Autophagy như một mục tiêu đầy hứa hẹn cho điều trị dược phẩm

Autophagy và rối loạn của nó đã được tìm thấy trong các bệnh thoái hóa thần kinh và ung thưChơiDo đó, việc phát hiện ra các mục tiêu điều trị mới trong quá trình này đã trở thành một phương pháp điều trị dược phẩm đầy hứa hẹn. Autophagy là một quá trình điều hòa làm suy giảm và phục hồi các protein và bào quan bị tổn thương dưới sự căng thẳng của tế bào.1，2。bịCác túi được gọi là autophagyBong bóng thông quaMột màng đôi được hình thành xung quanh các thành phần tế bào được đánh dấu là bị phá hủy.Tiến hànhlắp ráp1. Các túi autophagy sau đó hợp nhất với lysosome, truyền nội dung của nó để phân hủy lysosome hydrolase.

Autophagy có nhiều tác dụng sinh lý và bệnh lý phức tạp, chẳng hạn như thích nghi với đói dinh dưỡng, loại bỏ protein nội bào và bào quan bị hư hỏng, phát triển tế bào, chống lão hóa, loại bỏ vi sinh vật, chết tế bào, ức chế khối u và trình bày kháng nguyên2. Mitochondrial division là sự suy thoái chọn lọc của ty thể bởi autophagy3Quá trình này thường có thểđểLoại bỏ ty thể bị lỗi sau khi tổn thương tế bào hoặc căng thẳng.

Vật liệu

• PC12mạc đường ruột muqueuses digestives (ATCC）

• 384 Hạt chia organic (Greiner）

• tế bào id ®Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (Khoa học Sự sống ENZO）

• Thuốc nhuộm ty thể màu cam

• Hoechst 33342

• Hình ảnh XpressSản phẩm Pico®Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (Thiết bị phân tử）

• CellReporterXpress Phần mềm thu thập và phân tích dữ liệu（Thiết bị phân tử）

Lợi thế

Ảnh hưởng của các hợp chất định lượng đến quá trình autophagy

Sử dụng các dấu hiệu hạt nhân để phân chia các tế bào, phát hiện và mô tả các tế bào nhỏMục tiêu.

Sử dụng hình ảnh tự động để đảm bảo kết quả thống kê đáng tin cậy

Phát hiện hình ảnh tế bào tự động và các hạt autophagy định lượng

Đánh giá tác động của autophagy

Trong mô tả ứng dụng nàyChúng tôi đã đánh giáHình ảnh XpressPicoHiệu quả của hệ thống hình ảnh tế bào tự động phát hiện và định lượng các hạt autophagy.PC12Các dòng tế bào u thần kinh của con người được sử dụng như một mô hình phát triển phát hiện. tế bào để 6，000 cáitế bào/Lỗ được cấy vào.384Trong lỗ, ấp.48Giờ. Để đánh giá hiệu quả của autophagy,LàmXử lý tế bào với nồng độ khác nhau của chloroquine hoặc verapamil48Giờ. Viet Namcó thểgây autophagy, trong khi chloroquinecó thểỨc chế sự suy thoái của autophagy gây ra sự tích tụ của các hạt.Hợp chấtSau khi xử lý, sử dụngtế bào id ®Xét nghiệm autophagyKit để sốngCác tế bào được nhuộm đểHiển thịDấu vếtAutophagy. Ngoài ra, chúng tôi sử dụng thuốc nhuộm ty thể huỳnh quang để phát hiện ty thể và sử dụngHoechstHạt chia organic (Tập trungTương ứng là 0.2 μMãvà 1 μMã）。 Sử dụngGhép nối20 lầnhoặc40XMục tiêucủaHình ảnh XpressPicoHệ thống và 3 kênh phát hiện（FITC、TRITCvàMàu xanh huỳnh quang）Đối với tế bàoTiến hành chụp ảnh. ở20 lầnMục tiêuMỗi lỗ dưới thu thập một hình ảnh, trong40XDưới mục tiêuMỗi lỗThu thập2-4Một hình ảnh để đảm bảo kết quả thống kê đáng tin cậy. Sử dụngCellReporterXpressAutophagy hoặc sơ đồ ứng dụng ty thể trong phần mềm thu thập và phân tích hình ảnh để phân tích hình ảnh.

Sơ đồ 1：Xét nghiệm autophagy.Hình trên cho thấy kinhquathuốc nhét hậu môn suppositoires (30 phm) Xử lý vàLàmVớitế bào idThuốc nhuộmPC12Hình ảnh đại diện của tế bào autophagy và mặt nạ phân tích của tế bào. ởCellReporterXpressTrong phần mềm, các hạt autophagy được xác định bằng cách sử dụng phân đoạn điểm. Nhân tế bàoHiển thị nhưMàu xanh, ty thểHiển thị nhưMàu cam, autophagyHiển thị nhưXanh lá cây. xuốngSơ đồhiển thịLàm choNhuộm các tế bào không được xử lý bằng thuốc nhuộm toàn vẹn ty thể màu cam。Mặt nạ hình ảnh và phân tích để phát hiện ty thể..

Các thuật toán này có thểđểPhát hiện và mô tả nhỏMục tiêu., chẳng hạn như autophagy hoặc ty thể trong tế bào chất, trong khi sử dụng các dấu hiệu hạt nhân để phân chia các tế bào. Định lượng để phát hiện autophagykiểm traBao gồm tổng số hoặc trung bình của các hạt, tổng diện tích hoặc diện tích trung bình của các hạt (đối tượng dưới tế bào), và sức mạnh. thuốc nhét hậu môn suppositoires (30 μMã) Xử lýsauHình ảnh đại diện của các tế bào và mặt nạ phân tích như hình ảnh1Hiển thị. Kiểm traKiểm traChloroquine và verapamilTế bào sau khi xử lýPhản ứng nồng độ và đánh giáEC50Giá trị. Tổng số autophagyDữ liệu cho thấy,Điều trị chloroquine và verapamil cho phéptế bàoMức độ autophagy tăng tương ứng4.6Gấp và3.3Nhân đôi（EC50Giá trị tương ứng là4.0và3.6 μMã）。

kết luận

Phương pháp này liên quan đếntế bào idthuốc nhuộmLiên kếtNó có thể được sử dụng để phát hiện các hạt autophagy và có thể được sử dụng để phát hiện ảnh hưởng của các hợp chất phát triển và định lượng đối với quá trình autophagy.

Tham khảoVăn học

1. 1. Mizushima, N; Komatsu, M (2011). Autophagy: cải tạo tế bào và mô. Di động. 147: 728–41

2. 2. Mizushima, N; (2007). Tự nuốt: quá trình và chức năng, Genes & Dev. 21: 2861-2873