-
Thông tin E-mail
gptchina@gyrosproteintech.com
-
Điện thoại
13764581292
-
Địa chỉ
Phòng 1609-1613, Tòa nhà A, Số 380 Fenglin Road, Quận Từ Hối, Thượng Hải
Về chúng tôi
Mesa Labs
Giải pháp phát hiện kháng thể kháng thuốc Gyolab hiệu quả cao giúp đơn giản hóa hoạt động đồng thời tăng độ chính xác
Ngày:2024-12-10Đọc:0
Nền tảng Gyrolab sử dụng phương pháp lấy mẫu tự động để phát hiện miễn dịch thu nhỏ trên đĩa CD vi lưu lượng. Vi hạt ái lực của màng bọc streptomycin được lấp đầy trong vi cấu trúc CD, được kết hợp với tính đặc hiệu của phân tích bằng thuốc thử bắt giữ biotin hóa, sau đó kết hợp với thuốc thử phát hiện đánh dấu huỳnh quang, kích thích tín hiệu huỳnh quang trên cột ái lực bằng laser và đọc tín hiệu huỳnh quang bằng máy dò. Xét nghiệm miễn dịch Gyrolab cóTự động hóa, thông lượng cao, tiết kiệm thời gian, liều lượng thuốc thử và mẫu thấp, phạm vi động rộng và hiệu ứng ma trận thấpCác lợi thế khác đã được ứng dụng rộng rãi trong lĩnh vực nghiên cứu và sản xuất dược phẩm sinh học.
Gyrolab sử dụng định dạng cầu nối đồng nhất (homogenous bridgingformat) để phát hiện ADA, trong đó các phân tử thuốc được sử dụng đồng thời làm thuốc thử bắt (biotin hóa) và thuốc thử (Alexa Fluor). ® 647 đánh dấu huỳnh quang), mẫu và tác nhân được trộn lẫn trước khi được thêm vào cột streptomycin của vi cấu trúc CD, sau đó kiểm tra ADA hoặc kiểm soát dương tính để tạo thành một phức hợp cầu nối giữa các phân tử dược phẩm được biotin hóa và các phân tử dược phẩm được đánh dấu bằng huỳnh quang. Dạng xét nghiệm này có thể phát hiện tất cả các loại ADA tương tự (IgG, IgM, IgA, v.v.) và không phụ thuộc vào loài, và có thể được sử dụng trong cả nghiên cứu tiền lâm sàng và lâm sàng.
Nền tảng GyrolabCung cấp giải pháp hoàn chỉnh để phát hiện ADAĐơn giản hóa quy trình làm việc từ thử nghiệm sàng lọc đến thử nghiệm xác thực, bao gồm mô-đun phần mềm phân tích ADA, bộ đệm pha loãng mẫu Rexxip ADA và đĩa CD ở hai định dạng khác nhau.
Gyrolab trộn CD 96 是Dành riêng cho Acid Detection ADA's Micro Flow CD tích hợp các bước tiền xử lý phân ly axit mẫu vào quy trình phát hiện tự động. Có 96 vi cấu trúc trên mỗi đĩa CD trộn và một buồng trộn mẫu trong mỗi vi cấu trúc có thể được sử dụng để ủ mẫu và phân ly axit. Khi thử nghiệm ADA được thực hiện, mẫu đầu tiên được thêm vào kênh xác định thể tích trong vi cấu trúc, mẫu 200 nL được đưa vào buồng trộn dưới tác động của lực ly tâm CD, sau đó thêm bộ đệm axit vào buồng trộn, phức hợp ADA-dược phẩm có thể được phân ly trong môi trường pH thấp. Một buồng trộn sau đó được thêm vào bộ đệm trung hòa Master Mix chứa tác nhân bắt và phát hiện, nơi các phân tử ADA tiếp xúc với tác nhân đánh dấu và tạo thành phức hợp ADA mới. Điều này làm cho tỷ lệ tác nhân đánh dấu so với các tác nhân tự do không được đánh dấu thuận lợi cho sự hình thành phức hợp cầu nối tác nhân đánh dấu ADA có thể phát hiện được, cuối cùng là phức hợp được chụp vào vi hạt của túi streptophilin và được phát hiện bằng máy dò huỳnh quang cảm ứng laser. Quá trình phát hiện này cho phép tự động hóa hoàn toàn từ việc bổ sung thuốc thử mẫu, phân ly axit trực tuyến đến phát hiện tín hiệu. Chương trình tự động kiểm soát chính xác thời gian và khối lượng phản ứng của từng bước,Giảm thiểu hoạt động thực hành, không chỉ cải thiện đáng kể độ chính xác phát hiện mà còn giảm đáng kể thời gian phân tích.
