Đáp ứng tiêu chuẩn mới - NY/T 4630-2025 Xác định alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin trong sữa bò và các sản phẩm của nó

Về chúng tôi

Thermo Fisher Scientific consumables for chromatography

Thông tin E-mail
zoe.wang2@thermofisher.com
Điện thoại
18516780105
Địa chỉ
Đường xinjinqiao, số 27, tòa nhà 6

Ngày:2025-05-27Đọc:1

Giới thiệu

Sữa bò tươi có nhiều protein hoạt động tự nhiên như alpha lactalbumin (α lactalbumin), beta lactoglobulin (β lactoglobulin), lactoferrin (Lactoferrin, LF), immunoglobulin G (Immunoglobulin G, IgG) và lactoperoxidase (Lactoperoxidase, LP), trong số những người khác, đóng một vai trò quan trọng trong việc chống lại vi khuẩn, sự xâm nhập của virus, tăng cường khả năng miễn dịch và thúc đẩy sửa chữa mô và phát triển. trong đó alpha-lactoalbumin có tác dụng chống ung thư, kháng khuẩn và kháng virus, điều chỉnh chức năng miễn dịch, thúc đẩy tổng hợp lactose và bài tiết sữa; Beta lactoglobulin có hoạt tính giảm cholesterol, chống oxy hóa và kháng virus, thúc đẩy sự hấp thụ tiêu hóa các vitamin tan trong chất béo. Các phương pháp xử lý nhiệt khác nhau (tiệt trùng, khử trùng nhiệt độ cực cao (UHT), cô đặc bay hơi và sấy phun, v.v.) có thể dẫn đến mức độ bất hoạt thoái hóa khác nhau của alpha-lactoalbumin và beta-lactoglobulin trong các sản phẩm sữa, ảnh hưởng đến giá trị dinh dưỡng và giá bán thị trường của chúng.

Điểm nổi bật của chương trình ứng phó mới của Semalt

1.Thử nghiệm này đề cập đến NY/T 4630-2025 và các tiêu chuẩn nhóm và tiêu chuẩn doanh nghiệp liên quan để xác định hàm lượng alpha-lactoalbumin và beta-lactoglobulin trong sữa tiệt trùng, sữa tiệt trùng siêu nóng và sữa công thức cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ.NY/T 4630-2025 sẽ chính thức được triển khai vào ngày 1/5/2025。

2. Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (0,8 ml / phút() Thể tích mẫu nhỏ hơn.10 μL), tọa độ&phương trình (Từ 10 Hz), sao cho hình dạng và độ phân lập của alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin đều do tiêu chuẩn.

3. Để có được hình dạng đỉnh và độ phân tách tốt, các thử nghiệm đã được tối ưu hóa thích hợp cho việc xử lý mẫu trước và điều kiện sắc ký lỏng, với độ dốc 0,1% nước trifluoroacetate - 0,1% acetonil trifluoroacetate làm pha chảy ở nhiệt độ cột 60 ℃, tốc độ dòng chảy 0,8 mL/phút, giá trị áp suất tối đa của hệ thống không vượt quá110 thanh。

4. Kết quả thử nghiệm cho thấy: α-lactoglobulin và β-lactoglobulin sắc ký có hình dạng tốt, hiệu quả cột tuyệt vời và độ phân ly tuyệt vời, trong đóSự tách biệt giữa đỉnh alpha-lactalbumin chính và đỉnh can thiệp gần đó tốt hơn đáng kể so với biểu đồ phổ chuẩn. Giải pháp sản phẩm tiêu chuẩn pha trộn alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin (100 μg/mL), thời gian lưu giữ alpha-lactoglobulin là 21,900 phút, yếu tố bất đối xứng 0,98, số tấm lý thuyết 321,137; Thời gian lưu giữ beta-lactoglobulin B là 24,747 phút, hệ số bất đối xứng 1,01, số tháp lý thuyết 352451; β-lactoglobulin A giữ lại 25,467 phút, yếu tố bất đối xứng 1,00, số tháp lý thuyết 373359; Độ cô lập của alpha-lactoglobulin với beta-lactoglobulin B là 17,77 và beta-lactoglobulin B với beta-lactoglobulin A là 4,33; Bốn lần lấy mẫu liên tiếp, thời gian lưu giữ và RSD của khu vực đỉnh thấp hơn 0,3%, khả năng tái tạo phương pháp tốt; Giải pháp tiêu chuẩn Alpha Lactoalbumin Phạm vi tuyến tính 0,00-200 μg/mL, hệ số tương quan tuyến tính r²≥0,9997, Giải pháp sản phẩm tiêu chuẩn beta-lactoglobulin Phạm vi tuyến tính 0,00-200 μg/mL, hệ số tương quan tuyến tính r²≥ 0,9991, tuyến tính tốt.

