Bộ dụng cụ nhuộm TRAP

2-8 ℃ tránh ánh sáng

1. Ngày hết hạn là ngày hết hạn được bảo quản theo các điều kiện yêu cầu trước khi bộ dụng cụ không được tháo ra.
2. Sau khi tháo niêm phong thuốc thử, xin hãy sử dụng càng sớm càng tốt!

3 tháng (Lưu ý: dịch ấp trứng bên trong được phối một lần, có hiệu lực trong vòng một tuần!)

kính hiển vi

1. Cắt lát sáp parafin
2. Cắt lát đông lạnh
3. phết tế bào, tấm leo
4. Xét nghiệm máu, vv

1 Kính hiển vi quang học
2. Xi lanh nhuộm
3. Pipette
4. Đồng hồ bấm giờ
5. Hộp đá

Nước tinh khiết

1. Trượt
2. Đầu hút
3. Găng tay dùng một lần

1. Dịch ấp trứng TRAP dễ thất bại. Luật này thích hợp để chọc vào da để bôi máu, sau khi sấy khô nên nhuộm kịp thời;
2. Khi nhuộm lát đông lạnh, nên giảm thời gian lát tiếp xúc với nhiệt độ phòng.
3. Mẫu cần tươi và cần được xử lý ngay sau khi lấy, nếu không nó sẽ ảnh hưởng đến hoạt động của enzyme.
Cố định mô cần được thực hiện trong tủ lạnh 4 ℃, thời gian không nên vượt quá 24h, nếu không hoạt động của enzyme sẽ bị suy yếu hoặc biến mất.
5. Nói chung không nên cắt lát bằng sáp parafin. Nếu cần cắt lát bằng sáp parafin, khi tổ chức được chôn bằng sáp parafin, nhiệt độ không nên cao hơn 56 ℃. Nên sử dụng sáp parafin có điểm nóng chảy 52~54 ℃ để ngâm sáp, thời gian ngâm sáp phải ngắn, nếu không hoạt động của enzyme sẽ bị suy yếu hoặc biến mất.
6. Cắt sáp parafin không cần cố định.

(Lưu ý: dịch ấp trứng bên trong là một lần phối xong, trong vòng một tuần có hiệu quả!)
Lưu ý: Các dịch làm việc khác xin vui lòng sử dụng trước khi pha chế tươi, sau khi pha chế lập tức sử dụng, một lần sử dụng xong, không thể đặt.

Xử lý nhuộm mẫu:
I. Xét nghiệm máu và tủy xương
1. Đẩy phim:
Lấy toàn bộ máu hoặc tủy xương 3ul trái và phải đặt trên slide, giữ slide đẩy ở góc 30 ° với slide, đặt ngay phía trước giọt máu, hơi di chuyển về phía sau để tiếp xúc với giọt máu, giọt máu tản ra dọc theo mép dưới của slide, sau đó trượt đều đặn về phía trước dọc theo mặt phẳng slide, cho đến khi giọt máu hoàn thành màng máu mới thôi. Đừng quá mỏng để không có quá ít tế bào hoặc quá dày để không quá chồng chéo.
2. Cố định:
Hãy để vết bẩn khô tự nhiên trong không khí, sau đó cho vào chất lỏng cố định A trong bộ dụng cụ này để cố định trong 2-3 phút, rửa bằng nước trong 30-60 giây.
3. ấp trứng:
Nước rửa xong còn chưa khô thì cho vào dịch ấp trứng để tránh ánh sáng trong 60 phút. Hiệu quả nhuộm màu sẽ kém đi sau khi quá khô.
4. Phục nhiễm:
Sau khi ấp xong, lấy nước ra rửa 1 phút, tiến hành tái nhiễm trước khi slide khô. Có thể dùng Tô Mộc Tố tái nhiễm 1 - 2 phút, hoặc dùng Giáp Cơ Lục tái nhiễm 2 - 3 phút, cả hai tùy ý chọn một là được.

