Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW

Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW

Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW được thiết kế để phân lập nhanh và định lượng chính xác nhiều kháng thể. Kháng thể đơn dòng được thu thập và định lượng chính xác từ dịch nuôi cấy tế bào thu hoạch, mỗi phân tích mẫu có thể được thực hiện trong vòng chưa đầy 2 phút. Cột sắc ký này có thể thực hiện hơn 2.000 phân tích tiến hóa mà không cần tái tạo hoặc làm sạch.

Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW chứa đầy các hạt polymer methyl acrylic hydroxylated có độ liên kết chéo cao, cho phép sử dụng tốc độ dòng chảy cao trong phân tích sắc ký trong khi vẫn duy trì hiệu quả sắc ký, chiều rộng đỉnh và độ phân tách. Phối hợp protein A tái tổ hợp của nó là hexamer miền C đã được sửa đổi bởi codon. Phối hợp A protein tái tổ hợp tăng cường này được liên kết với vi cầu ma trận TSKgel 5PW thông qua sự gắn kết đa điểm, mang lại sự ổn định tuyệt vời trong dung dịch NaOH 0,1 mol/L.

Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW có phạm vi mẫu trên rộng và có thể xác định chính xác hiệu lực của kháng thể đơn dòng trong các giai đoạn xử lý khác nhau của nuôi cấy tế bào. Tỷ lệ rụng protein A thấp của nó làm cho nó lý tưởng cho việc thanh lọc kháng thể đơn dòng quy mô nhỏ để mô tả sơ bộ.

TSKgel Protein A-5PW là một cột sắc ký ái lực (AFC) được nhập khẩu vào các nhóm chức Protein A tái tổ hợp trên bề mặt chất độn TSKgel G5000PW của ma trận polymer ái nước xốp và được lấp đầy vào ống PEEK.

Vì Protein A có thể liên kết cụ thể với vùng Fc của IgG, Protein A có thể phân lập IgG từ hấp phụ cụ thể trong các mẫu như dịch thượng thanh nuôi cấy tế bào có chứa IgG và tạp chất. Ngoài ra, hiệu chuẩn được thực hiện thông qua nồng độ IgG đã biết

Đường cong, có thể định lượng nồng độ IgG trong một mẫu chưa biết.

Các phương pháp liên kết ma trận, nhóm chức và nhóm chức của cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW giống như TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F đóng gói số lượng lớn. Do đó, cột sắc ký này có hiệu suất lựa chọn tách tương tự như TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F.

Do kích thước hạt lớn và độ bền cơ học cao của ma trận, cột sắc ký này có thể được sử dụng trong điều kiện tốc độ dòng chảy cao hoặc trong phân tích thông lượng cao của IgG. Hơn nữa, do sự thay đổi dung môi gây ra hiệu ứng giãn nở của chất độn tương đối nhỏ, vì vậy nó có thể được thêm vào pha chảy.

Thêm dung môi hữu cơ.

Ngoài ra, cột sắc ký này còn sử dụng các nhóm chức có tính ổn định hóa học cao, kháng kiềm, vì vậy có thể sử dụng dung dịch nước NaOH để làm sạch. Khi làm sạch cột sắc ký bằng dung dịch nước NaOH, hãy tiêm 0,1 mol/L dung dịch nước NaOH 0,5 từ van mẫu

~ 2 ml.

2-2. Điều kiện tách tiêu chuẩn

Hầu hết IgG được hấp thụ bởi Protein A trong điều kiện trung tính (pH 7,0~7,5) và rửa sạch trong điều kiện axit (pH 2,5~3,5), do đó, khi sử dụng TSKgel Protein A-5PW để phân lập kháng thể, hai giải pháp pH khác nhau thường được sử dụng

Phương pháp tẩy rửa bậc thang.

Giai đoạn dòng chảy của hấp phụ và rửa thường sử dụng đệm phosphate, nhưng giai đoạn dòng chảy cũng có thể sử dụng đệm citrate có độ pH thấp. Sau khi sử dụng bộ đệm hấp phụ để cân bằng trước cột sắc ký (sử dụng cân bằng bộ đệm gấp 5 lần thể tích cột), lấy mẫu

Sau đó, chỉ IgG được hấp thụ vào cột. Sau đó, thay thế bằng pha lưu động rửa sạch, rửa sạch IgG.

Nồng độ muối cao có thể được thêm vào pha lỏng (ví dụ 0,15 mol/L NaCl, v.v.), mặc dù IgG kỵ nước cao dễ bị hấp thụ không đặc hiệu trên cột sắc ký, điều này cần được chú ý nhiều hơn. Ngoài ra, khi phân tích IgG kỵ nước cao, trong

Việc bổ sung dung môi hữu cơ hòa tan trong nước như ethanol hoặc axit arginic (0,2mol/L) vào dung dịch cân và tẩy rửa có thể ức chế hiệu quả sự hấp phụ không đặc hiệu. Tuy nhiên, các trường hợp trên có thể gây ra biến động cơ bản do thay thế pha dòng chảy, vì vậy trước khi lấy mẫu, vui lòng thêm

Đổi pha lưu động và tiến hành xác nhận.

Ví dụ về pha chảy

Ví dụ 1

Pha chảy A: 20 mmol/L dung dịch đệm natri phosphate, pH 7.4

pha chảy B: 20 mmol/L natri phosphate đệm, pH 2.5

Ví dụ 2

Pha chảy A: 20 mmol/L dung dịch đệm natri phosphate, pH 7,4/ethanol=90/10 (v/v)

Pha chảy B: 20 mmol/L dung dịch đệm natri phosphate, pH 2,5/ethanol=90/10 (v/v)

Ví dụ 3

Pha chảy A: 20 mmol/L dung dịch đệm natri phosphate, pH 7.4

Pha chảy B: 50 mmol/L dung dịch đệm natri citrate, pH 2.5

Cột sắc ký ái lực hiệu suất cao TSKgel Protein A-5PW Cột sắc ký có độ bền tốt và có thể được làm sạch bằng dung dịch kiềm, thích hợp để định lượng nhanh và chính xác cao IgG trong dung dịch nuôi cấy tế bào chứa nhiều tạp chất hơn. Ngoài ra, IgG có phạm vi định lượng rộng và có thể được sử dụng để phân tích các mẫu nồng độ thấp đến cao trong giai đoạn đầu nuôi cấy.

TSKgel Protein A-5PW Thông số kỹ thuật sản phẩm&Thông tin đặt hàng

Thông số kỹ thuật

dự ántham số

Khẩu độ100 nm

Kích thước hạt20 µm

pH ổn định2.5 - 12

Giới hạn xả1.000 kDa

Phân phối cơ sởProtein tái tổ hợp A (Hexamer miền C)

Mật độ phân phối0,9 - 1,0 g/L gel

Thông tin đặt hàng

Số sản phẩm (P/N)mô tảkích thước

0023483Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW4,6 mm ID x 3,5 cm Chiều dài

Cột sắc ký TSKgel Protein A-5PW

Công ty TNHH Hóa chất Nam Thông Haiao