5. Trong các thử nghiệm để xác định hàm lượng alpha-lactoglobulin so với beta-lactoglobulin trong các sản phẩm sữa bằng sắc ký lỏng nghịch pha,Sản phẩm Accucore 150 C4Cột sắc ký kết hợp với hệ thống sắc ký lỏng hiệu quả cao Vanquish Core, cho thấy khả năng tái tạo tốt và ổn định tuyệt vời, giới hạn phát hiện phương pháp và giới hạn định lượng đáp ứng các yêu cầu tiêu chuẩn, có sẵn cho các doanh nghiệp sữa và phòng thí nghiệm kiểm tra thực phẩm để tham khảo.

6.Tham khảo các tài liệu liên quan, hai nhánh được sử dụng song song trong các thử nghiệm để xác định hàm lượng alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin trong các sản phẩm sữa bằng sắc ký thẩm thấu gelMAbPac SEC-1 (300 Å, 5 μm, 7,8 × 300 mm)Cột sắc ký ngăn chặn khối lượng, với 6 M guanidine hydrochloride làm pha chảy, phân lập hiệu quả alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin ở 280 nm.

Trượt xuống để xem tất cả

NY / T 4630-2025

Giải pháp ứng dụng hoàn chỉnh của Cemerfly

Xử lý mẫu trước

1.1 Mẫu chất lỏng: sữa nhiệt độ thấp (sữa tươi, sữa tiệt trùng)/sữa nhiệt độ bình thường (sữa tiệt trùng siêu cao (UHT)

Lấy mẫu thử 5 g (chính xác đến 0,1 mg) trong ống ly tâm 50 mL với nắp xoay quy mô, thêm một lượng nước vừa phải xoáy trộn đều 30 s, sau khi điều chỉnh pH với lượng axit axetic vừa phải là 4,60 ± 0,05, dung lượng nước ổn định đến 25,0 mL, xoáy trộn đều 1 phút, để trên 30 phút, 12.000 vòng/phút 4 ℃ ly tâm 15 phút. Lấy chất lỏng trong (có thể được pha loãng với nước siêu tinh khiết nếu thích hợp), trên 0,2μm màng lọc PTFE micropore ưa nước (P/N: 42213-NPL), bộ lọc được kiểm tra trên máy.

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

Lấy mẫu thử 2 g (chính xác đến 0,1 mg) trong ống ly tâm 50 mL với nắp xoay có quy mô, thêm một lượng nước vừa phải trộn đều trong 1 phút để nó hòa tan hoàn toàn (nếu cần thiết có thể được tắm bằng nước ấm), sau khi điều chỉnh pH với lượng axit axetic vừa phải là 4,60 ± 0,05, dung tích nước ổn định đến 25,0 mL, trộn đều trong 1 phút, để trên 30 phút, 12.000 rpm 4 ℃ ly tâm 15 phút. Lấy chất lỏng trong (có thể được pha loãng với nước siêu tinh khiết nếu thích hợp), trên 0,2μm màng lọc PTFE micropore ưa nước (P/N: 42213-NPL), bộ lọc được kiểm tra trên máy.