GyrolabHỗ trợ hai phương pháp tiền xử lý mẫu khác nhau để khắc phục sự can thiệp của thuốc tự do vào phát hiện ADABạn có thể linh hoạt chọn phương pháp thích hợp dựa trên thuốc tính và tình hình ứng dụng của thuốc. Phát hiện ADA bằng công nghệ GyrolabLợi thế chínhBao gồm:
Hệ thống phản ứng nâng cấp, liều lượng thuốc thử và mẫu nhỏ
Tự động phân ly axit trực tuyến, cải thiện độ chính xác phát hiện
Công nghệ truyền cột ái lực giảm thiểu hiệu ứng ma trận và cải thiện độ nhạy phát hiện và dung nạp thuốc
Cột ái lực tải trọng cao tạo điều kiện thuận lợi hơn cho nồng độ cao của thuốc thử đánh dấu cạnh tranh với các loại thuốc tự do, cải thiện hơn nữa khả năng dung nạp thuốc thông qua lợi thế đo lường
Tốc độ phân tích nhanh, thời gian chạy khoảng 1 giờ cho mỗi đĩa CD và khoảng 2 giờ với phát hiện phân ly axit trực tuyến Mixing CD 96
Ít hoạt động thực hành, giảm lỗi của con người
Các mô-đun phần mềm ADA chuyên dụng hướng dẫn quá trình phát triển thử nghiệm sàng lọc và kiểm tra xác thực theo các tiêu chuẩn quy định
Các thông số chính của phương pháp xét nghiệm miễn dịch bao gồmPhát hiện độ nhạy, dung nạp thuốc và chọn lọcDung nạp thuốc đề cập đến khả năng phát hiện kháng thể kháng thuốc (ADA) trong trường hợp thuốc điều trị còn lại và đánh giá sự gắn kết của thuốc tự do với ADA để tránh nguy cơ âm tính giả. Chọn lọc đề cập đến việc đánh giá độ chắc chắn của các xét nghiệm trong trường hợp ma trận bình thường hoặc ma trận bệnh và rất quan trọng để đảm bảo tính nhất quán khi các mẫu khác nhau được đánh giá trong các nghiên cứu lâm sàng. Ngoài ra, một thách thức lớn khi sử dụng phương pháp cầu nối để phát hiện ADA là sự can thiệp của các mục tiêu, các mục tiêu hòa tan ở dạng dimer hoặc polymer có mặt trong các mẫu lâm sàng có thể gây raKết quả dương tính giả。
Các nhà nghiên cứu của công ty Novimmune SA đã thử nghiệm các mẫu được xử lý theo các cách khác nhau bằng công nghệ Gyrolab và ECL (Electochemiluminescence, ECL) trong quá trình phát triển các xét nghiệm ADA chống lại một loại thuốc kháng thể trị liệu (Novimab).Mẫu tiêu hao mục tiêu,Mẫu không tiêu hao mục tiêu,Mẫu axit hóa và mẫu không axit hóa), và ví dụ về các tham số chính của cả hai phương pháp phát hiệnChẳng hạn như độ nhạy, dung nạp thuốc và dung nạp mục tiêu được đánh giá và so sánhĐể có được phương pháp xét nghiệm miễn dịch lâm sàng phù hợp với mục đích (Fit-for-purpose) [1].
