Giới thiệu

Đối với một loạt các ứng dụng sinh học để theo dõi số lượng tế bào, sinh sản, sức khỏe, dung hợp và độc tính tế bào, cần phải được thực hiệnkhôngNhãn tế bàokiểm traCác ứng dụng nàycầnSử dụng ánh sáng truyền hiệu quả và đáng tin cậy(TL)Chức năng hình ảnh và phân tích, cung cấp phân đoạn chính xác để định lượng tế bào và đánh giá các phản ứng và hình thái tế bào khác nhau. Ngoài ra, sự kết hợp của hình ảnh ánh sáng truyền qua độ tương phản cao với hình ảnh đánh dấu huỳnh quang cho nhiều phát hiện dựa trên tế bào.phân tíchĐiều đó rất quan trọng.

Sản phẩm MetaXpress 6.5Trình soạn thảo mô đun tùy chỉnhTLThuật toán phân chia tế bào là một hình ảnh của một tế bào sử dụng ánh sáng truyền quavàThuật toán phân tích được tối ưu hóa định lượng và đáng tin cậy. Mô tả ứng dụng này cho thấyTLTính thực tế và chính xác của phân chia tế bào。Phân tích và định lượng bằng cách so sánh tổng số lượng tế bào trong ánh sáng truyền qua với số lượng nhân tế bào được nhuộm huỳnh quangCHOvàHeLaBiểu tượng Quiet hours ( 1）。

phương pháp

SẽCHOvàHeLaChất lỏng pha loãng tế bào được tiêm vào màu đen, đáytrong suốt96Trong tấm lỗ, từ hàng trên cùng của tấmBắt đầu tấm vải.Mỗi lỗ20，000Tế bào）. Nhấn từng loại tế bào1：2Tỷ lệ ởTiến hành xuống trong tấm microporePha loãng，6Một lỗ kép.。Nuôi cấy tế bào24giờsauTrong37 ° C、5% CO2 Dùng trong hộp nuôi cấy.Hoechst 33342tế bàoHạt nhân nhuộm tế bào30phút. Sau đó dùng4%Paraformaldehyde cố định các tế bào và sử dụngDPBSRửa 2 lần. quaHình ảnh XpressMicroHệ thống hình ảnh nội hàm cao vàSản phẩm MetaXpressPhần mềm tạo ra hình ảnh của các tế bào. Sử dụngKế hoạch 10x FluorVật kính chụp ảnh một trường nhìn có thể chụp chính xác tới mức tối đa1500Một tế bào. Sử dụng ánh sáng truyền qua vàMàu xanh huỳnh quangKênh huỳnh quang chụp ảnh với thời gian phơi sáng tương ứng15 msvà35 ms。

Lợi thế

Sử dụng
Hình ảnh ánh sáng truyền cặpMục tiêuThực hiện giám sát phân chia và đếmDưới ánh sáng truyền quaTăng sinh tế bào

Sử dụng nhiều phương pháp phân tíchĐánh giáTLTác dụng của thuật toán phân chia tế bào

Hiểu nhiều loại và kích cỡ tế bàoCông cụ định lượng
Công cụ định lượng và phân tích

Sơ đồ 1：Thiết lập để phân tích ánh sáng truyền quaBắncủaHeLavàCHOtế bàoHình ảnhMô - đun tùy chỉnh. LàmVớiHoechst 33342tế bàoThuốc nhuộm hạt nhân nhuộm các tế bào. Sử dụngMàu xanh huỳnh quangKênh vàÁnh sáng truyền qua(TL)Tiến hànhhình ảnh tế bào,thiết lậpMô-đun tùy chỉnh để phân tích và định lượng các tế bào dựa trên hình ảnh ánh sáng truyền qua và hình ảnh huỳnh quang nhân tế bào.

Trong trình soạn thảo mô-đun tùy chỉnhthiết lậpTLThuật toán phân chia tế bào

Sự phân chia tế bào chính xác là rất quan trọng để định lượng các tế bào bị bắt bởi ánh sáng truyền qua.vìTLtế bàoPhân chiaTế bào được chọnThuật toánMộtcó thểPhân chia chính xácvàNhận dạngHeLavàCHOtế bào （Sơ đồ 2）。 Có các cài đặt khác để lựa chọn. tế bàoThuật toánBhoặc tế bàoThuật toánCcó thểPhân biệtĐể phân tích các tế bào nhỏ hoặc lớn。Phân tíchTrong mô-đunThiết lập đượcĐể lọc tổng diện tíchNhỏ hơn150 mM2các tế bào 3）。 đâyCài đặtcó thểđểHãy chắc chắn để tránh các tế bào chết nhỏ sẽ thu thập xung quanhTrang chủCác tế bào sống được đếm và phân tích.Hơn nữa,Các tế bào được thiết lậpThuật toán đếm hạt nhân có thểđểChính xácĐịnh lượngHeLavàCHOcủaNhân tế bào 4）。