Trượt xuống để xem tất cả

Cấu hình dụng cụ và điều kiện sắc ký

Thermo Scientific ™ Vanquish Core ™ Hệ thống sắc ký lỏng hiệu suất cao, cấu hình: Bơm Quaternary Pump C (VC-P20-A), Bộ lấy mẫu tự động Split Sampler CT (VC-A12-A), Hộp nhiệt độ cột Column Compartment C (VC-C10-A), Máy dò Diode Array Detector CG (VC-D11-A), Xử lý dữ liệu Chromeleon ™ 7.3

Cột sắc ký: Accucore 150 C4, 2,6 μm, 4,6 × 150 mm (P/N: 16526-154,630)

Pha chảy: A: 0,1% nước axit trifluoroacetic B: 0,1% axit trifluoroacetic acetonil

Tốc độ dòng chảy:0.8mL / phút

Thủ tục rửa gradient:

Lượng mẫu:10µL

Nhiệt độ cột: 60 ℃

Máy dò: DAD, Bước sóng thu thập: 210 nm; Tần số thu thập:10Hz; Thu thập phổ: 190-400 nm

Trượt xuống để xem tất cả

Sơ đồ và dữ liệu

3.1 Sơ đồ phân lập và dữ liệu của dung dịch chuẩn pha trộn alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin

Hình 1 Sơ đồ phân lập và dữ liệu của dung dịch chuẩn pha trộn alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin (100 μg/mL)(Click để xem ảnh lớn)

Như thể hiện trong Hình 1, sắc ký alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin có hình dạng tốt, hiệu quả cột tuyệt vời và độ cô lập vượt trội so với tiêu chuẩn. Thời gian lưu giữ alpha-lactoalbumin là 21,900 phút, hệ số bất đối xứng 0,98, số lượng tấm lý thuyết 321,137; Thời gian lưu giữ beta-lactoglobulin B là 24,747 phút, hệ số bất đối xứng 1,01, số tháp lý thuyết 352451; Thời gian lưu giữ beta-lactoglobulin A là 25,467 phút, hệ số bất đối xứng 1,00 và số lượng tháp lý thuyết 373359. Độ cô lập của alpha-lactoglobulin với beta-lactoglobulin B là 17,77 và beta-lactoglobulin B với beta-lactoglobulin A là 4,33.

3.2 Sơ đồ xếp chồng vị trí của giải pháp Alpha-Lactoglobulin và Beta-Lactoglobulin Single Standard

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

α-lactoglobulin và β-lactoglobulin sắc ký đơn vị và quang phổ, như được hiển thị trong Hình 2, α-lactoglobulin, β-lactoglobulin B và β-lactoglobulin A đều được hấp thụ đặc trưng ở 200 nm và 279 nm.

3.3 Sơ đồ chồng mẫu liên tục của dung dịch tiêu chuẩn pha trộn α-lactoglobulin và β-lactoglobulin

Hình 3 Sơ đồ chồng mẫu liên tục của dung dịch tiêu chuẩn pha trộn α-lactoglobulin và β-lactoglobulin (100 μg/mL, n=4) (nhấp vào hình lớn hơn)

Giải pháp tiêu chuẩn pha trộn alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin (100 μg/mL) được lấy mẫu bốn lần liên tiếp, thời gian lưu giữ và RSD của khu vực đỉnh nhỏ hơn 0,3%, khả năng tái tạo phương pháp tốt, phổ phân lập và dữ liệu được mô tả trong Hình 3.

3.4 Bản đồ lớp phủ đường cong hiệu chuẩn của dung dịch Alpha-Lactoglobulin và Beta-Lactoglobulin Standard

Hình 4 Sơ đồ lớp phủ đường cong hiệu chuẩn của dung dịch Alpha-Lactoalbumin và Beta-Lactoglobulin Standard (0,00/40,0/80,0/120/160/200 μg/mL) (Nhấp vào hình ảnh lớn hơn)

Hàm lượng alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin trong sữa tươi và sữa tiệt trùng thường cao hơn, vì vậy phạm vi tuyến tính được khuyến nghị bởi hai tiêu chuẩn nhóm T/TDSIA 002-2021 và T/TDSIA 007-2019 đã được chọn. Như thể hiện trong hình 4, phạm vi tuyến tính của dung dịch tiêu chuẩn alpha-lactalbumin 0,00-200 μg/mL, hệ số tương quan tuyến tính r²≥0,9997, Giải pháp sản phẩm tiêu chuẩn beta-lactoglobulin Phạm vi tuyến tính 0,00-200 μg/mL, hệ số tương quan tuyến tính r²≥ 0,9991, tuyến tính tốt. Trong đó beta-lactoglobulin B và beta-lactoglobulin A được định lượng bằng các nhóm hợp chất.

