-
Thông tin E-mail
gptchina@gyrosproteintech.com
-
Điện thoại
13764581292
-
Địa chỉ
Phòng 1609-1613, Tòa nhà A, Số 380 Fenglin Road, Quận Từ Hối, Thượng Hải
Về chúng tôi
Mesa Labs
Làm thế nào để phân tích dư lượng protein tế bào chủ (HCP) hiệu quả và đáng tin cậy hơn
Ngày:2024-12-10Đọc:0
Protein tế bào chủ (HCP) là protein không mục tiêu được sản xuất hoặc mã hóa bởi tế bào chủ (CHO, HEK293, E. coli, Sf9, v.v.) và là thành phần chính của các tạp chất liên quan đến quá trình trong thuốc sinh học. Mặc dù phần lớn protein tế bào chủ (lớn hơn 99%) đã được loại bỏ trong quá trình hạ lưu, vẫn có thể có một lượng nhỏ HCP còn lại đồng tinh khiết với các sản phẩm dược phẩm, một số protein còn lại được coi là HCP có nguy cơ cao, có thể có khả năng miễn dịch, hoạt tính sinh học hoặc hoạt tính enzyme, hoặc có khả năng làm suy giảm các phân tử hoặc phụ liệu của sản phẩm, có ảnh hưởng quan trọng đến chất lượng và an toàn của thuốc, vì vậy HCPs loại rủi ro cao là trọng tâm của các doanh nghiệp dược phẩm và các cơ quan quản lý.
Hệ thống biểu hiện CHO của tế bào buồng trứng hamster Trung Quốc là một trong những hệ thống biểu hiện động vật có vú thường được sử dụng trong sản xuất thuốc công nghệ sinh học như mumab vì khả năng sản xuất các protein phức tạp tương tự như biến đổi sau phiên dịch do con người sản xuất. Sự tinh chế hạ lưu của chất lỏng nuôi cấy tế bào CHO thường bao gồm sự phân tách ái lực protein A, tiếp theo là các bước tinh chế để loại bỏ các cụm, biến thể tích điện, HCP và DNA tế bào chủ. Phần lớn HCP bị loại bỏ trong quá trình tinh chế, nhưng có thể có một số HCP "thoát khỏi" do hai cách sau:
1
HCP có khả năng kết hợp với sản phẩm cụ thể hoặc không cụ thể và được mang theo trong quá trình xử lý;
2
HCP có khả năng tương tác với chất độn sắc ký protein A, khiến nó được rửa sạch cùng với sản phẩm.
HCP nguy hiểm và phân loại
Nguy cơ tiềm ẩn của HCP bị ảnh hưởng bởi một số yếu tố, bao gồm chỉ định thuốc, đường dùng thuốc, tần suất dùng thuốc, số lượng HCP trên mỗi liều dùng, quần thể bệnh nhân, sự tương đồng của HCP với các đối tác của con người và kinh nghiệm phi lâm sàng và/hoặc lâm sàng trước đây.
Tác động tiềm tàng của HCP đối với chất lượng, an toàn và hiệu quả của sản phẩm:
Miễn dịch:Kháng thể kháng thuốc, gây ra sản xuất cytokine, vv
Hiệu lực:Protein kết tụ hoặc suy thoái
Tính ổn định: Phụ liệu phân hủy lipase
Bảo mật:Tương tác với protein nội sinh, tác dụng phụ miễn dịch
Nhóm làm việc BPDG HCP phân loại các tác động của HCP có nguy cơ cao thành bốn nhóm chính dựa trên khả năng đồng thanh hóa một HCP với sản phẩm, tần suất xuất hiện trong quá trình hạ lưu, khả năng thay đổi hoặc làm suy giảm thuốc/phụ liệu và khả năng miễn dịch tiềm năng:
1) chất lượng sản phẩm, 2) chế phẩm, 3) chức năng sinh học trực tiếp trên cơ thể con người, và 4) miễn dịch.
Hiện nay có nhiều cách để xác định và định lượng mức độ HCP cụ thể đầy đủ và riêng lẻ tồn tại trong quá trình phát triển thuốc. Mỗi phương pháp đều có ưu điểm và nhược điểm riêng. Các tạp chất HCP đã biết có thể được đo chính xác theo các chiến lược phân tích tích hợp sau đây và, nếu được xác định là HCP có nguy cơ cao, các chiến lược kiểm soát có thể được phát triển để theo dõi và/hoặc loại bỏ chúng.
01 Đo tổng số HCP bằng phương pháp xét nghiệm miễn dịch, chẳng hạn như ELISA, là phương tiện làm việc chính để xác định nồng độ HCP còn lại để hướng dẫn phát triển quy trình cũng như hỗ trợ phát hiện hàng loạt GMP. Các tác nhân chính cần thiết để phát triển xét nghiệm miễn dịch HCP tổng thể cần được mô tả chi tiết.