Liên kếtSố lượng tế bào dưới ánh sáng truyền qua Số lượng hạt nhân huỳnh quang

Sử dụngTLThuật toán phân chia tế bàothiết lậpMô-đun tùy chỉnh có thể được phân chia chính xácHeLavàCHOcác tế bào 6）。Không có sự khác biệt thống kê giữa tổng số lượng tế bào và số lượng hạt nhân trong ánh sáng truyền qua,Hiển thịTLB5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3) 7）。 Ngoài số lượng tế bào,TLThuật toán phân chia tế bào cũng có thể tạo ra nhiềudữ liệuĐể đánh giá phản ứng của tế bào vàtế bàoREFERENCES [Tên bảng tham chiếu] ( 5）。 Ví dụ, các tế bào có thể được tạo ra và nội bàoMục tiêuTổng số đếm và trung bình, diện tích, cường độ, hình dạng, chiều cao、Chiều rộng cũng như các loạikhácđọc khác nhau. Sử dụngTùy chọn lọcLoại bỏ các tế bào chết có thể đi xa hơnTối ưu hóađâyQuá trình và giảmÍt hơnSự cần thiết phải nhuộm với các tế bào sống hoặc toàn bộ tế bào. Ngoài ra, nhân tế bào nhuộm và đếmtế bàoKiểm tranhưViệc sử dụng thuật toán cho thấy hình ảnh truyền qua ánh sáng có thể được phân tích。

Sơ đồ 2. SẽTLThuật toán phân chia tế bào được áp dụng cho cácHeLaHình ảnh ánh sáng truyền qua tế bào.Trong Module Editor, bạn có thểđểquathiết lậpChọn bước sóng nguồn và cặp loại tế bào đại diệnTLThuật toán phân chia tế bào được cấu hình. tế bàoThuật toánMộtcó thểđểHiệu quảXác định trong hình ảnhcủaHeLavàCHOCác tế bào.

Sơ đồ2. TLPhân chia tế bào vàSau khi thiết lập bộ lọcSo sánh các hình ảnh chồng lên nhau. Vùng tối thiểu sẽĐặt thành150 μm2đểLọc ra死tế bào。

Sơ đồ 4. Sử dụngKiểm tra tế bàonhưPhân chiaModule cặpHình ảnh nhân tế bào huỳnh quangTiến hànhĐếm.Kiểm tra các tế bào để định lượng,LàmVớiHoechst 33342Đối với hạt nhânTiến hànhNhuộm. Tối ưu hóa định giá chiều rộng tối thiểu và tối đa và sức mạnh vượt quá các thông số nền cục bộ để chính xácNhận dạngtất cảChi tiếtNhân bào.Chi tiếtMàu xanh dương (trái), phân tíchTrang chủMàu vàng (hình bên phải).

Sơ đồ5. NhàHình ảnh đại diện của các tế bào,thiết lậpPhân tích hình ảnh mô-đun tùy chỉnhphương pháp。 xanh lamTrang chủĐại diện thông quaTLThuật toán phân chia tế bào được sử dụngTLBộ lọcTrang chủChe sàng lọcCác tế bào được tìm thấy, màu vàng đại diện cho kiểm tra bằng cách đếmnhưNhân tế bào được tìm thấy bởi thuật toán. Các bài kiểm tra cần thiết cho mô-đun tùy chỉnh có thể được thực hiện trong tab kiểm trathiết lập。Yêu cầuĐối tượng cần xác định đượcĐịnh nghĩavìcó thểquaTLPhân chia tế bàoThuật toánCác đối tượng để che giấu, chọn kiểm tra số lượngnhưTrang chủTrang chủXác định từngMục tiêuCác thuộc tính.

Sơ đồ6. NhàvàCHOHình ảnh của các tế bào vàỨng dụngTLMô-đun tùy chỉnh phân chia tế bàoSau khi tối ưu hóaPhân tích hình ảnhkết quả。Màu xanh huỳnh quangNhân được hiển thị trong màu xanh lam(Trái)，Trong ảnhphân tíchtrungMặt nạmàu vàng(bên phải)Các tế bào trong ánh sángMặt nạ màu xanh nhạt. thông quaKế hoạch 10x FluorVật kính ởHình ảnh XpressMicroChụp ảnh trên hệ thống và sử dụng mớiTLMô-đun tùy chỉnh cấu hình thuật toán phân chia tế bào phân tích hình ảnh.

Sơ đồ 7. Dựa trênTLPhân chia tế bào và nucleometerSố đối tượngSo sánh mô-đunHeLavàCHOTổng số tế bào của một tế bào. nhấn1：2Tỷ lệ pha loãng tế bào từ mỗi lỗ20，000Nồng độ tế bào bắt đầu.

kết luận

Sản phẩm MetaXpressTrình soạn thảo mô đun tùy chỉnhTLThuật toán phân chia tế bào có thểđểĐịnh lượng và phân tích hiệu quả nhiều loại và kích thước tế bào.Hình ảnh Xpress®Micro ConfocalChức năng phân chia tối ưu được hỗ trợ bởi hệ thống phân tích hình ảnh nội hàm cao có thể phân tích không liên quan đến nhóm huỳnh quangtế bàoHình thái học. Định lượng tế bào với hình ảnh ánh sáng truyền quacó thểLàm cho khả năng phát hiện của các nhà nghiên cứu linh hoạt hơn. đâyHướng dẫn ứng dụngPhương pháp mô tả cho thấyTLThuật toán phân chia tế bào có thể được sử dụng cho một số xét nghiệm, bao gồm nhưng không giới hạn ở tăng sinh, nghiên cứu độc tính tế bào và chuyển nhiễm.