Chuyển lớp tuyến tính polyethylene amin (MW25000)

Hạt chia organic (MW25000) là một sản phẩm thuốc thử chuyển đổi tức thời dựa trên polyethylene amin, có tác dụng chuyển đổi cao hơn. Polyetylamine là một polymer phân tử lớn hữu cơ có điện tích cation cao, dễ dàng liên kết các phân tử axit nucleic có điện tích âm để tạo thành một phức hợp có điện tích dương. Phức hợp này liên kết với anion bề mặt tế bào và xâm nhập vào tế bào thông qua endocytosis. Thuốc thử truyền nhiễm này có độc tính tế bào thấp, phù hợp với nhiều dòng tế bào. Nó đã được sử dụng rộng rãi trong protein tái tổ hợp,AAVSản xuất.

1. Cấu hình thuốc thử

Vật liệu cần thiết:

Nước khử ion hoặc nước sinh học trở lên,12 mol / LHạt chia organic (HCl）、10 mol / L*（Sản phẩm NaOH), một lần0.1~0.2μm PESBộ lọc vô trùng chân không, vô trùngSản phẩm HDPEHoặc chai lưu trữ polypropylene.

Cấu hình lưu trữ:

⑴ đặt2 gChuyển lớp tuyến tính polyethylene amin25,000Giải thể trong900 mLNước khử ion, khuấy trong khi (có thể được làm nóng đến khi60-80℃) Thêm giọt cạnh12 MAxit clohydric, điều chỉnh đểpH＜2.0, khuấy3Từ giờ trở lên đến tan rã;

⑵ Với10 M* Điều chỉnhpHĐến6.9~7.1；

⑶ Chuyển dung dịch vào thùng đo (hoặc cốc đo)Bên trong, thêm nướcĐịnh dung tới1 L；

⑷ Dùng một lần0.2 µmLọc chân không lọc khử trùng, tức là thu được1 mg / mlDịch lưu trữ;

⑸ Lưu trữ có thể được đóng gói theo yêu cầu, lưu trữ trong-20℃ có thể được lưu1năm; Lưu trữ dịch sau khi hòa tan không thể đông lạnh lại.

2. Quy trình vận hành truyền nhiễm

Tiêm chủng tế bào: Để cải thiện hiệu quả truyền nhiễm, nên tiêm chủng tế bào một ngày trước khi truyền để mật độ tế bào khi truyền.ở70~80%Thích hợp；

chuẩn bịDNA- Thuốc thử truyền nhiễmHợp chất:

⑴ đặtDNAThuốc thử, thuốc nhuộm và thuốc pha loãng được phục hồi đến nhiệt độ phòng trước;

⑵ Pha loãng một lượng vừa phải với môi trường không protein thích hợpDNA；

⑶ Theo tỷ lệ nhất định(Mỗi1 μg DNACần dùng1-5 μLthuốc nhét hậu môn suppositoires (Thêm thuốc thử sau khi pha loãng vào.DNAỐng nghiệm cho giải pháp(Không đảo ngược thứ tự thêm vào)Một bên.Nhẹ nhàngXoay, trộn đều.,Giữ nhiệt độ phòng10~25phútấp trứng。

Tế bào truyền nhiễm:

⑴ Khi truyền nhiễm mà không cần huyết thanh, môi trường tế bào được loại bỏ và thay thế bằng môi trường không có huyết thanh;

⑵ Thêm lượng vừa phải vào tế bàoDNA- Thuốc thử truyền nhiễmphức tạpNhẹ nhàng trộn đều.Chuyển đổi.6-8Sau một giờ, thay thế môi trường tươi nóng；

⑶ ở37℃、5% CO₂Tủ nuôi cấytrungTrồng trọt, sau khi truyền nhiễm24giờSự biểu hiện của gen chuyển tiếp có thể được phát hiện (thời gian xét nghiệm thích hợp có thể được tự xác định).

Điều kiện vận chuyển và lưu trữ

Điều khoản vận chuyển: Vận chuyển ở nhiệt độ phòng

Điều kiện bảo quản: Bột ở nhiệt độ phòng hoặc4℃ Bảo quản, ngày hết hạn2Nhiều năm.

Lưu ý

1. Đối với hầu hết các tế bào, mỗi1 μg DNASử dụng3 μLThuốc thử chuyển đổi có thể đạt được hiệu quả chuyển đổi cao hơn, cũng có thể thử mỗi1 μg DNASử dụng1,5 ~ 4 μLThuốc thử chuyển đổi được tối ưu hóa.

2. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, hãy mặc quần áo thử nghiệm và đeo găng tay dùng một lần để vận hành.

3. Sản phẩm này chỉ dành cho mục đích nghiên cứu khoa học.