Thứ hai, vết bẩn tế bào và leo núi tế bào
1. Cố định:
Đặt một vết bẩn tế bào hoặc miếng leo tế bào vào chất lỏng cố định A trong bộ dụng cụ này trong 2-3 phút và rửa bằng nước trong 30-60 giây.
2. ấp trứng:
Nước rửa xong còn chưa khô thì cho vào dịch ấp trứng để tránh ánh sáng trong 60 phút. Hiệu quả nhuộm màu sẽ kém đi sau khi quá khô.
3. Phục nhiễm:
Sau khi ấp xong, lấy nước ra rửa 1 phút, tiến hành tái nhiễm trước khi slide khô. Có thể dùng Tô Mộc Tố tái nhiễm 1 - 2 phút, hoặc dùng Giáp Cơ Lục tái nhiễm 2 - 3 phút, cả hai tùy ý chọn một là được.

III. Cắt lát đông lạnh
1. Nhiệt độ trở lại:
Đặt lát đông lạnh được bảo quản trong tủ lạnh -20 ℃, đặt trên kệ lát để giữ ấm trở lại trong 5-10 phút. Nó có thể được đặt trong một hộp ấp 37oC để làm ấm trở lại, hoặc giá cắt lát được đặt trong một hộp nhỏ và hộp được đặt trong một nồi tắm 37oC để làm ấm trở lại.
2. Thủy hợp:
Đem thái lát ấm lại, ngâm trong nước 1 - 2 phút.
3. Cố định:
Để lát khô tự nhiên trong không khí, rồi cho vào chất lỏng cố định trong bộ thuốc thử này cố định 2 - 3 phút, rửa bằng nước 30 - 60 giây.
4. ấp trứng:
Nước rửa xong còn chưa khô thì cho vào dịch ấp trứng để tránh ánh sáng trong 60 phút. Hiệu quả nhuộm màu sẽ kém đi sau khi quá khô.
5. Phục nhiễm:
Sau khi ấp xong, lấy nước ra rửa 1 phút, tiến hành tái nhiễm trước khi slide khô. Có thể dùng Tô Mộc Tố tái nhiễm 1 - 2 phút, hoặc dùng Giáp Cơ Lục tái nhiễm 2 - 3 phút, cả hai tùy ý chọn một là được.

IV. Cắt lát sáp parafin
1. Mất sáp:
Mất sáp trong xylene trong 5-10 phút. Đổi sang dùng xylene tươi mất sáp 5 - 10 phút.
2. Ngâm:
Ngâm ethanol khan trong 5 phút. Lại lần lượt dùng 90%, 70% cồn 2 phút.
3. Thủy hợp:
Ngâm trong nước cất 2 phút.
4. ấp trứng:
Trước khi khô cho vào dịch ấp trứng để tránh ánh sáng trong 60 phút. Hiệu quả nhuộm màu sẽ kém đi sau khi quá khô.
5. Phục nhiễm:
Sau khi ấp xong, lấy nước ra rửa 1 phút, tiến hành tái nhiễm trước khi slide khô. Có thể dùng Tô Mộc Tố tái nhiễm 1 - 2 phút, hoặc dùng Giáp Cơ Lục tái nhiễm 2 - 3 phút, cả hai tùy ý chọn một là được.

Phân tích kết quả:
Phản ứng dương tính là các hạt màu đỏ tươi hoặc đỏ thẫm, được định vị trong bào tương.

Một tế bào cảm ứng không thành công?
Chất lượng cytokine rất quan trọng khi các dòng tế bào hoặc các tế bào BMM nguyên thủy tạo ra các tế bào phá xương. Điều chỉnh các điều kiện cảm ứng, tăng nồng độ RANKL hoặc cố gắng thêm M-CSF có thể được xem xét khi hiệu quả cảm ứng không tốt.

2. Làm thế nào để đánh giá các tế bào dương tính?
Thông thường không thông qua biến hóa hình thái thuyết minh, tế bào RAW phi thường hình thái phi thường đa dạng, biến hóa hình thái cũng không thể nói rõ vấn đề. Thông thường cho rằng đa nhân cộng thêm TRAP dương tính mới có thể nói là đa nhân phá xương tế bào.

1.Guiping Chen et al.
Bergapten ức chế sinh xương do RANKL gây ra và loãng xương do cắt buồng trứng gây ra thông qua ức chế các con đường tín hiệu NF-κB và JNK
Truyền thông nghiên cứu sinh hóa và sinh vật lý 2019

2.Wen-Yong Fei et al.
Magnolol ngăn ngừa mất xương do cắt buồng trứng gây ra bằng cách ức chế sự phát triển xương thông qua ức chế các con đường protein kinase được kích hoạt bởi yếu tố hạt nhân κB và mitogen
Tạp chí Y học phân tử quốc tế 2019