Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang cho lợn Circular Virus Loại 1 Phương pháp nhuộm

Virus vòng tròn lợnBộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang Loại 1 Phương pháp nhuộm
Circovirus lợn 1 (PCV-1)

Sản phẩm và tính năng:
Bộ dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang cho lợn Circular Virus Loại 1 Phương pháp nhuộmVới các tính năng sau:

1. Bật và chạy, người dùng chỉ cần cung cấp mẫu virus.

2. Chất dẫn độc quyền được thiết kế theo trình tự bảo tồn theo phương pháp nhuộm virus loại 1 vòng tròn lợn, không có phản ứng chéo với các virus liên quan.

3. Độ nhạy có thể đạt tới hàng trăm bản sao/phản ứng.

4. Phát hiện PCR định lượng huỳnh quang một ống để tránh ô nhiễm tiếp theo.

5. Bộ dụng cụ này là đủ cho 50 lần PCR định lượng huỳnh quang của hệ thống phản ứng 20μL.

6. Sản phẩm này chỉ thích hợp cho nghiên cứu khoa học và không thể được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng.

Vận chuyển và bảo quản： Vận chuyển nhiệt độ thấp,-20 ℃ Bảo quản, có giá trị trong một năm。

Thuốc thử tự chuẩn bị： Mẫu DNA, 10 × ROX (theo quyết định của mô hình, cụ thể xem phương pháp sử dụng).

Cách sử dụng Một,Pha loãngKiểm soát dương tính PCR(với10E2-10E7 bản sao/μL này 6 10x pha loãng ví dụ)

Lưu ý: Do nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn rất cao, các hoạt động pha loãng sau đây phải được thực hiện trong khu vực độc lập, không được làm ô nhiễm mẫu hoặc các thành phần khác của bộ dụng cụ này). Để tăng sự ổn định của sản phẩm và tránh lây lan các mầm bệnh truyền nhiễm, sản phẩm này không cung cấp các mẫu sống để kiểm soát dương tính, chỉ các mảnh DNA có thể được sử dụng trực tiếp làm kiểm soát dương tính.

2. Đánh dấu 6 ống ly tâm, tương ứng là 7, 6, 5, 4, 3, 2.

3. Sử dụng đầu súng có lõi để thêm 45 μL huỳnh quang PCR mẫu đặc biệt pha loãng dung dịch (tốt nhất là sử dụng đầu súng có lõi, dưới cùng).

Thêm 5 μL 1 × 10E8 bản sao/μL kiểm soát dương tính vào ống số 7, chấn động đầy đủ trong 1 phút, thu được 1 × 10E7 bản sao/μL kiểm soát dương tính. Cứ để đá chờ.

Thay đầu súng, cho vào ống số 6 5 μL 1 × 10E7 bản sao/μL đối chiếu dương tính (thu được từ pha loãng ở bước trên), chấn động đầy đủ trong 1 phút, thu được 1 × 10E7 bản sao/μL đối chiếu dương tính. Cứ để đá chờ.

Thay đầu súng, thêm vào ống số 5 bản sao 5μL 1 × 10E6/μL đối chiếu dương tính vào ống số 5, chấn động đầy đủ trong 1 phút, được 1 × 10E5 bản sao/μL đối chiếu dương tính. Cứ để đá chờ.

7. Lặp lại thao tác trên cho đến khi có được đối chiếu dương tính với 6 độ pha loãng. Cứ để đá chờ.

II. MẫuChuẩn bị DNA：

8. Nếu có N mẫu, N+2 chiết xuất phải được thiết lập, nhiều hơn là PC (mẫu chuẩn bị đối chứng dương tính),

Một làNC (Kiểm soát chuẩn bị mẫu âm tính). Số 4 (nồng độ 1 × 10E4 bản sao/μL, 10μL tương đương với 10.000 bản sao) hoặc số 5 (nồng độ 1 × 10E5 bản sao/μL, 10μL tương đương với 100.000 bản sao) có thể được chuẩn bị với 10μL cộng với một lượng nước nhất định làm cho tổng thể tích giống như thể tích yêu cầu cho mỗi lần chuẩn bị như một PC. Thêm nước như NC. Nếu mẫu 200 μL là cần thiết cho mỗi lần chuẩn bị, thì thể tích của PC và NC cũng phải là 200 μL bởi μL.

