TK10 (Tế bào ung thư thận người)

TK10 (tế bào ung thư thận người) là một tế bào dán tường có mô có nguồn gốc từ thận, biểu hiện hình thái tế bào như: tế bào biểu mô, điều kiện nuôi cấy là: RPMI-1640, 95%; FBS，5%。

II. Xử lý tế bào sau khi tiếp nhận

1) Sau khi nhận được tế bào, 75% chai khử trùng rượu đặt chai T25 ở nhiệt độ phòng khoảng 1h, nếu bạn thấy chai nuôi cấy bị hỏng, tràn dịch và ô nhiễm tế bào, vui lòng liên hệ với chúng tôi kịp thời sau khi chụp ảnh.

2) Vui lòng xác nhận trạng thái tế bào dưới kính hiển vi 4 hoặc 5X, trong khi chụp ảnh các tế bào vừa nhận được (10 × 20 × mỗi 2-3 và hình ảnh bên ngoài của chai nuôi cấy được lưu giữ, làm cơ sở cho trạng thái tế bào khi nhận được sau khi bán.

3) tế bào dán tường: tế bào được đặt ở nhiệt độ phòng 1h, dưới kính hiển vi để xem sự phát triển của tế bào và tình trạng dán tường, một số tế bào dán tường trong quá trình vận chuyển nhanh sẽ rơi ra và rơi ra sau khi rơi ra do rung động. Nếu mật độ tăng trưởng của tế bào dưới 60% được quan sát dưới gương, bạn có thể loại bỏ môi trường truyền dịch trong chai nuôi cấy (nếu có tế bào không dán tường cần thu hồi ly tâm, treo lại vào chai nuôi cấy ban đầu), thêm vào môi trường nuôi cấy đầy đủ mới được xây dựng 6-8mL, đặt vào hộp nuôi cấy tế bào để tiếp tục nuôi cấy. Nếu mật độ tăng trưởng tế bào đạt trên 70% -80%, có thể tiến hành xử lý di truyền tế bào. Trong quá trình truyền thừa, nếu các tế bào bị tách ra do rung động vận chuyển cần được thu hồi ly tâm.

4) phương pháp vận chuyển tế bào rơi ra trên đường vận chuyển: thu thập các tế bào rơi ra sau khi ly tâm được làm sạch, với PBS làm sạch một lần, ly tâm được làm sạch, trong ống ly tâm thêm 1ml enzyme thổi tiêu hóa trong khoảng 20 giây, cộng với chơi toàn bộ môi trường chấm dứt tiêu hóa sau khi ly tâm được mở lại, các tế bào dán tường còn lại được vận hành theo phương pháp truyền tế bào dán tường bình thường.

5) Ghi chú: Môi trường vận chuyển (môi trường truyền dịch) không còn có thể được sử dụng để nuôi dưỡng tế bào, xin vui lòng thay thế bằng một môi trường đầy đủ mới được điều chế theo hướng dẫn nuôi dưỡng tế bào điều kiện để nuôi dưỡng tế bào. Đề xuất truyền gen đầu tiên sau khi nhận được tế bào T25 Cultural Bottle 1: 2.

III. Hoạt động nuôi cấy tế bào

1) Tế bào hồi sức: nuôi cấy tế bào sau đây để điều trị đông lạnh chỉ nhằm mục đích tham khảo, các bước hoạt động cụ thể là chính với hướng dẫn sản phẩm, ống đông lạnh chứa 1 mL đình chỉ tế bào trong bồn tắm nước 37 ℃ lắc và tan băng nhanh chóng, cộng với 4 mL môi trường trộn đều. Ly tâm 3 phút trong điều kiện 1000 vòng/phút, bỏ chất lỏng, thêm 1-2 mL môi trường và thổi đều. Sau đó, tất cả đình chỉ tế bào sau đó được nuôi cấy qua đêm bằng cách thêm vào một chai nuôi cấy với một lượng vừa phải môi trường (hoặc bằng cách thêm đình chỉ tế bào vào đĩa 6 cm, thêm khoảng 4 mL để chơi môi trường đầy đủ, nuôi cấy qua đêm). Ngày thứ ba thay dịch và kiểm tra mật độ tế bào.

2) Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt 80% -90%, nuôi cấy di truyền có thể được thực hiện.

a) Bỏ nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa ion canxi, magiê 1-2 lần.

b) Thêm 1 mL dịch tiêu hóa (0,25% Trypsin-0,02-TA) trong chai nuôi cấy, làm cho dịch tiêu hóa thấm vào tất cả các tế bào, đặt chai nuôi cấy trong 37 ℃ hộp tiêu hóa 1-3 phút (tùy thuộc vào tiêu hóa tế bào), sau đó dưới kính hiển vi quan sát tiêu hóa tế bào, nếu hầu hết các tế bào tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều hành, sau khi nhấn một vài chai nuôi cấy và thêm 2-3ml chơi môi trường đầy đủ để chấm dứt tiêu hóa.

c) Nhẹ nhàng đánh đều và nạp vào ống ly tâm vô trùng, 1000 vòng/phút ly tâm 5 phút, bỏ đi chất lỏng trong, bổ sung 1-2 ml dung dịch nuôi cấy và thổi đều.

d) Truyền dịch tế bào được chia thành đĩa hoặc chai mới với môi trường 8 mL theo tỷ lệ 1: 2 và được nuôi cấy trong môi trường nuôi cấy.

Chú ý di truyền tế bào dán tường:

Tôi phải rửa PBS một lần.