3.5α-lactoglobulin và β-lactoglobulin tiêu chuẩn (40,0μg/mL) với một giải pháp trống

Hình 5α-lactoglobulin và β-lactoglobulin Standard (40,0μg/mL) với một giải pháp trống (nhấp vào hình lớn hơn)

Khi thể tích mẫu là 10 uL, độ cao đỉnh của α-lactoglobulin và β-lactoglobulin (40,0 μg/mL) là S, trung bình của tiếng ồn ma trận 22,5-24,0 phút được chọn là N và tỷ lệ tín hiệu tiếng ồn của α-lactoglobulin, β-lactoglobulin B và β-lactoglobulin A lần lượt là 523,3, 139,9 và 133,6, như thể hiện trong Hình 5. Do đó, kết hợp với việc tối ưu hóa khối lượng mẫu, độ nhạy của phương pháp xác định alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin cũng có thể đáp ứng yêu cầu 1,00 μg/mL trong NY/T 4630-2025.

3.6α-lactoglobulin và β-lactoglobulin hỗn hợp chuẩn hóa giải pháp với các mẫu sữa tiệt trùng

Hình 6α-lactoalbumin và β-lactoglobulin hỗn hợp dung dịch chuẩn chồng lên dung dịch mẫu sữa tiệt trùng (nhấp vào hình lớn)

Ngoài whey protein, sữa bò cũng chứa một lượng lớn casein và các protein khác có thể gây rối loạn trong việc xác định alpha-lactalbumin và beta-lactoglobulin. Sau khi các mẫu sữa tiệt trùng được điều chỉnh pH, ly tâm tốc độ cao và các hoạt động tiền xử lý khác, alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin không biến tính được giữ lại trong chất lỏng thượng lưu, loại đỉnh được giữ lại tốt hơn, đường cơ sở trơn tru và không bị xáo trộn khi ra đỉnh, như thể hiện trong Hình 6. Được định lượng bằng phương pháp đánh dấu bên ngoài, mẫu sữa tiệt trùng có hàm lượng alpha-lactoglobulin 1033,6 mg/kg và beta-lactoglobulin 2949,0 mg/kg, về cơ bản phù hợp với giá trị nhãn.

Ký hợp đồng cung cấp Phần mềm tính toán định lượng rủi ro ngoài khơi – Safeti Offshore cho Trung tâm nghiên cứu và phát triển An toàn và Môi trường Dầu khí (CPSE) (

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

(Click để xem ảnh lớn)

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

(Click để xem ảnh lớn)

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

(Click để xem ảnh lớn)

Slide Xem thêm

Alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin nhạy cảm với nhiệt độ cao có thể phá vỡ cấu trúc hóa học và hoạt động sinh học của chúng. Như thể hiện trong Hình 7-9, không có đỉnh gây nhiễu đáng kể nào gần đỉnh mục tiêu alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin trong sữa tiệt trùng (sữa đông lạnh), có thể gần như chắc chắn và định lượng, và các mẫu như sữa bò sống, sữa tiệt trùng và các mẫu khác được áp dụng cho phương pháp đầu tiên NY/T 4630-2025; Trong khi sữa tiệt trùng siêu nóng (sữa bình thường) và sữa công thức cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ có một sự xáo trộn rõ rệt gần đỉnh mục tiêu beta-lactoglobulin, sẽ ảnh hưởng nghiêm trọng đến kết quả định tính và định lượng, alpha-lactoglobulin bị ảnh hưởng tương đối nhỏ, sữa tiệt trùng siêu nóng, sữa công thức cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ và các mẫu khác không phù hợp với phương pháp đầu tiên NY/T 4630-2025, phương pháp thứ hai được khuyến nghị.

