhSử dụng môi trường thông thường để ngâm tẩm. Phương pháp nhúng như sau: hoạt động vô trùng, lấyTừ 1gKiểm tra độc tính tế bào trong ống nghiệm dương tínhĐặt trong15 mLTrong ống ly tâm vô trùng, theo3 mL / gTỷ lệ ngâm tẩm thêm vào môi trường ngâm tẩm, đặt dao động ngang,120 vòng / phút，37Ngâm trong điều kiện ℃24 giờSau khi ngâm xong, trộn đều lên xuống.10Thứ hai, lấy dịch ngâm để thử nghiệm. Cơ sở bồi dưỡng mà Ngâm Đề sử dụng làm đối chiếu trống. Hãy chú ý đến môi trường được xây dựng tốt.4Lưu trữ trong điều kiện nhiệt độ C không quá hai tuần. Xét nghiệm độc tính tế bào trong ống nghiệm.MTTPhương pháp kiểm tra: Lấy tình trạng tốtL929tế bào, ly tâm tiêu hóa, xây dựng đình chỉ nguyên bào, tiêm chủng vào96Tấm nuôi cấy lỗ. Mỗi nhóm thiết lập nhiều lỗ lặp, mỗi lỗ được tiêm100µLtế bào, đặt37℃、5%của CO2CO2Trồng trọt24 giờBỏ nền tảng ban đầu, tham gia.100µLChất lỏng nhúng, chất lỏng kiểm soát trống, trongCO2Tủ nuôi cấy tiếp tục bồi dưỡng.24 giờSau đó, quan sát hình thái tế bào dưới kính hiển vi. Bỏ chất lỏng bên trong lỗ và thêm vào mỗi lỗ50µL1mg / mlVô trùng.MTTPhương trình (MTTdùngMEMmôi trường vô cơ", [13; 14].2 giờSau khi bỏ chất lỏng trong lỗ, thêm vào.100µLRượu isopropyl, dao động trộn đều, trongTừ 570nmvà650nmĐộ hấp thụ được xác định ở bước sóng và tỷ lệ sống sót của tế bào được tính toán.

Thử nghiệm độc tế bào là việc sử dụng phương pháp nuôi cấy tế bào trong ống nghiệm để đánh giá độc tính tế bào tiềm ẩn của vật liệu sinh học và thiết bị y tế hoặc dịch ngâm tẩm, là một trong những chỉ số xác định quan trọng trong hệ thống đánh giá sinh học của vật liệu sinh học và là một dự án mà các thiết bị y tế và vật liệu sinh học phải được thử nghiệm cho hầu hết các mục đích sử dụng. Xét nghiệm độc tính tế bào có thể kiểm tra tác động của vật liệu sinh học đối với chức năng trao đổi chất của tế bào trong thời gian ngắn và có thể nhanh chóng sàng lọc xem vật liệu có khả năng gây độc tế bào hay không.

Thử nghiệm độc tính tế bào, như một phương tiện để phát hiện độc tính của vật liệu sinh học, có ưu điểm là dễ dàng, độ nhạy cao, chi phí thấp và thời gian thử nghiệm ngắn. Nó được sử dụng rộng rãi trong các phương tiện phát hiện và đánh giá tính tương thích sinh học của vật liệu sinh học và các sản phẩm thiết bị y tế. Phương pháp đánh giá độc tính tế bào của vật liệu sinh học phát triển từ việc quan sát sự thay đổi về hình thái và số lượng tế bào đến đánh giá các khía cạnh liên kết, tăng sinh, trao đổi chất của tế bào, với số lượng tế bào năng động và khả năng tăng sinh tế bào làm phương pháp đánh giá tính tương thích sinh học của tế bào vật liệu sinh học. Thí nghiệm cụ thể có thí nghiệm hấp thu đỏ trung tính, thí nghiệm hình thành nhân bản,MTTXét nghiệm độc tính tế bào vàXTTXét nghiệm độc tính tế bào, trong đó......MTTvàXTTPhương pháp thử nghiệm độc tính tế bào, bởi vì có thể định lượng độc tính tế bào của vật liệu, cho nên được mọi người chấp nhận và sử dụng rộng rãi hơn.

MTTvàXTTNguyên tắc phát hiện xét nghiệm độc tế bào là succinate dehydrogenase trong ty thể tế bào sống có thể làm cho ngoại sinhMTTGiảm thành methylene tinh thể màu xanh tím không hòa tan trong nước(Formazan)Và lắng đọng trong tế bào, tế bào chết không có chức năng này. Name(DMSO)hoặc rượu isopropyl hoặc methyl phenazine sulfate(PMS)Có thể hòa tan kết tinh methylene trong tế bào, sử dụng máy đo enzyme trongTừ 570nmGiá trị hấp thụ ánh sáng của nó được xác định ở bước sóng, và trong một phạm vi số lượng tế bào nhất định, lượng tinh thể hình thành tỷ lệ thuận với số lượng tế bào. Theo giá trị hấp thụ đo được(OD)giá trị)Để đánh giá số lượng tế bào sống,ODGiá trị càng lớn, hoạt động tế bào càng mạnh, độc tính càng nhỏ. Bằng cách tính toán tốc độ tăng sinh của các tế bào, độc tính tế bào của vật liệu y tế và các sản phẩm của chúng có thể được đánh giá theo cấp số lượng. Khả năng sống sót của tế bào cũng có thể được tính bằng cách pha loãng nồng độ khác nhau của dịch nhúngIC50Ức chế hoạt động tế bào50Nồng độ%)Đánh giá độc tính tế bào của vật liệu sinh học và sản phẩm.

Kiểm tra độc tính tế bào trong ống nghiệm dương tínhVới khả năng tái tạo hàng loạt tốt, hiệu suất ổn định và kích thước thông số kỹ thuật phong phú, nó có thể được sử dụng như đánh giá sinh học của thiết bị y tế-Vật liệu lý tưởng để xác định độc tính tế bào.