Tế bào L quan sát thời gian làm chủ nhiều lần, không nên dừng tiêu hóa và thổi xuống khi tế bào chưa rụng cơ bản, như vậy tế bào dễ phân hoá và chết hơn.

Đừng tiếp tục đánh vào tế bào

3) Đóng băng tế bào: Khi tế bào phát triển tốt, có thể đóng băng tế bào. Ví dụ như chai T2 dưới đây.

a) Thu thập chất lỏng nuôi cấy tế bào và tế bào, nạp vào ống ly tâm vô trùng, ly tâm trong điều kiện 1000 vòng/phút trong 4 phút, loại bỏ chất lỏng, làm sạch bằng PBS, loại bỏ PBS, tiến hành đếm tế bào.

b) Căn cứ vào số lượng tế bào để thêm dung dịch đông lạnh tế bào không huyết thanh, làm cho mật độ tế bào 1 × 10 ^ 6~1 × 10 ^ 7/mL, nhẹ nhàng trộn đều, mỗi ống đông lạnh lưu trữ 1 mL tế bào đình chỉ, chú ý đến ống đông lạnh để đánh dấu tốt.

c) Đặt ống lưu trữ đông lạnh vào tủ lạnh -80 ℃, sau 24 giờ chuyển sang lưu trữ nitơ lỏng. Ghi lại vị trí ống lưu trữ đông lạnh để lấy lần sau.

IV. Chú ý bồi dưỡng

1) Các tế bào có vấn đề để tái phát

a) Các vấn đề khác nhau gặp phải trong quá trình vận chuyển tế bào, mất tế bào, vỡ chai, rò rỉ chất lỏng nuôi cấy nghiêm trọng, v.v., tái phát;

b) Vấn đề ô nhiễm tế bào, vui lòng gửi cho chúng tôi kết quả thí nghiệm thực tế trong vòng 3 ngày sau khi nhận được sản phẩm, xác minh và gửi lại;

c) 2 giờ sau khi các tế bào được vận chuyển ở nhiệt độ bình thường, 2 ngày sau khi hồi sinh các tế bào được vận chuyển bằng băng khô, phần lớn các tế bào không sống sót, (cần cung cấp hình ảnh thực tế và rõ ràng về trạng thái tế bào), tái phát;

d) Băng khô lưu trữ đông lạnh vận chuyển các tế bào 2 ngày sau khi hồi sức hoặc vận chuyển các tế bào ở nhiệt độ bình thường đứng 2 giờ và chưa mở, xuất hiện ô nhiễm, tái phát;

e) vấn đề hoạt động của tế bào, xin vui lòng gửi cho chúng tôi kết quả thí nghiệm thực tế trong vòng 7 ngày nhận được sản phẩm, xác định sức sống của tế bào bằng phương pháp nhuộm màu xanh Taizhang, và hình ảnh tế bào hàng ngày, xác minh sau khi tái phát;

f) Ngày nhận tế bào và ngày 2,3 xin vui lòng chụp ảnh, 3 ngày không thông báo, được coi là sản phẩm đạt tiêu chuẩn. Trong vòng 4 - 7 ngày xảy ra vấn đề cần cung cấp hình ảnh 3 ngày trước khi nhận được tế bào và hình ảnh tế bào xảy ra vấn đề và các bước chi tiết liên quan đến thao tác tế bào, và giao tiếp với nhân viên kỹ thuật, do nhân viên kỹ thuật phán định là trách nhiệm của chúng tôi, tái phát.

2) Trường hợp các tế bào có vấn đề và không tái phát

a) Hoạt động của khách hàng gây ô nhiễm tế bào, không tái phát;

b) lỗi hoạt động nghiêm trọng của khách hàng gây ra tình trạng tế bào xấu, không tái phát;

c) Trạng thái tế bào không tốt, không tái phát do hệ thống nuôi cấy tế bào không được khuyến nghị của chúng tôi;

d) Tình trạng tế bào kém, không cung cấp hình ảnh thực tế và rõ ràng về tình trạng tế bào trong 3 ngày đầu nuôi cấy, không tái phát;

e) Nuôi cấy tế bào khi được xử lý khác gây ra vấn đề tế bào, không tái phát;

f) Thời gian nhận tế bào và phát hiện vấn đề giao tiếp với nhân viên dịch vụ khách hàng lớn hơn 7 ngày, không tái phát;

g) Tùy từng trường hợp

V. Chú ý

Tất cả các tế bào động vật được coi là có khả năng gây nguy hiểm sinh học, phải được vận hành trong bảng an toàn sinh học thứ cấp và chú ý bảo vệ, tất cả các chất thải và dụng cụ đã tiếp xúc với tế bào này cần được khử trùng để loại bỏ.

2. Nên luôn sử dụng găng tay bảo hộ, quần áo và đeo mặt nạ bảo hộ khi hồi sức các tế bào đông lạnh. LƯU Ý: Các ống lưu trữ đông lạnh bị rò rỉ khi ngâm trong nitơ lỏng và sẽ từ từ được lấp đầy bằng nitơ lỏng. Khi tan băng, việc chuyển đổi nitơ lỏng thành pha khí có thể khiến thùng chứa phát nổ hoặc thổi bay nắp của nó bằng lực nguy hiểm, tạo ra các mảnh vụn bay để gây thương tích cho người.

3.Tế bào này chỉ dùng cho nghiên cứu khoa học!Sách hướng dẫn chỉ cung cấp tham khảo lấy sách hướng dẫn thực tế đến hàng làm chuẩn!