3.8 Sắc ký thẩm thấu của gel dung dịch chuẩn alpha-lactoalbumin và beta-lactoglobulin (phương pháp thứ hai)

Hình 10 α-lactoglobulin và β-lactoglobulin Standard Solution (500 mg/L) Gel Penetration Chromatography (Nhấp vào hình lớn hơn)

Tham khảo bài viết của giáo viên Đỗ Như Vân trên tạp chí "Ngành công nghiệp sữa Trung Quốc" để xác định hàm lượng α-lactoglobulin trong sữa, bột sữa, bột whey (2022), sử dụng song song hai cột sắc ký MAbPac SEC-1 (300 Å, 5 μm, 7,8 × 300 mm), rửa bằng nhau với 6 M guanidine hydrochloride làm pha chảy, ở 280 nm có thể phân lập hiệu quả α-lactoglobulin và β-lactoglobulin (hình 10) và thử nghiệm 60 lô sữa, sữa bột và bột sữa để Tính thích hợp và ổn định của phương pháp kiểm tra, các bản vẽ và dữ liệu liên quan đến các nguyên văn.

Thông số kỹ thuật của cột sắc ký MAbPac SEC-1 là:7.8×300mm， Tốc độ dòng chảy được đề nghị là 0,5 mL/phút, tiết kiệm dung môi trên tiền đề đảm bảo độ tách, tùy chọn4.0×300Cột sắc ký đặc điểm kỹ thuật mm, tốc độ dòng chảy đề nghị là 0,2 mL/phút (có thể được điều chỉnh thích hợp khi thích hợp).

NY/T 4630-2025 Đề xuất vật tư tiêu hao sắc ký liên quan

4.1 Cột phân tích và cột bảo vệ đầu tiên của sắc ký lỏng nghịch pha
Accucore 150 C4, 2,6 μm, 4,6 × 150 mm	(Điện thoại: 16526-154630)
Accucore 150 C4 Cột bảo vệ Core, 2,6μm, 4,0 × 10 mm, 4 pk	(Điện thoại: 16526-014005)
Uniguard kết nối trực tiếp bảo vệ bài viết tay áo	(Điện thoại: 850-00)

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

Tốc độ dòng chảy:0.5mL / phút
保护柱： MAbPac SEC-1, 5 μm, 300 Å, 4,0 × 50 mm	(Điện thoại: 074697)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 μm, 300 Å, 7,8 × 300 mm	(Điện thoại: 088460)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 μm, 300 Å, 7,8 × 300 mm	(Điện thoại: 088460)

Tốc độ dòng chảy:0.2mL / phút
保护柱： MAbPac SEC-1, 5 μm, 300 Å, 4,0 × 50 mm	(Điện thoại: 074697)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 μm, 300 Å, 4,0 × 300 mm	(Điện thoại: 074696)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 μm, 300 Å, 4,0 × 300 mm	(Điện thoại: 074696)

4.3 Xử lý mẫu trước
Titan 3 Bộ lọc kim PTFE ưa nước, 17 mm, 0,2 μm, 200/pk	(Điện thoại: 42213-NPL)

Trượt xuống để xem tất cả

Tài liệu tham khảo

[1] NY/T 4630-2025 HPLC để xác định alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin trong sữa bò và các sản phẩm của nó

[2] T/TDSIA 026-2022 Xác định α-lactoglobulin, β-lactoglobulin trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ - Sắc ký thẩm thấu gel

[3] T/TDSIA 002-2021 HPLC để xác định alpha-lactalbumin trong sữa và các sản phẩm từ sữa

[4] T/CSIQ 77001-2020 HPLC để xác định hàm lượng alpha-lactalbumin trong các sản phẩm sữa

[5] T/TDSIA 007-2019 Sắc ký lỏng xác định beta-lactoglobulin trong sữa và các sản phẩm từ sữa

[6] T/SHNX 001-2025 Xác định sắc ký lỏng của lactoferrin, alpha-lactoglobulin và beta-lactoglobulin trong sữa bò thô

(7) Đỗ Như Vân, Vương Lượng, Lâm Nghị tán gẫu. Hàm lượng alpha-lactalbumin trong sữa, bột sữa, bột whey được xác định bằng sắc ký khối lượng.[J] Ngành công nghiệp sữa Trung Quốc, 2022,50 (04): 46-51.

Bài viết cuối cùng:Tiêu chuẩn quốc gia mới - GB 5009.299-2024 Xác định lactoferrin trong thực phẩm

Bài viết tiếp theo:Cải tiến kỹ thuật Tăng cường chất lượng | Một giai đoạn dòng hoàn thành phân tích polymer protein, mRNA và AAV