Các nhà nghiên cứu sử dụngThuốc biotin như thuốc thử bắt， Alexa Fluor ® Các loại thuốc được dán nhãn 647 (Gyrolab) hoặc Sulfo-tag (ECL) đóng vai trò là thuốc thử bắt giữ và các kháng thể kháng thuốc thỏ đa dòng tinh khiết đóng vai trò là chất tham chiếu tích cực ADA, được thử nghiệm ADA ở định dạng cầu nối đồng nhất trên cả hai nền tảng. Nền tảng Gyrolab sử dụng Bioaffy 200 CD để phát hiện mẫu không axit, Mixing CD 96 để phát hiện mẫu axit và phân ly và trung hòa axit mẫu được thực hiện tự động trên Mixing CD.
Một mẫu kiểm soát âm tính (NC) và chín mẫu kiểm soát dương tính (PC, 2, 5, 20, 50, 100, 250, 500, 1000 và 10.000 ng/mL ADA) được thử nghiệm trong ba ngày để xác định độ nhạy dựa trên kết quả của ba lần chạy giữa các xét nghiệm, tức là nồng độ PC thấp z liên tục trở lại trên tín hiệu ngưỡng.
Cả hai phương pháp đều có độ nhạy cao, dưới 100 ng/mL. Đối với phát hiện mẫu không axit hóa, cả nền tảng Gyrolab và ECL đều có độ nhạy 2 ng/mL; Đối với các mẫu sử dụng bước phân ly axit,Độ nhạy phát hiện của Gyrolab là 5 ng/mL, cao hơn độ nhạy 20 ng/mL của ECL.
Giá trị tín hiệu được phát hiện trên mẫu PC bởi nền tảng Gyrolab và ECL trong điều kiện không phân giải axit và phân ly axit. Trục X là nồng độ tham chiếu ADA và trục Y là tỷ lệ tín hiệu tiếng ồn (trung bình tín hiệu PC chia cho trung bình tín hiệu NC)
Sử dụng các điều kiện tối ưu được tối ưu hóa trên cả hai nền tảng, các nghiên cứu so sánh về thử nghiệm các mẫu axit hóa và không axit hóa tương ứng đã được thực hiện: chín mẫu PC (5, 20, 50, 100, 250, 500, 1000, 2500 và 10.000 ng/mL ADA) được thử nghiệm trong trường hợp có chứa các loại thuốc mumab 0, 20 và 100 µg/mL,Dữ liệu cho thấy nền tảng Gyrolab cho thấy khả năng dung nạp thuốc cao hơn. Đối với các mẫu thử nghiệm không bị axit hóa, ADA 100 ng/mL và 500 ng/mL có thể được phát hiện bởi Gyrolab ở nồng độ thuốc 20 µg/mL và 100 µg/mL, tương ứng với nền tảng ECL 250 ng/mL và 1000 ng/mL. Để phát hiện mẫu phân ly axit, ở nồng độ thuốc 20 µg/mL,Gyrolab có thể phát hiện ADA 5 ng/mL, 50 ng/mL cho nền tảng ECL; Cả hai nền tảng đều có độ nhạy phát hiện 50 ng/mL ADA khi nồng độ thuốc tăng lên 100 µg/mL.
Độ nhạy phát hiện của cả hai nền tảng trong điều kiện nồng độ thuốc là 0, 20 và 100 µg/mL. Độ nhạy được định nghĩa là nồng độ PC thấp z vượt quá tín hiệu ngưỡng.
Trong nghiên cứu này, các mục tiêu hòa tan có thể hình thành các xét nghiệm can thiệp dimer gây ra kết quả dương tính giả, và trong số những người mắc bệnh, mức độ cơ bản của các mục tiêu dimer hòa tan có thể cao hơn nhiều so với mức được đo trong huyết thanh của những người khỏe mạnh, vì vậyCải thiện khả năng chịu mục tiêu của các phương pháp phát hiệnquan trọng đối với phân tích lâm sàng.
Để đánh giá hiệu quả của bước tiêu hao mục tiêu, bốn mục tiêu dimer hòa tan nồng độ khác nhau sẽ được chứa(5、20、50 和 200 Ng / mL)Các mẫu được chia thành hai nhóm, một nhóm.Mục tiêu tiêu hao tiền xử lýMột nhóm khác.Không tiêu hao mục tiêuSau đó lần lượt tiến hành kiểm tra các bước phân ly axit trên hai nền tảng. Dữ liệu cho thấy cả xét nghiệm Gyrolab và ECL chỉ có thể chịu được mục tiêu dimer hòa tan 5 ng/mL mà không cần phân ly axit; Bằng cách kết hợp các bước tiêu hao mục tiêu và phân ly axit, cả hai nền tảng đều tăng mức độ dung nạp mục tiêu lên 200 ng/mL.