9. Tinh khiết mẫu bằng phương pháp tự chọnDNA， Bộ dụng cụ này tương thích với hầu hết các bộ dụng cụ lấy DNA virus trên thị trường. Bạn cũng có thể chọn mua vi - rút một ống của công ty này hoặc vi - rút cột nâng cấp của nó. Bộ dụng cụ này được tặng miễn phí 15 lần cho virus một ống DNAout。

III. Cài đặtPhản ứng qPCR (hệ thống 20μL, được thực hiện trong buồng chuẩn bị mẫu):

10. Nếu chỉ làm1 lần lặp lại, đánh dấu N+9 ống PCR, trong đó N+2 được sử dụng cho N+2 thu được từ bước trước

mẫu,1 cho kiểm soát PCR âm tính và 6 cho kiểm soát PCR dương tính. Nếu lặp lại 2-3 lần, số lượng cài đặt phản ứng sẽ tăng lên 2 hoặc 3 lần.

11. Nhấn vào bảng trong ống đánh dấu để thêm các thành phần (bảng này chỉ liệt kê một lần lặp lại. Ống mẫu và kiểm soát âm tính được thiết lập sau khi kiểm soát dương tính được thiết lập, và các mẫu kiểm soát dương tính phải đợi cho đến khi tất cả các ống được đậy nắp để lưu trữ và thêm vào cuối cùng):

Ghi chúChỉ các dụng cụ ABI7500, 7700 và 7900 yêu cầu ROX làm đối chứng, các dụng cụ PCR huỳnh quang khác (ví dụ: iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 LightCycler480) không yêu cầu ROX, thay thế bằng nước.

12. Sau khi đậy nắp, PCR được thực hiện theo các thông số dưới đây (các thông số PCR cụ thể có thể được tối ưu hóa theo các thiết bị khác nhau).

13. Thu thập dữ liệu

Các hoạt động cụ thể được thực hiện theo quy trình được đề xuất bởi các công cụ được sử dụng. Chất nhuộm huỳnh quang chứa trong sản phẩm này không kết hợpPhổ hấp thụ tối đa là 471 nm khi DNA, 500 nm khi kết hợp DNA và 530 nm khi phát xạ tối đa. Việc thu thập tín hiệu có thể được thiết lập ở các bước phức tạp hoặc mở rộng.

4. Xử lý dữ liệu:

14. Nếu bộ dụng cụ này được sử dụng để kiểm tra định lượng, giá trị log của nồng độ kiểm soát dương tính là trục ngang và giá trị Ct là trục dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Sau đó, giá trị Ct của mẫu được tính từ đường cong tiêu chuẩn để tính toán giá trị log của nồng độ DNA của mẫu và sau đó tính toán nồng độ của nó.

15. Nếu bộ dụng cụ này được sử dụng để kiểm tra định tính và chỉ đánh giá dương tính hoặc âm tính, Ct kiểm soát âm tính phải lớn hơn hoặc bằng 40. Kiểm soát dương tính phải có sự tăng trưởng logarit huỳnh quang với đường cong khuếch đại điển hình và giá trị Ct phải nhỏ hơn hoặc bằng 30. Đối với mẫu thử nghiệm, âm tính nếu Ct lớn hơn hoặc bằng 40 và dương tính nếu nhỏ hơn hoặc bằng 35. Lặp lại nếu nó nằm trong khoảng 35-40. Giá trị Ct của thí nghiệm lặp lại là âm tính nếu lớn hơn hoặc bằng 40 và dương tính nếu nhỏ hơn 40.

Chỉ dùng cho nghiên cứu khoa học, không được dùng để kiểm tra lâm sàng và sử dụng điều trị.