02 Cần sử dụng các phương pháp trực giao bổ sung, chẳng hạn như điện di gel 2D/Western, và/hoặc phân tích khối phổ sau khi chiết xuất ái lực kháng thể (AAE), để đánh giá độ bao phủ của các thuốc thử kháng thể quan trọng đối với HCP cụ thể của quy trình.
03 Xét nghiệm miễn dịch HCP tổng thể nên được thực hiện thường xuyên để xác định mức độ HCP trong mẫu quá trình.
04 Các phương pháp trực giao, chẳng hạn như phổ khối lượng và/hoặc các phương pháp xét nghiệm HCP riêng lẻ bổ sung, được khuyến khích để đảm bảo độ tinh khiết của sản phẩm, đặc biệt là khi xét nghiệm miễn dịch phát hiện mức độ HCP tổng thể cao hơn, phi tuyến pha loãng được quan sát hoặc ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm được quan sát.
05 Nếu HCP cá nhân được xác định và được coi là có nguy cơ cao:
một
Có thể cần phải phát triển một xét nghiệm miễn dịch cụ thể để theo dõi các tạp chất đã biết hoặc phát triển một phương pháp phân tích khối phổ nhắm mục tiêu để hiểu rõ hơn về mức độ HCP và tác động tiềm tàng của nó.
b
Nếu tạp chất được xác định có hoạt tính enzyme, một xét nghiệm hoạt tính có thể được phát triển để hướng dẫn quá trình và phát triển sản phẩm, theo dõi, loại bỏ và/hoặc khử hoạt tính protein này.
c
Đánh giá miễn dịch được thực hiện bằng phương pháp in silico và nếu dự đoán cho thấy nguy cơ cao về miễn dịch, đánh giá miễn dịch so sánh in vitro (IVCIA) có thể được thực hiện.
d
Các nghiên cứu độc tính đánh giá rủi ro lâm sàng.
Các phương pháp được sử dụng để phân tích định tính và định lượng HCP tổng thể chủ yếu là xét nghiệm miễn dịch và thường được phát hiện bằng một hoặc nhiều phương pháp ELISA. Tuy nhiên, ELISA truyền thống có những hạn chế sau:
✦
•
Nhiều bước ủ và rửa, đòi hỏi nhiều thời gian thực hành và phân tích, dòng phát hiện mẫu rất hạn chế;
✦
•
Phạm vi động hẹp (± 100 ng/mL) đòi hỏi nhiều lần phát hiện lặp lại trong quá trình nghiên cứu quy trình hạ lưu;
✦
•
Tiêu thụ mẫu và thuốc thử là một thách thức đối với việc phát hiện nồng độ HCP thấp cụ thể vì rất khó để sản xuất đủ HCP từ các chất dược phẩm. Điều này khiến ELISA gặp khó khăn trong việc đáp ứng tốc độ, dòng chảy và tiêu thụ khối lượng mẫu ngày càng tăng của nhóm phát triển quy trình hạ nguồn.
Vì vậy, ngày càng có nhiều công ty dược phẩm chuyển sang các nền tảng phân tích miễn dịch thông lượng cao giúp tăng lưu lượng và tăng tốc độ quay vòng như Gyros's Gyrolab.®Nền tảng phân tích miễn dịch hoàn toàn tự động, công nghệ Gyrolab sử dụng các hạt vi mô của gói streptoaffinin để bắt các tác nhân bắt được biotin hóa, các mẫu được kết hợp với các tác nhân bắt được để phát hiện các tác nhân phát hiện được đánh dấu huỳnh quang sau khi kết hợp. Xét nghiệm miễn dịch này, được thực hiện trên cột ái lực ở chế độ dòng chảy (Flow-through), rất nhanh và không yêu cầu thời gian ủ, làm giảm đáng kể thời gian cần thiết để hoàn thành phân tích và tiêu thụ mẫu và liều thuốc thử so với ELISA truyền thống. Hoạt động điều khiển hoàn toàn tự động cho phép phát hiện Gyrolab lặp lại tuyệt vời. Do đó, các phương pháp phân tích thông lượng cao tự động hóa của Gyrolab có thể cung cấp hỗ trợ hiệu quả cho phân tích HCP trong phát triển quy trình và phát hiện phát hành QC:
✓
Hiệu quả quay vòng phân tích nhanh;
✓
Thông lượng phát hiện xuất sắc;
✓
Dữ liệu có chất lượng đáng tin cậy và kết quả có khả năng lặp lại cao.
Nhìn chung, phương pháp này làm tăng hiệu quả của bộ phận phân tích sinh học, giảm đáng kể thời gian làm thủ công, loại bỏ các yêu cầu đo lại do sai sót pha loãng hoặc lỗi hoạt động của con người và cải thiện đáng kể năng suất, chất lượng và khả năng lặp lại của kết quả phân tích.