Khả năng chịu đựng của cả hai nền tảng ở các nồng độ mục tiêu dimer hòa tan khác nhau được đánh giá trong điều kiện không phân ly axit hoặc không có bước tiêu hao mục tiêu. Ngưỡng được đại diện bởi các đường chấm được cố định ở tỷ lệ tín hiệu nhiễu 1,25.
Kết quả phát hiện của hai nền tảng ở nồng độ mục tiêu dimer hòa tan khác nhau, với các ký hiệu "+" và "-" lần lượt chỉ ra rằng tín hiệu mẫu ở trên hoặc dưới ngưỡng.
Sử dụng các mẫu chỉ chứa ADA tự doĐánh giá độ chính xác liên phát hiện, bao gồm phát hiện các mẫu phân ly axit và các mẫu không phân ly axit. 3 phát hiện độc lập trên chín nồng độ khác nhau của PC (2, 5, 20, 50, 100, 250, 500, 1000 và 10.000 ng/mL) vào những ngày khác nhau bằng cách sử dụng nền tảng ECL và 5 phát hiện độc lập trên năm nồng độ khác nhau của PC (5, 20, 100, 500 và 10.000 ng/mL) bằng cách sử dụng nền tảng Gyrolab, tính toán độ chính xác giữa các hoạt động (CV%) dựa trên giá trị tín hiệu thu được ở mỗi cấp độ PC. Dữ liệu cho thấy cả xét nghiệm Gyrolab và ECL đều có độ chính xác cao khi không có bước phân ly axit, với CV dưới 10% cho tất cả các mẫu PC. Tuy nhiên, trong thử nghiệm phân ly axit, rõ ràng là đã quan sát thấy sự gia tăng CV từ 10% đến 26% trong thử nghiệm ECL, trong khi thử nghiệm Gyrolab vẫn duy trì độ chính xác tốt, với ít hơn 10% CV được thử nghiệm cho các mẫu khác ngoại trừ mẫu PC 5 ng/mL. Đó là bởi vìCông nghệ Gyrolab sử dụng xử lý phân ly axit hoàn toàn tự động, giảm hoạt động thủ công và lỗi, do đó làm giảm sự biến đổi của kết quả.
Độ chính xác liên phát hiện, "NT" có nghĩa là không phát hiện, “
Dữ liệu nghiên cứu này cho thấy công nghệ Gyrolab và ECL được phát hiện trong ADA.Độ nhạy, dung nạp thuốc, dung nạp mục tiêu và độ chính xácđợiCả hai đều cho thấy hiệu suất tốt về các thông số, cả hai phương pháp thử nghiệm đều phù hợp để xác minh phương pháp và phân tích mẫu lâm sàng
phát hiện mẫu với bước phân ly axit,Gyrolab có độ nhạy phát hiện cao hơn và dung nạp thuốc
Nền tảng Gyrolab tích hợp phân ly axit mẫu hoàn toàn tự động,Giảm hoạt động thực hành và lỗi, cải thiện khả năng lặp lại kết quả giữa các phát hiện
Xét nghiệm Gyrolab đòi hỏi ít thuốc thử hơn, thử nghiệm chạyThời gian ngắn hơn, dòng chảy cao hơn
Tài liệu tham khảo:
[1] Collet-Brose J, Couble PJ, Deehan MR, Nelson RJ, Ferlin WG, Lory S. Đánh giá của nhiều nền tảng công nghệ kiểm tra miễn dịch để chọn thử nghiệm kháng thể chống thuốc thể hiện thuốc phù hợp nhất và dung nạp mục tiêu. J Immunol Res. năm 2016; 2016:5069678. Doi: 10.1155/2016/5069678. Epub 2016 ngày 3 tháng 5. Mã số: 27243038; PMCID: PMC4868908.